4 курс / Акушерство и гинекология / Кадырова_Л_В_Дифференцировка_Т_лимфоцитов_в_динамике_беременности

51

CD45RA+CD62Lклеток в сравниваемых группах не имело достоверных различий (p>0,05 в обоих случаях).

Таблица 3.2.1. Содержание центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-

дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD4+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности

	Показатель	CD45RA-CD62L+	CD45RA-CD62L-	CD45RA+CD62L-
	%	(Tcm)	(Tem)	(Temra)
	Группа
	Небеременные	39,75±1,53	23,11±1,58	2,48±0,40
	доноры (n=29)
	1 триместр	37,58±1,50	21,76±1,89	2,56±0,41
	(n=41)
	2 триместр	33,97±1,73**	20,82±1,69	3,19±0,53
	(n=39)
	3 триместр	34,13±1,41***	23,36±2,99	2,75±1,76
	(n=35)
	В скобках дано число	проведенных исследований.

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (** - p<0,02;*** - p<0,01).

Сравнение средних значений анализируемых показателей у беременных женщин 3 триместра гестации и небеременных доноров показало, что к концу гестационного процесса в популяции периферических CD4+ клеток сохранялся достоверно сниженный уровень Tcm клеток (p<0,01), при отсутствии достоверных отличий показателей содержания Tem и Temra клеток (p>0,05 в обоих случаях). Нами не было выявлено статистически значимых различий в содержании центральных, претерминально-дифференцированных и терминальнодифференцированных клеток памяти в популяции Т-хелперов периферической крови в зависимости от срока беременности в 1, 2 и 3 триместрах гестации (р>0,05

52

во всех случаях).

Наиболее выраженные изменения в содержании клеток памяти в динамике гестационного процесса при неосложненной беременности отмечались нами в популяции периферических CD8+ лимфоцитов.

В таблице 3.2.2. представлены данные по содержанию центральных (Tcm), претерминально-дифференцированных (Tem) и терминальнодифференцированных (Temra) клеток памяти в популяции периферических цитотоксических Т-лимфоцитов в динамике неосложненной беременности.

Таблица 3.2.2. Содержание центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-

дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD8+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности

	Показатель	CD45RA-CD62L+	CD45RA-CD62L-	CD45RA+CD62L-
	%	(Tcm)	(Tem)	(Temra)
	Группа
	Небеременные	12,26±0,89	25,75±1,72	28,83±2,44
	доноры (n=36)
	1 триместр	11,24±0,69	21,36±1,42*	29,23±1,89
	(n=54)
	2 триместр	8,82±0,57*** ххх	19,06±1,45***	32,22±2,49
	(n=35)
	3 триместр	10,79± 4,36	23,45± 2,76 v	28,17±1,95
	(n=43)
	В скобках дано число проведенных исследований.

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*- p<0,05;*** - p<0,01);

х - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 1 триместра гестации (ххх - p<0,01);

v - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 2 триместра гестации (v - p<0,05).

53

При анализе данных содержания клеток памяти, находящихся на различных этапах дифференцировки, в популяции CD8+ лимфоцитов периферической крови нами было установлено, что в 1 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности достоверно снижался уровень претерминально-дифференцированных клеток по сравнению с показателями в группе небеременных доноров (p<0,05). Содержание центральных и терминальнодифференцированных клеток памяти в популяции периферических ЦТЛ в сравниваемых группах не имело достоверных различий (p>0,05 в обоих случаях). Изменения, отмеченные нами в 1 триместре беременности в пуле периферических ЦТЛ в виде достоверного снижения уровня Tem клеток, сохранялись и во 2 триместре гестации, но были более выраженные при сравнении с аналогичным показателем небеременных доноров (p<0,01). Кроме того, во 2 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности наблюдалось достоверное снижение содержания центральных клеток памяти при сравнении, как с группой доноров, так и с группой беременных женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (p<0,01 в обоих случаях). Уровни претерминально-дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток в популяции CD8+ лимфоцитов периферической крови во 2 триместре неосложненной беременности достоверно не отличались от аналогичных показателей 1 триместра неосложненной беременности (p>0,05 в обоих случаях). Нами не было выявлено статистически значимых отличий в содержании клеток памяти, находящихся на различных этапах дифференцировки, в 3 триместре гестации в популяции периферических CD8+ лимфоцитов по сравнению c группой небеременных доноров (р>0,05 во всех случаях). Однако в 3 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности в популяции периферических ЦТЛ достоверно повышался уровень Tem клеток (p<0,05), при отсутствии достоверных различий показателей содержания Tcm и Temra клеток относительно аналогичных параметров группы женщин 2 триместра гестации (p>0,05 в обоих случаях).

54

Для оценки состояния иммунной системы дополнительно к стандарту иммунологического обследования беременной женщины в динамике гестационного процесса рекомендуется проводить оценку характера дифференцировочного процесса Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови. Для этого мы провели ретроспективный анализ уровня наивных клеток, центральных, претерминально-диффренцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях CD4+ и CD8+ лимфоцитов периферической крови у 85 женщин с неосложненным течением беременности лонгитудинально в 1 триместре (5-8 недель гестации), 2 триместре (16-20 недель гестации) и 3 триместре (28-32 недели гестации). На основании полученных данных был произведен расчет нормативных показателей содержания наивных клеток (Tn), центральных (Tcm), претерминальнодифференцированных (Tem) и терминально-дифференцированных (Temra) клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т- лимфоцитов на основе 95% доверительного интервала. Полученные данные представлены в таблицах 3.2.3., 3.2.4., 3.2.5.

Таблица 3.2.3. Нормативные значения содержания наивных клеток, центральных,

претерминально- и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов в 1 триместре неосложненной беременности

Показатель, %	CD4+ лимфоциты	CD8+ лимфоциты
CD45RA+CD62L+ (Tn)	35,7-42,7	33,1-43,4
CD45RA-CD62L+ (Tcm)	34,1-40,7	8,4-11,5
CD45RA-CD62L- (Tem)	17,6-26,1	17,1-24,4
CD45RA+CD62L- (Temra)	1,6-3,4	26,4-35,7

55

Таблица 3.2.4. Нормативные значения содержания наивных клеток, центральных,

претерминально- и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов во 2 триместре неосложненной беременности

Показатель, %	CD4+ лимфоциты	CD8+ лимфоциты
CD45RA+CD62L+ (Tn)	37,3-46,9	34,9-45,0
CD45RA-CD62L+ (Tcm)	30,5-37,5	7,7-10,0
CD45RA-CD62L- (Tem)	17,4-24,2	16,1-22,0
CD45RA+CD62L- (Temra)	2,1-4,3	27,2-37,3

Таблица 3.2.5. Нормативные значения содержания наивных клеток, центральных,

претерминально- и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов в 3 триместре неосложненной беременности

Показатель, %	CD4+ лимфоциты	CD8+ лимфоциты
CD45RA+CD62L+ (Tn)	36,2-44,3	32,6-41,9
CD45RA-CD62L+ (Tcm)	33,8-39,4	8,5-13,0
CD45RA-CD62L- (Tem)	17,8-25,1	20,7-26,8
CD45RA+CD62L- (Temra)	1,9-3,3	24,0-32,6

Таким образом, при неосложненной беременности в периферической крови женщин изменения в содержании клеток памяти определялись снижением содержания центральных клеток памяти в популяции ЦТЛ во 2 триместре и Т- хелперов во 2 и 3 триместрах гестации, а также снижением уровня

56

претерминально-дифференцированных клеток памяти в популяции ЦТЛ в 1 и 2 триместрах гестации и повышением пула этих же клеток в 3 триместре гестации относительно 2 триместра беременности.

3.3. Особенности дифференцировки Т-хелперов и цитотоксических Т- лимфоцитов периферической крови женщин с развившимся впоследствии

самопроизвольным выкидышем

Развитие невынашивания беременности сопровождается повышением проницаемости плаценты и ведет к усиленному поступлению антигенов плода в кровоток беременной женщины, что может определять дифференцировку клеток памяти [9, 184]. Переход клеток на новую стадию дифференцировки изменяет их функциональные свойства [105]. Нарушение дифференцировки лимфоцитов может вести к изменению процессов иммунорегуляции, определяя неадекватный иммунный ответ матери на антигены плода, способствуя формированию патологии беременности [171, 9, 182, 47]. Для уточнения иммунных механизмов развития самопроизвольного выкидыша нами было проведено исследование особенностей дифференцировки Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови женщин с неоложненным на момент обследования течением беременности 1 триместра гестации и развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем.

В таблице 3.3.1. представлены данные по содержанию наивных клеток (Tn), центральных (Tcm), претерминально-дифференцированных (Tem) и терминальнодифференцированных (Temra) клеток памяти в популяции периферических Т- хелперов женщин с неосложненным на момент обследования течением беременности 1 триместра гестации и развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем.

Анализ данных содержания клеток, находящихся на различных этапах дифференцировки, в популяции периферических CD4+ лимфоцитов в группе женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем выявил

57

достоверное повышение уровня наивных клеток и терминальнодифференцированных клеток памяти и достоверное снижение содержания центральных клеток памяти (p<0,05 во всех случаях) по сравнению с аналогичными показателями группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации. Содержание претерминальнодифференцированных клеток в популяции периферических Т-хелперов в сравниваемых группах не имело достоверных различий (p>0,05).

Таблица 3.3.1. Содержание наивных клеток, центральных, претерминально-

дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD4+ лимфоцитов беременных женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем

		Неосложненное течение	Развившийся выкидыш
	Показатель (%)	беременности
			(n=9)
		(n=54)
	CD45RA+CD62L+ (Tn)	38,98±1,58	46,99±2,93*
	CD45RA-CD62L+ (Tcm)	37,58±1,50	27,74±3,57*
	CD45RA-CD62L- (Tem)	21,76±1,89	23,27±2,60
	CD45RA+CD62L- (Temra)	2,56±0,41	13,11±4,28*

Вскобках дано число проведенных исследований.

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (*- p<0,05).

Втаблице 3.3.2. представлены данные по содержанию наивных клеток (Tn), центральных (Tcm), претерминально-дифференцированных (Tem) и терминальнодифференцированных (Temra) клеток памяти в популяции периферических цитотоксических Т-лимфоцитов женщин с неосложненным на момент обследования течением беременности 1 триместра гестации и развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем.

58

Таблица 3.3.2. Содержание наивных клеток, центральных, претерминально-

дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD8+ лимфоцитов беременных женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем

			Неосложненное течение	Развившийся выкидыш
	Показатель (%)		беременности
				(n=9)
			(n=54)
	CD45RA+CD62L+	(Tn)	38,18±1,97	38,98±5,15
	CD45RA-CD62L+	(Tcm)	11,24±0,69	8,85±2,61
	CD45RA-CD62L- (Tem)		21,36±1,42	15,00±2,70
	CD45RA+CD62L- (Temra)		29,23±1,89	37,22±2,90*

Вскобках дано число проведенных исследований.

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (*- p<0,05).

Как видно из приведенных результатов, в группе женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем в популяции периферических CD8+ лимфоцитов достоверно повышалось содержание терминальнодифференцированных клеток памяти (p<0,05) при сравнении с аналогичным параметрам группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации.

Нами не было выявлено статистически значимых отличий в содержании наивных клеток, центральных и претерминально-дифференцированных клеток памяти в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови в группе женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем по сравнению с соответствующими показателями группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (р>0,05 во всех случаях) (таблица

3.3.2.).

59

Для оценки возможности использования показателя содержания наивных лимфоцитов с фенотипом CD45RA+CD62L+ в популяции периферических Т- хелперов для прогнозирования самопроизвольного выкидыша у беременных женщин мы провели ретроспективный анализ уровня Tn клеток у 67 беременных женщин 1 триместра гестации. На основании полученных данных был разработан способ прогнозирования самопроизвольного выкидыша по относительному содержанию CD45RA+CD62L+ лимфоцитов в популяции Т-хелперов периферической крови у беременных женщин 1 триместра гестации (положительное решение о выдаче патента от 14 мая 2014г). Способ основан на определении относительного (процентного) содержания CD45RA+CD62L+ клеток в CD4+ лимфоцитарном гейте на проточном цитометре, и при его значении равном или более 46,7% прогнозируют развитие самопроизвольного выкидыша. По заявленному способу у 17 беременных прогнозировался самопроизвольный выкидыш, прогноз подтвердился у 10 беременных женщин. Таким образом, точность способа – 85,1%, чувствительность – 76,9%, специфичность – 88,9%. Преимуществами заявляемого способа являются: высокая точность, хорошая воспроизводимость метода, простота в интерпретации результатов обследования.

Способ позволяет в определенные сроки беременности (6-12 недель гестации) прогнозировать самопроизвольный выкидыш у беременных женщин, как при наличии клинических проявлений данной патологии, так и при ее отсутствии на момент обследования, что дает возможность своевременно выбрать правильную тактику ведения женщин с риском развития данной акушерскогинекологической патологии и избежать неблагоприятных исходов беременности.

Полученные данные представлены на рисунке 3.3.1.

			Ra_62L_				60	A
								1
				1
	100						70
							60
	80
Sensitivity							50	<=46,7
	60
								Sens: 88,9
							40
								Spec: 76,9
	40
							30
	20						20
	0						10
	0	20	40	60	80	100	0
			100-Specificity				1	0
	Показатель					Чувствительность, %		iСпецифичность, %
	CD45RA+CD62L+						76,9	88,9
	лимфоциты
	Рис. 3.3.1. ROС - анализ показателя CD45RA+CD62L+ лимфоцитов в популяции
	Т-хелперов периферической крови беременных женщин 1 триместра гестации с
		развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем

Таким образом, в периферической крови женщин с неосложненным на момент обследования течением беременности и развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем направленность дифференцировки, как в популяции CD4+ лимфоцитов, так и в популяции CD8+ лимфоцитов, характеризовалась увеличением уровня терминально-дифференцированных клеток памяти по сравнению с показателями группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации. Кроме того, у женщин с развившемся впоследствии самопроизвольным выкидышем в популяции периферических Т-хелперов отмечалось увеличение содержания наивных клеток на фоне снижения центральных клеток памяти относительно показателей женщин с неосложненным течением беременности 1триместра гестации.