3 курс / Фармакология / Фармакогностическое_изучение_и_перспективы_применения_в_медицине
.pdf1 – эпидермис, 2 –хлоренхима, 3 – коровая паренхима, 4 – склеренхима, 5 – эндодерма, 6 – флоэма, 7 – ксилема, 8 – сердцевинная паренхима
Рисунок 8 - Анатомическое строение стебля Filipendula vulgaris. Поперечный срез. Ув. 10х16
По периметру стебля у обоих видов расположен однослойный эпидермис, состоящий из мелких клеток, тангентально-утолщенных клеток у Filipendula vulgaris, а у Filipendula ulmaria почти прямоугольной формы, с более утолщенными наружными стенками. Эти клетки у обоих видов с наружной стороны покрытые кутикулой. У обоих видов под эпидермисом в верхней части стебля залегает зона хлоренхимы, ниже она сменяется коровой паренхимой; проводящая зона отделена откоровым кольцом эндодермы. Центральный цилиндр стебля Filipendula vulgaris состоит из хорошо выраженных пучков, широко-яйцевидной или овальной формы, а Filipendula ulmaria – из крупных сливающими между собой пучков. Пучки у обоих видов коллатеральные, закрытого типа; каждый пучок состоит из тяжа ксилемы с крупными и хорошо выраженными сосудами, а также небольшого тяжа флоэмы; над тяжем флоэмы с наружной стороны размещены участки механической ткани склеренхимы в виде «шапки». Центральная часть в верхней части заполнена клетками сердцевинной паренхимы, в нижней части у Filipendula ulmaria – стебель полый, а у Filipendula vulgaris этот признак отсутствует [143, с. 562].
Лист. Поверхностный препарат.
Эпидермис верхней стороны листа Filipendula ulmaria представлен клетками с прямыми и утолщенными стенками (рисунок 9), с нижней стороны клетки извилистые, которые полностью скрываются под густым войлочным опушением, а у Filipendula vulgaris наоборот - представлен клетками с извилистыми и утолщенными стенками (рисунок 10), с нижней стороны клетки вытянутой формы с прямыми стенками. У обоих видов устьица немногочисленные, расположены преимущественно с нижней стороны листа (гипостоматический тип). Устьица представлены замыкающими клетками бобовидной формы, аномоцитного типа (одно устьице окружено 3-4 клетками эпидермиса одинакового размера и формы) [143, с. 562-563].
51
1 - основные клетки верхнего эпидермиса, 2 - трихомы
Рисунок 9 - Препарат листа Filipendula ulmaria с поверхности. Ув. 16х40
1 – основные клетки эпидермиса, 2 – утолщенные клеточные стенки, 3 – устьица
Рисунок 10 - Препарат листа Filipendula vulgaris с поверхности. Ув. 16х40
С верхней стороны листа у обоих видов наблюдаются немногочисленные простые трихомы, которые хорошо просматриваются по краю пластинки и вдоль жилок (рисунок 11).
1 – простые трихомы
Рисунок 11 - Внешний вид простых трихом листа:
А - Filipendula ulmaria, Б – Filipendula vulgaris. Ув. 16х10
На поперечном срезе листа лабазника обоих видов плоский, дорзовентрального типа (рисунок 12, 13). С обеих сторон лист окружен клетками верхнего и нижнего эпидермиса; клетки почти прямоугольной формы с
52
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
утолщенными наружными стенками, покрыты слоем кутикулы. Мезофилл у Filipendula ulmaria нечетко дифференцирован на столбчатую и губчатую ткани, а у Filipendula vulgaris– хорошо дифференцирован. Столбчатый мезофилл у обоих видов состоит из 2 слоев и расположен с верхней стороны листа, губчатый - мелкоклеточный с нижней стороны, с просветами [143, с. 563].
1 – столбчатый мезофилл, 2 – губчатый мезофилл, 3 – нижний эпидермис, 4 – ксилема, 5 – колленхима, 6 – верхний эпидермис, 7 - трихомы;
А – срез в области средней жилки листа, Б – концевой участок листа
Рисунок 12 - Поперечный срез листа Filipendula ulmaria. Ув. 10х16
1 – нижний эпидермис, 2 – верхний эпидермис, 3 – губчатый мезофилл, 4 – столбчатый мезофилл, 5- флоэма, 6 – ксилема. А - фрагмент центральной части листа в
области средней жилки; Б - фрагмент боковой части листа.
Рисунок 13 - Поперечный срез листа Filipendula vulgaris. Ув. 16х10
Венчик цветка у обоих видов представлен мелкими округлыми клетками эпидермиса со слабо-извилистыми стенками (рис. 14). Хорошо прослеживается жилкование лепестков.
53
1 – основные клетки;
А – Filipendula ulmaria; Б – Filipendula vulgaris
Рисунок 14 - Анатомическое строение венчика цветка Filipendula ulmaria
и Filipendula vulgaris. Ув. 16х10
Нами проведено сравнение микроскопических признаков надземных органов Filipendula vulgaris и Filipendula ulmaria (табл. 5) [143, с. 565].
Таблица 5 - Микроскопические признаки надземных органов Filipendula vulgaris
и Filipendula ulmaria
Показатели |
|
Filipendula vulgaris |
|
Filipendula ulmaria |
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
|
|
|
2 |
|
|
|
3 |
|
|
|
Верхний |
|
Представлен |
клетками |
с |
Представлен |
клетками |
c |
|||||
эпидермис листа |
прямыми |
и |
утолщенными |
извилистыми |
и |
утолщенными |
||||||
|
|
|
стенками. |
|
|
|
|
стенками. |
|
|
|
|
Нижний |
|
Клетки извилистой формы. |
Представлен клетками вытянутой |
|||||||||
эпидермис листа |
|
|
|
|
|
формы с прямыми стенками |
|
|||||
Тип |
устьиц, |
Немногочисленные, |
|
|
Немногочисленные, |
расположены |
||||||
локализация |
|
расположены преимущественно |
преимущественно |
с |
нижней |
|||||||
|
|
|
с нижней |
стороны |
листа |
стороны листа (гипостоматический |
||||||
|
|
|
(гипостоматический |
|
тип). |
тип). Устьица аномоцитного типа. |
|
|||||
|
|
|
Устьица аномоцитного типа. |
|
|
|
|
|
||||
Опушение |
|
Густое войлочное опушение из |
Умеренное опушение из |
простых |
||||||||
|
|
|
простых трихом. |
|
|
трихом. |
|
|
|
|
||
Тип |
листа |
на |
Плоский, дорзо-вентрального |
Плоский, дорзо-вентрального типа. |
||||||||
поперечном срезе |
типа, |
мезофилл |
нечетко |
Мезофилл |
|
|
хорошо |
|||||
|
|
|
дифференцирован |
|
на |
дифференцирован на столбчатую и |
||||||
|
|
|
столбчатую и губчатую ткани. |
губчатую ткани. |
|
|
|
|
||||
Форма стебля |
на |
Округлый, гладкий. |
|
|
Округло-лопастной, гладкий. |
|
||||||
поперечном срезе |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Тип |
проводящей |
Проводящая |
зона |
отделена, |
Проводящая зона пучкового типа. |
|||||||
системы |
|
переходного типа, состоит из |
Пучки широко-яйцевидной или |
|||||||||
|
|
|
крупных и сливающихся между |
овальной формы; коллатеральные, |
|
|||||||
|
|
|
собой |
пучков. |
Пучки |
закрытого типа. По периметру |
||||||
|
|
|
коллатеральные, закрытые, с |
каждый пучок |
снабжен |
участком |
||||||
|
|
|
наружной стороны имеют тяжи |
склеренхимы в виде «шапки». |
|
|||||||
|
|
|
склеренхимы в виде «шапки». |
|
|
|
|
|
54
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Продолжение таблицы 5
1 |
|
2 |
|
|
|
3 |
|
|
Строение |
Центральная часть |
стебля в |
Центральная часть стебля на всем |
|||||
центральной |
верхней |
части |
|
заполнена |
протяжении |
заполнена |
клетками |
|
части стебля |
клетками |
|
сердцевинной |
сердцевинной паренхимы. |
||||
|
паренхимы, в нижней части – |
|
|
|
|
|||
|
стебель полый. |
|
|
|
|
|
|
|
Строение клеток |
Представлен |
|
мелкими |
Представлен |
мелкими |
округлыми |
||
эпидермиса |
округлыми |
|
|
клетками |
клетками эпидермиса |
|
со слабо |
|
венчика цветка |
эпидермиса |
|
со |
слабо |
извилистыми |
стенками. |
Хорошо |
|
|
извилистыми стенками. Хорошо |
прослеживается |
жилкование |
|||||
|
прослеживается |
|
жилкование |
лепестков. |
|
|
|
|
|
лепестков. |
|
|
|
|
|
|
|
Таким образом, в результате микро-анатомического исследования надземных органов Filipendula vulgaris и Filipendula ulmaria для обоих видов установлены следующие отличительные диагностические признаки:
-для стебля – форма стебля на поперечном срезе, проводящая система переходного типа, наличие полости для нижней части Filipendula ulmaria, а для
Filipendula vulgaris - отсутствие;
-для эпидермиса листа – форма и строение клеток, расположение устьиц преимущественно с нижней стороны, степень и выраженность опушения на нижнем эпидермисе листа;
-для поперечного среза листа – строение мезофилла и форма трихом; -для венчика цветка – форма клеток.
Изучение макро- и микроскопических особенностей надземных частей данных видов, произрастающего на территории Центрального Казахстана, позволило получить сведения, необходимые для идентификации сырья.
55
4 РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ТРАВЫ FILIPENDULA VULGARIS И ТРАВЫ
FILIPENDULA ULMARIA
4.1 Сравнительное гистохимическое исследование травы Filipendula vulgaris и травы Filipendula ulmaria
Гистохимический анализ позволяет выявлять закономерности процесса секреции биологически активных веществ, наличие определённых групп действующих и сопутствующих веществ или продуктов их метаболизма, так же устанавливать их локализацию в тканях и органах растения [146]. В свою очередь, данные исследования иллюстрируют отличительные особенности метаболизма железистых трихом и тканей различных хемотипов одного вида растения.
Методы и перечень реактивов для проведения гистохимического анализа представлены в подразделе 2.2.
В результате гистохимического анализа было выявлено характерное окрашивание клеток разных типов в результате взаимодействия реактивов с детектируемыми метаболитами.
Определяли: эфирное масло, полисахариды, крахмал, инулин, сесквитерпеновые лактоны, фенольные соединения, флавоноиды, алкалоиды (таблица 6).
Таблица 6 – Оцениваемые результаты гистохимического анализа
№ |
Реактив |
Определяемый компонент |
Окрашивание |
|
|
|
|
1 |
Метиленовый синий |
Эфирное масло |
Синее |
|
|
|
|
2 |
1-% спиртовой раствор FeCl3 |
Флавоноиды |
Черно-синее-зеленое |
|
|
|
|
3 |
10% спиртовой раствор |
Фенольные соединения |
Коричневое, желтое |
|
K2Cr2O7 |
|
|
4 |
Реактив Драгендорфа |
Алкалоиды |
Коричневое, бурое |
|
|
|
|
5 |
Конц. H2SO4 |
Сесквитерпеновые лактоны |
Желтое |
|
|
|
|
6 |
10% раствор тимола и конц. |
Полисахариды |
Оранжево-красное |
|
H2SO4 |
|
|
7 |
Реактив Люголя |
Крахмал |
Синее |
|
|
|
|
8 |
70-% раствор С2Н5ОН |
Инулин |
Сферокристаллы |
|
|
|
шарообразной формы |
Гистохимический анализ показал наличие фенольных соединений, флавоноидов, следов эфирного масла, алкалоидов и сесквитерпеновых лактонов и отсутствие полисахаридов в исследуемых микропрепаратах.
Наличие группп метаболитов в траве Filipendula vulgaris и траве
56
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Filipendula ulmaria, представлены в таблице 7.
Таблица 7 – Результаты гистохимического анализа травы Filipendula vulgaris и
травы Filipendula ulmaria
№ |
Реактив |
|
|
|
Реакция надземных органов |
|
|
|
|
|||||
|
|
Стебель |
Поперечный |
Поверхностный |
Черешок |
Цветок |
||||||||
|
|
(А) |
срез листа |
срез листа (С) |
(D) |
|
(Е) |
|
||||||
|
|
|
|
|
(В) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
2 |
1 |
|
2 |
1 |
2 |
1 |
|
2 |
1 |
|
2 |
1 |
Метиленовый синий |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
|
+ |
2 |
1-% спиртовой раствор FeCl3 |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
|
+ |
3 |
10% спиртовой раствор K2Cr2O7 |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
|
+ |
4 |
Реактив Драгендорфа |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
|
+ |
5 |
конц. H2SO4 |
- |
- |
+ |
|
+ |
- |
- |
- |
|
- |
+ |
|
+ |
6 |
10% раствор тимола, конц. |
- |
- |
- |
|
- |
- |
- |
- |
|
- |
- |
|
- |
|
H2SO4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
7 |
Реактив Люголя |
- |
- |
- |
|
- |
- |
- |
- |
|
- |
- |
|
- |
8 |
70-% раствор С2Н5ОН |
- |
- |
- |
|
- |
- |
- |
- |
|
- |
- |
|
- |
Примечание: 1 – Filipendula vulgaris; 2 – Filipendula ulmaria; «-» – отрицательная реакция; «+» - положительная реакция
Ниже приведены результаты идентификации групп метаболитов в траве
Filipendula vulgaris и траве Filipendula ulmaria.
Идентификация эфирного масла в траве Filipendula vulgaris и траве
Filipendula ulmaria (рисунок 15-16).
1 – Filipendula vulgaris; 2 – Filipendula ulmaria.
А-поперечный срез стебля; В-поперечный срез листа
Рисунок 15 – Результат гистохимических реакций с метиленовым синим
(ув.×10)
57
1 – Filipendula vulgaris; 2 – Filipendula ulmaria.
С- поверхностный срез листа; D-поперечный срез черешка; E- цветок.
Рисунок 16 – Результат гистохимических реакций с метиленовым синим
(ув.×10)
Обработка микропрепаратов листа, стебля, черешка и цветка раствором метиленового синего показала, что основным местом локализации эфирного масла (по характерной синей окраске) являются:
-на поперечном срезе стебля: головчатые волоски или трихомы, эпидермис и хлоренхима стебля,
-на поперечном срезе листа: мезофилл и проводящие пути, трихомы;
- на поверхностном срезе листа: проводящие пути, |
а также |
эфирномасличные железки; |
|
-на поперечном срезе черешка: коровая зона и проводящие пучки;
-в лепестках цветка: эфирномасличные железки, где видно максимальное накопление эфирного масла в виде синего окрашивания
Идентификация флавоноидов в траве Filipendula vulgaris и траве
Filipendula ulmaria (рисунок 17).
58
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
1 – Filipendula vulgaris; 2 – Filipendula ulmaria.
А-поперечный срез стебля; В-поперечный срез листа; С- поверхностный срез листа; D-поперечный срез черешка; E- цветок
Рисунок 17 – Результат гистохимических реакций с 1% спиртовым раствором
FeCl3 (ув.×10)
После обработки микропрепарата исследуемых образцов 1-% спиртовым раствором FeCl3 наблюдали интенсивное черно-зеленое окрашивание во всех исследуемых органах Filipendula vulgaris и Filipendula ulmaria:
59
-на поперечном срезе стебля окрасились эпидермис, хлоренхима, коровой паренхимы, сосудисто-проводящие пучки стебля (особенно склеренхимы и ксилемы);
-на поперечном срезе листа - губчатый и столбчатый мезофилл и проводящие пути, трихомы;
-на поверхностном срезе листа - проводящие пути;
-на поперечном срезе черешка насыщенно окрашены эпидермис, хлоренхима, ксилемы и проводящие пучки;
-в лепестках цветка окрашивание наблюдается в виде диффузного распределения флавоноидов в основных клетках лепестка (рисунок 17).
Идентификация фенольных кислот в траве Filipendula vulgaris и траве
Filipendula ulmaria.
Для идентификации фенольных кислот в 10% растворе бихромата калия помещали исследуемый материал и оставляли на 7 суток. Наличие фенольных кислот было подтверждено интенсивным желто-коричневым окрашиванием во всех исследуемых органах Filipendula vulgaris и Filipendula ulmaria, что свидетельствует о присутствии фенольных соединений во всех клетках [146, с. 4866]. Однако, окрашивание микропрепаратов было неравномерным, что позволяет судить о различной степени накопления фенольных соединений в клетках [146, с. 4866]. Таким образом, участками с максимальным накоплением фенольных соединений являются:
-на поперечном срезе стебля коровая и проводящая зона;
-на поперечном и поверхностном срезах листа склеренхима, хлоренхима, проводящая зона и пучки;
-на поперечном срезе черешка эпидермис, механические ткани и проводящие пучки;
-в лепестках цветка - проводящая зона лепестка (рисунки 18-19) [146, с.
4866].
1 – Filipendula vulgaris; 2 – Filipendula ulmaria.
А-поперечный срез стебля; В-поперечный срез листа
Рисунок 18 – Результат гистохимических реакций с 10% спиртовым раствором бихромата калия (ув.×10)
60
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/