- •Общая вирусология методические указания
- •111801-65 - «Ветеринария» и 111900.62 – «Ветеринарно-
- •Занятие №1
- •Для выполнения этих требований необходимо:
- •Заражение
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №2
- •Транспортировка и хранение проб.
- •Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
- •Подготовка органов и тканей.
- •Подготовка выделений из носа, глаз.
- •Подготовка фекалий.
- •Подготовка крови.
- •Отбор крови для серологических исследований.
- •Методы очистки вируссодержащего материала.
- •Биологический метод очистки.
- •Методы концентрации вирусов в рабочей суспензии.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №3 Световая вирусоскопия.
- •Окраска по Романовскому
- •Окраска по методу Муромцева
- •Окраска по методу Михина
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №4 Люминесцентная вирусоскопия и методы флуорохромирования препаратов.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №5 Электронная вирусоскопия.
- •Устройство микроскопа (основные узлы)
- •Приготовление объекта и требования, предъявляемые к нему в связи с электронной микроскопией.
- •Общая схема препарирования состоит из операций:
- •Приготовление подложек
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие 6 Культивирование вирусов в организме лабораторных животных. Культивирование вирусов в эмбрионах кур. Схема эмбрионов кур. Освоение методов заражения эмбрионов кур.
- •Лабораторные животные должны отвечать определенным требованиям:
- •Лабораторных животных используют для:
- •Методы экспериментального заражения лабораторных животных.
- •Методы заражения куриных эмбрионов
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие 7 Отбор вирусосодержащего материала от погибших эмбрионов кур и дальнейшая работа с вирусосодержащим материалом.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие № 8 Культивирование вирусов на культуре клеток.
- •Культуры клеток применяются для:
- •Техника приготовления однослойной первично трипсинизированной культуры клеток из фибробластов 9-10 суточных куриных эмбрионов.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Занятие 9 Методы заражения культур клеток. Цитопатогенное действие вируса на клетку.
- •Подбор культур клеток.
- •Техника заражения культур клеток.
- •Применяют 2 способа заражения.
- •Цпд используется для:
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Литература
- •Оглавление
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
СТАВРОПОЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ
УНИВЕРСИТЕТ
Кафедра эпизоотологии и микробиологии
Общая вирусология методические указания
для лабораторных занятий студентов факультета
ветеринарной медицины по направлению подготовки
111801-65 - «Ветеринария» и 111900.62 – «Ветеринарно-
санитарная экспертиза»
СТАВРОПОЛЬ, 2013
УДК 578(076)
ББК 48я73
О 451
Методческие указания подготовили:
сотрудники кафедры эпизоотологии и микробиологии СтГАУ
профессор Ожередова Н.А.
доцент Веревкина М.Н.
доцент Светлакова Е.В.
Рецензенты:
Доктор ветеринарных наук, профессор кафедры паразитологии
и ветеринарно-санитарной экспертизы, анатомии
и патанатомии им. С.Н.Никольского
С.Н. Луцук
доктор ветеринарных наук, профессор кафедры
терапии и фарамакологии
В.А. Оробец
Методические указания к выполнению лабораторных занятий для студентов факультета ветеринарной медицины, обучающихся дисциплине «Вирусология и биотехнология» по специальности 111801.65 – «Ветеринария» и дисциплине «Вирусология» по специальности 111900.62 - «Ветеринарно-санитарная экспертиза». Ставрополь: изд-во Агрус
Общая вирусология: Методические указания / Н.А. Ожередова, М.Н. Веревкина, Е.В. Светлакова; Ставропольский государственный аграрный университет. – Ставрополь: АГРУС, 2013. - 50 с.
Методические указания содержат краткое изложение изучаемого материала, вопросы для самопроверки по разделу «Общая вирусология». Предназначены для студентов факультета ветеринарной медицины по специальности 111801-65 - «Ветеринария» и 111900.62 – «Ветеринарно-санитарная экспертиза».
Рекомендованы к печати методическим советом СтГАУ
(протокол № от 2013 г.)
Занятие №1
Знакомство с работой и оборудованием вирусологической лаборатории. Техника безопасности при работе с вирусами. Схема вирусологических исследований.
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Ознакомить студентов с особенностями
устройства вирусологических лабораторий, правилами техники безопасности при работе с вирусами и вируссодержащим материалом.
МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:
- Смонтированные керамические бактериальные фильтры;
- фильтр Зейтца;
- гомогенизатор;
- суперцентрифуга;
- стерильные ступки;
- пестики, электромагнитная мешалка;
- флаконы с физиологическим раствором;
- флакон с раствором Хенкса;
- среды для культур клеток 199;
- гидролиз am лактальбумина;
- антибиотики;
- воронки;
- бумажные фильтры;
- шприц Жане;
- штатив с пробирками и кватчиками;
- лабораторные и сельскохозяйственные животные (кролики, морские свинки, крупный рогатый скот, овцы и др.)
Вирусологические отделы ветеринарной лаборатории организуются по типу бактериологических отделов, но с учетом специфики и некоторых особенностей вирусологических исследований.
Вирусологические лаборатории (отделы) должны иметь все, что имеется в бактериологических отделах (лабораториях). Это лабораторная посуда, питательные среды, боксы, световые микроскопы, центрифуги, холодильники, сушильные шкафы, термостаты, автоклавную, набор хирургических инструментов, виварий, дезосредства и др.
Кроме перечисленного оборудования и материальных средств, которым располагает бактериологический отдел ветеринарной лаборатории, в вирусологической лаборатории (отделе) должны быть: лабораторный инкубатор для выращивания куриных эмбрионов, используемых для культивирования вирусов суперцентрифуги со скоростью 25 - 30 об / мин., дополнительный бокс для приготовления культур клеток, холодильные камеры с температурой -20- -300С - -700С. Для более длительного хранения музейных Вакцинных штаммов вируса и другого вируссодержащего материала используются камеры (баллоны) с жидким азотом, где температура понижается до – 1900 С.
Работа вирусологической лаборатории не мыслима без люминесцентного микроскопа, набора различных вирусов - диагностикумов и гипериммунных диагностических сывороток, меченных флуорохромами (люминесцентными красками). Люминесцентный микроскоп является уникальным прибором для постановки РИФ (реакции иммунофлуоресценции), которая позволяет быстро и точно поставить диагноз на любое бактериальное и вирусное заболевание. Поэтому люминесцентный микроскоп широко применяется и в бактериологических отделах лаборатории, обычно люминесцентный микроскоп устанавливается в помещении с темными шторами.
В учебных вирусологических лабораториях и в вирусологических лабораториях научно - исследовательских институтов ветеринарного и медицинского профиля должен быть электронный микроскоп с отдельными помещениями, штатом сотрудников, фотолабораторией и не обходимым оборудованием.
В вирусологической лаборатории должен быть широкий набор бактериальных и вирусозадерживающих фильтров, гомогенизаторы для измельчения тканей, необходимые сбалансированные солевые растворы (раствор Хенкса, фосфатно - буферный раствор), различные питательные среды для куш тур клеток ( среда 199,5 % гидролизата лактабулина и др. ).
Для работы с патологическим материалом, лабораторными животными, куриными эмбрионами необходим достаточный набор инструментов. Таких как: ножниц, шприцов, игл, шпателей, резиновых перчаток, защитных очков ступок, пестиков, различных пипеток с резиновыми грушами, спирта, эфира, хлороформа для наркоза лабораторных животных.
Вирусологическая лаборатория (отдел) должны иметь следующую документацию:
Журнал поступления патологического материала.
Журнал вирусологических исследований (экспертиз).
Журнал учета зараженных животных, куриных эмбрионов.
Журнал учета выделенных вирусов и их уничтожения.
Журнал учета движения производственных или музейных штаммов вирусов.
Лабораторные столы, стены, пол рабочих помещений и боксов, где проводится работа с вирусами, должны быть хорошо освещены и иметь специальное покрытие. Стены бокса и других лабораторных комнат должны быть выкрашены масляной краской светлых тонов или выложены кафельными плитками.
Пол также покрывается кафельными плитками или специальным пластиком. Лабораторные столы должны быть покрыты нержавеющей жестью, толстым стеклом или пластиком для удобства проведения и качества дезинфекции.
У входа в рабочие помещения, в предбокснике, в виварии, в помещении для содержания зараженных животных, должен находиться дезоковрик, пропитанный 5% раствором карболовой кислоты.
Все сотрудники лаборатории должны работать в чистых белых халатах, головных уборах (чепчиках, косынках). В боксах работа проводится в стерильной спецодежде и маске.
Лабораторные комнаты, боксы, где проводится работа с патологическим материалом или вирусом, должны ежедневно дезинфицироваться. Для этой цели используются бактерицидные лампы, которые включаются на 2 - 3 часа, или растворы дезосредств, распыляемых при помощи специальных распылителей. Одним из лучших дезосредств является 5% раствор лизола.
Трупы лабораторных животных, погибшие куриные эмбрионы, присланный патологический материал обезвреживаются путем сжигания в специальных печах (крематориях) или автоклавируются в специальных бачках.
Техника безопасности при работе с вирусом или вируссодержащим материалом требует строгого соблюдения следующих основных требований:
Не допускать рассеивания вируса во внешней среде.
Предотвратить загрязнение исследуемого материала бактериальной микрофлорой.
Обеспечить личную безопасность в работе.