mikra1
.pdf1 Основные этапы развития 1.Эмпирических знаний до изобретения микпов 2.Морфол-ич ок 200лет.Левенгук в 1675г. впервые описал простейших, 1683г.- основные формы бактерий. 3.Физиолог(с 1875г.)- эпоха Л.Пастера и Р.Коха. Л.Пастеризучение микробиол основ процессов брожения и гниения, развитие промыш микбиол, выяснение роли мик-мов в кругообороте веществ в природе, открытие анаэробных мик-мов, разработка принципов асептики, методов стерилизации, ослабления вирулентности и получения вакцин (вакц штаммов).Р.Кохметод выделения чистых культур на тв пит средах, способы окраски бактерий анилиновыми красит, откр возбуд сиб язвы, холеры. туберкулеза (палочки Коха), совершенствование техники микроскопии.4.Иммунологич период. Мечников- - учение о невосприим-ти (иммунитете), Знания об антителах,, позволившие П.Эрлиху разработать гуморальную теорию иммунитета. В 1892г. Д.И.Ивановский сообщил, что возбудителем мозаичной болезни табака является фильтрующийся вирус. ->днем рождения вирусологии,.5. открытие антибиотиков. В 1929г. А.Флеминг открыл пенициллин и началась эра антибиотикотерапии,..6. Современный молекуляргенетич этап во 2 половине 20 века в связи с достижениями генетики и молекулярной биологии, созданием электрон мик-па. 7.Перспективы развития.Иммунология вплотную подошла к регулированию механизмов самозащиты организма, коррекции иммунодефицитов, решению проблемы СПИДа, онкозаболевания.новые генно-инженерные вакцины,
2. Принципы современной классификации микробов..
При изуч, идентификации и классификации мик-мов чаще всегоизучают:1.Морфологические 2.Тинкториальныеотношение к различным красителям (по Грамму). 3.Культуральные - характер роста на питательных средах. 4.Биохимические - способность ферментировать различные субстраты5.Антигенные6.Физиологическиеспособы питания, тип дыхания 7.Подвижность 8.Способность к спорообразованию 9.Чувствительность к бактериофагам, фаготипирование.10.Химический состав клеточных стенокосновные сахара и аминокислоты, липидный и жинокислотный состав.
Вид-совокупность микроорганизмов, имеющих общее эволюционное происхождение, близкий генотип и максимально близкие фенотипические характеристики. Штаммлюбой конкретный образец данного вида. Штаммы одного вида, различающиеся по антигенным характеристикам, называют сероварами, по чувствительности к специфическим фагамфаговарами, биохимическим свойствамхемоварами, по биологическим свойствамбиоварами и т.д.
3.Основные методы исследования морфологии микроскопический метод: световая, фазово-контрастная, флуоресцентная, электронная;культуральный метод (бактериологический, вирусологический);биологический метод (заражение лабораторных животных);молекулярно-генетический метод (ПЦР - полимеразная цепная реакция)серологический метод - выявления антигенов микроорганизмов или антител к ним;для световой мик-пии красят: методы окраски Грама и Циля-Нильсена По Граму: 1.карболовый генциан виолет 2 мин. 2.Промыть водой. 3.Люголь 1 мин. 4.промыть водой. 5.Спирт 30 сек. 6.вода. 7. водный фуксин 2 мин. 8.вода. По Цилю: карболовый фуксин до появления паров. 2.Дать остыть. 3.Обесцветить 1% серной кислотой 30 сек. 4.вода 5.Метиленовая синька 5 мин. 6.вода.для структур всякие умные вещи бла бла.капсулы-кристаллич фиолетовый и далее 20%cuso4.жгутики протравливание препарата и последующая окраска
.
4. Морфология, ультраструктура и хим состав По форме 1.Шаровидные или кокки.2.Палочковидные.3.Извитые.4.Нитевид ные Бактерии шар-ной формы —в зависимости от плоскости деления и расположения отдельных особей подраз-тся на микрок. (отдельно лежащие к-ки), диплок. (парные к-ки),стреп-ки (цепочки к-ов), стафил. (имеющие вид виноградных гроздьев), тетрак. (образ-ся из 4 кокков) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков). Палочковидн
1.Бактериипалочки, не образующие спор. 2.Бациллыаэробные спорообразующие микробы. 3.Клостридиианаэробные спорообразующие микробы. Извитые 1.Вибрионы один изгиб. 2.Спириллыимеют 2- 3 завитка 3.Спирохетыимеют различное число завитков..Ультраструктура1.капсулазащитна я полипептидная или полисахаридная
оболочка.Содержит много воды. Ф-ии – защ, антигенная, запас веществ, адгезия. Бывает микро и макрокапсула. 2.Жгутики – необязательные белковые, 3.Пили – микроворсинки, белковые трубочки на поверхности для адгезии,конъюгации.4.Клеточная стенка –., защита, транспорт, антигены,
спорообразование. 5. Цитоплазматическая мембрана6.Цитоплазма7. Мезосомы – выросты цитопл-ской мембраны – деление8. Рибосомы9.Нуклеоид.10.Плазмиды – изолированные фрагменты ДНК.11.Включения12. Споры .Протопласты – полностью лишены клеточной стенки, Сферропласты – частично лишены.L-формы
– без клеточной стенки но способные размножаться.
5. Основные различия прокариот и эукариот,У прокариот нет ядра, кольцевая ДНК (кольцевая хром-ма) расп-на прямо в цит-ме (нуклеоид).У эукариот есть оформленное ядро (насл-ная информация [ДНК] отделена от цит-мы ядерной оболочкой).1) нет ядра,-> нет и митоза/мейоза. Бактерии разм-ся делением надвое.2) У прокариот из органоидов имеются только рибосомы (мелкие, 70S), а у эукариот кроме рибосом (крупных, 80S) имеется множ др органоидов: митохондрии, эпс, клет центр, .3) Клетка прокариот гораздо меньше клетки эукариот: по ди-ру в 10 раз, по объему – в 1000 раз.
1)У прокариот ДНК кольцевая, а у эукариот линейная
2)У прокариот ДНК голая, почти не соединена с белками, а у эукариот ДНК соединена с белками в соотношении 50/50, образуется хромосома
3)У прокариот ДНК лежит в специальной области цитоплазмы, которая называется нуклеоид, а у эукариот ДНК лежит в ядре. Вирусы — это всегда внутрикл
паразиты. Они способны размнож-ся только в чужой клетке, потому что сами состоят только из одного типа нукл киc-ты и белковой или белково-липидной оболочки.Вирусы собственного обмена веществ не имеют. Они внедряются в клетку и заставл ее изготавливать копии вируса. Идет про-тво
копий нукл кис-ты и копий вирусных белков, из которых в конце собирается новая вирусная частица. При этом клетка чаще всего гибнет из-за прекращения продукции собственных белков, накопления токсических вирусных компонентов и повреждения клеточных лизосом. Прокариота - простейший клет. организм.
6. Споры и капсулы.
Капсула бактерии — слизистая структура толщиной более 0,2 мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и имеющая чётко очерченные внешние границы. Она выявляется при специальных методах окраски по Бурри-Гинсу создающих негативное контрастирование веществ капсулы: тушь создаёт тёмный фон вокруг капсулы.Капсула состоит из полисахаридов или полипептидов, содержит много воды.Многие бактерии образуют микрокапсулу — слизистое образование толщиной менее 0,2 мкм, выявляемое лишь при электронной микроскопии.Функции – защитная, антигенная, запас веществ, адгезия. Окраска по РомановскомуГимзе.Споры – форма сохранения наследственной информации и и
бактериальной клетки в неблагоприятных условиях внешней среды. Мало воды, много кальция, жиров. Окраска по Цилю-Нильсену
7. Размножение бактерий. |
1-я — фаза |
||||
задержки |
размножения, — хар-ся началом |
||||
интенсивного |
роста |
клеток, но скорость их |
|||
деления |
|
остается |
невысокой;2-я |
||
- логарифмическая, или лог-фаза, — |
хар- |
||||
ся постоянной |
макс |
скоростью |
деления |
клеток и значительным увеличением числа клеток в популяции;• 3-я — стационарная фаза — наступает тогда, когда число клеток в популяции перестает увелич. Это связано с тем, что наступает равновесие между числом вновь образ-ся и гибнущих клеток. Число живых бак-ных клеток в популяции на единицу объема питательной среды в стационарной фазе обозначается как М- концентрация.Этот показатель является характерным признаком для каждого вида
бактерий; |
4-я |
фаза |
отмирания |
(логарифмической |
гибели) — хар-тся |
преобладанием в популяции числа погибших клеток и прогрессивным снижением числа
жизнеспособных |
клеток |
|
популяции. Прекращение |
роста |
|
численности |
(размножения) |
популяции |
мик-мов наступает в связи с истощением питательной среды и/или накоплением в ней продуктов метаболизма микробных клеток. Поэтому, удаляя продукты метаболизма и/или заменяя питательную среду, регулируя переход микробной популяции из стационарной фазы в фазу отмирания,
можно создать открытую |
биологич |
сис- |
|
му, стремящуюся |
к |
устранению |
|
динамического |
равновесия |
на |
определенном уровне развития популяции.
9. Условия культивирования микробов. Выращ мик-ов в лаб условиях приянто наз-ть культивиров, а рост на питат среде - культурой данных микробов.Важн задача куль-ния - изолир и выделить колонии по возм-ти всех мик-мов, содер-ся в смеси, выделить чистую культуру дл дальнейш изучения морф, физ-ч и биохим особ-тей ,необх для опред видимой принад-ти микробв. В микрбиол чист наз культуру микроба, происходящ от 1 клетки или споры. При этом полагают, что из 1 бактер-ой клетки выраст-ет 1 колония. Самый распростр способ выделен чистых культур - культивир на пит средах путем посева, пересева. Нужно:1.Исп всех необх для соответ микробов питат комп.2.Оптим темпер, рН, rH2, конц ионов, степень насыщ О2, газ состав ,давлМик-мы культив на питат средах при оптим те-ре в термостатах, обеспеч услов инкубации.По те-му оптимуму роста 3 группы мик-мов.1.Психрофилы- ниже +20 град. 2.Мезофилыот 20 до 45 градусов ( 37).3.Термофилывыше +45 .Среды
классифц по консист, составу, происхожд,, назнач и загряз. Матер-ла !Консист: плотные (тв), полужид и жид. Состав: белков, безбелк и минерал . проис-ние : искуств и естеств (природн) .Искусств делят-> животные (МПА) или (МПБ)] и растите (настои сена и соломы, отвары злаков, дрожжей или фруктов, пивное сусло .).Естеств пит среды могт содерж компты жив-го (, кровь, сыв-ка, жёлчь) или растит ( кусочки овощей и фруктов) проис-ния. По назнач: консервир среды (для первич посева и транспор-ки), среды обогащ (для накопл опред группы бактер), среды для культивир,среды для выделен и накопл (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идент-ции (диффере и элективно-дифференц).
8. Энергетический метаболизм бак. основывается на фототрофии, использовании света через фотосинтез, или на хемотрофии, использовании хим веществ для получения энергии. Хемотрофы делятся на литотрофов, кот исп неорган доноры электронов для дыхания, и органотрофов, кот исп органич соед-ия в качестве доноров электронов. Чтобы использовать хим соед как источник энергии, электроны берутся из возобновл веществ и перемещают к акцепторам электронов в процессе окис-вос р-ии. Эта реакция высвоб энергию, кот может исп для проведения метаболичных реакций. В аэробных организмах в качестве акцептора электронов испол кислород. В анаэробных организмах вместо него исп другие неорг вещества, напр нитраты, сульфаты или углекислота. Фак анаэробы могут переключ между процессами аэроб и анаэр дых, то есть разными акцепторами электронов, в зав-ти от естественных условий, в которых они находятся. Литотрофные бак-рии могут исп неорг вещ-ва как источник энергии. Общими неорган донорами электронов явля водород, угарный газ, аммиак
10. Микробные ферменты, их испМик-мы синтезируют оксидоредуктазы, трансферазы, лиазы, гидролазы, изомеразы и лигазы. Определение caхаролитических, протеолитических и др ферментов, образуемых опред видами и даже вариантами бактерий, широко применяется для их идентификации. Вместе с тем ряд ферментов (нейроминидаза, гиалуронидаза, коагулаза и др.) способствуют проявлению патогенных свойств поскольку субстратом их действия явл вещ-ва клеток и тканей орг-ма чел-каОдни ферменты ми-мов лок-я в их цитме, цит-ской мембране и периплазматическом простравстве, другие, например гидролазы, выделяются в окружающую среду. На этом основано деление ферментов на экзо- и эндоферменты. Функц назнач
экзоферментов связано с расщеплением макромолекул в окруж среде до более простых соединений, кот затем трансп-тся в микробную клетку. Некоторые ферменты, лок-ые в цитоплазме, функ-ют независимодруг от друга, другие тесно связаны между собой, обеспечивая протекание метаболических реакций в опред последсти. Внутриклеточные ферменты, объединенные структурно и функционально, составляют мультиферментные комплексы.Ферменты, которые постоянно синтезируются в микробных клетках в опред концентрациях, наз конститутивными. К ним относятся ферменты гликолиза. Ферменты, концентрация которых резко возрастает в зав-ти от наличия соответствующего субстрата, называют индуцибельными - беталактамаза — фермент, разрушающий пенициллин.
|
|
контролем чистоты выделенной культуры). |
|
12. Выделение и культивир строгих анаэр. |
|
|
Метод Цейсслера применяется для выдел |
|
11. Понятие о чистой культре микроба, |
чист культур спорообраз анаэробов. |
|
штамме, клоне. Штаммлюбой конкретный |
производят посев на среду Китт-Тароцци, |
|
образец данного вида. Штаммы одного вида, |
прогрев 20 мин при 80 °C (для уничтож |
|
различающиеся по антигенным хар-ам, наз |
вегетативн формы), заливают среду |
13. Понятие об асептике, антисептике, |
сероварами, по чувств-сти к специфическим |
вазелиновым маслом и инкубируют 24 ч в |
стерилизации и дезинфекции. |
фагам - фаговарами, биохимическим |
термостате. Затем производят посев на |
Асептика – совокуп всех методов |
свойствамхемоварами, по биологическим |
сахарно-кров агар для получ чистых культур. |
направленных на уничтожение или резкое |
свойствамбиоварами. Колониявидимая |
После 24-час-го культивир интересующие |
снижение численности. |
изолированная структура при размножении |
колонии изучаются — их пересеивают на |
Дезинфекция – мероприятия, направленные |
бактерий на плотных питат средах, может |
среду К-Т. и (с послед контролем чистоты |
на уничтожение или резкое подавление |
развиваться из одной или неск родительских |
выделенной культуры).Метод Фортнера — |
численности патогенных и условно- |
клеток. Если колония развилась из одной |
посевы производят на чашку Петри с |
патогенных мик-мов во внешней среде и на |
родит клетки, то потомство наз клон. |
утолщенным слоем среды, разделённым |
объектах. (методы – химический, |
Культурався сов-ть мик-мов одного вида, |
пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. |
физический, механический, биологический) |
выросших на плотной или жидкой |
Одну половину засевают культуру аэробных |
Вещества: Галоидсодержащие, |
питательной среде. |
бактерий, на другую — анаэробных. Края |
кислородсодержащие, спирты, |
Чистой культурой микробов наз |
чашки заливают парафином и инкубируют в |
альдегидосодержащие. |
совокупность мик-мов одного вида, имеющие |
термостате.Первонач-но наблюд рост |
Антисептика – подаление патогенных и |
одинаковые морфологич, биохимические и |
аэробной микрофлоры, а затем (после |
условнопатогенных бактерий на коже и |
культуральные свойства. Существуют 2 |
поглощения О2) — рост аэробной резко |
слизистых.Стерилизация – освобождение |
основных метода разведения исследуемого |
прекращается и нач-ся рост |
объекта от всех микроорганизмов путем |
материала:1) на пов-ти плотной пит среды;2) |
анаэробной.Метод Вейнберга исп для получ |
химического и физических методов. Методы |
предварительное разведение материала в |
чистых культур облигатных анаэробов. |
стерилизацииТермическая: паровая и |
физ растворе. Метод на поверхности |
Культуры, выращ на среде Китта-Тароцци, |
воздушная (сухожаровая).Химическая: |
плотной среды исп для выделения чистых |
переносят в сах бульон. Затем одноразовой |
газовая или химическими растворами |
культур аэробныхи фак анаэробных м-мов. С |
пастеровской пипеткой материал переносят в |
(стерилянтами)Радиационная стерилизация |
этой целью для посева берут ряд чашек |
узкие пробирки с сахарным мясо-пептонным |
— применяется в промышленном |
Петри с плотной средой. В первую чашку |
агаром, погружая пипетку до дна пробирки. |
вариантеМетод мембранных фильтров — |
наносят исследуемый материал и |
Засеянные пробирки быстро охлаждают, что |
применяется для получения небольшого |
распределяют его по поверхности шпателем. |
позволяет фиксировать бактериальный |
количества стерильных растворов, качество |
Затем производят посев последовательно на |
материал в толще затвердевшего агара. |
которых может резко ухудшиться при |
поверхность Среды в остальных чашках. |
Пробирки инкубируют в термостате, а затем |
действии других методов |
Количество материала,внесенного в среду, |
изучают выросшие колонии. При |
стерилизации(бактериофаг, селективные |
при этом последовательно убывает. |
обнаружении интересующей колонии на её |
питательные среды, антибиотики) |
|
месте делают распил, материал быстро |
|
|
отбирают и засеивают на среду Китта- |
|
|
Тароцци (с последующим |
|
14. Действие физических факторов на микроорганизмы. .Стерилизация — обработка объектов, при кот достиг-ся полное уничтож всех мик-мов. В рез-те стерилиз объект становсвобод как от патогенных, так и от сапрофитных микробов. в основе лежит дей-е физич или хим факторв. Критерием гибели мик-мов явл необратимая утрата спос-ти к размножПрокаливание на огне —бактер- чских петель, металлич и стекл предметов. применяется огранич-но ввиду их порчи. Стерилизац сухим жаром или горяч воздухом произ-тся в сушильных шкафах или печах Пастера при т. 160—170°С в теч 1—1,5 ч. стерилизуют лаб-ую посуду, инструменты, минер масла .Кипячением в теч-е 30 мин
.убивает вегетатив форм. микр-ов. Споры многх бактерий при этом сохр, выдерж кипячение в теч неск часов. Для унич вирусов —в теч 45—60 мин. подверг шприцы, хир инстр, иглы, резин трубки. В автоклаве. Это 2-стенный металлич котел, + герметич
закрыв крышку. Под котел налив воду. Вода нагрев и образ-ся пар .по спец патрубку, соед с котлом , поступв рабоч камеру котла.Пар вытесн воздух(вых через клапан). как воздух полн-ю вытеснен из камеры , из выпуск-го клапана пойдет насыщ «сухой пар», крышку герметически закрывают. Стерилизация текучим паром пров-тся в аппарате Коха или в автоклаве при незавинч крышке и открытом выпускном кране. На дно аппарата Коха наливают воду и нагревают до 100°С. Образующ-чся пар движ вверх через заложенный материал и стерилизует его. Стерилизация фильтрованием через бактериальные фильтры для освобождения жидкостей от бактерий. используют в тех случаях, когда жидкость портится от нагрев, при необ-ти отделения бактериальных клеток от растворимых продуктов их жизнед-сти (экзотоксины, антибиотики и др.), фагов, вирусов. В механизме стерилизации фильтрованием играют роль размер пор и адсорбция микробов на стенках пор фильтров.
Химическая стерилизация применяется в том случае, если объекты нельзя автоклавировать. Обычно это питательные среды, содержащие термолабильные вещества..1.Температура: термофилы (50-60) психрофилы (10-15) мезофилы (3537)2.Реакция среды – нейтр и слаб-щел кисл3.Влажность –4.Радиация, ультразвук и давление.
15. Бактериофаг. Получение, титрование Это вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. большинство фагов состоит из головки, воротничка и хвостового отростка, заканчивающегося базальной пластинкой, к которой прикреплены фибриллы.Содержание головки
— это ДНК (иногда РНК). Хвостовой отросток имеет цилиндрический стержень, окруженный сократительным чехлом. В оболочку фаговой частицы и отросток входит белок, состоящий из полиаминов: спермин, путресцин, кислоторастворимый пептид. Фаг получают путем добавления в котлы с бульонными культурами специального
производственного фага, который выдерживают сутки при 37°С, затем фильтруют. Проверяют на чистоту, стерильность, безвредность и активность (силу действия).Титрование бактериофага - определение активности бактериофага по способности различных разведений его
взвеси лизировать бактериальные культуры в жидких питательных средах или образовывать негативные колонии в бактериальном газоне на плотных питательных средах. Применение: фаготипирование и
дифференцировка бактерий, лечение.
16. Фазы взаимодействия фага с бак. Клеткой. К клет стенке бактерий фаги прикреп концевыми нитями отростков. Затем оболочка бактерии раств-ся с пом-ю фермента лизоцима, белковый чехол хвостового отростка сокращается и через канал хвостового отростка нукл кис-та вводится (впрыскивается) в цитоплазму клетки. После проникн нукл кис-ы внутрь клетки бактерии следует Си-фаза, или фаза смены информации. В этот период фаговые частицы не обнаруживаются, однако в клетке развиваются процессы, обусловл. фаговым геномом. Начи-ся синтез иРНК и ранних белков, необх для синтеза ДНК фага и других структурных компонентов зрелого фага. Синтез ДНК фага осущ-ся с пом клеточной ДНКполимеразы и сопровожд полным распадом ДНК бактерии и ее утилизацией. Если ДНК бактерии не хватает, фаговая ДНК синтезируется из компонентов среды. ДНК фага можно обнаружить в клетке через 8—9 мин после заражения. С 9-й минуты начинают синт-ся специфичные фаговые белки. На последнемэтапе взаим-ия фага с бактерией происходит самосборка фаговых частиц, кот состоит в необратимом объединении фаговой ДНК и сформировавшейся белковой оболочки. После происходит лизис бактерии
и зрелые фаги выходят в окруж среду. Полный цикл развития фага составляет 30— 90 мин. За этот период образуется 200 и более фаговых частиц, которые способны заражать новые клетки. Лизогения — совместное существование бактерий и бактериофагов, при котором бактериофаг является составной частью нормально развивающейся бактериальной клетки.
17. Генетический аппарат у бактерий. . Нуклеоид - ядерное вещество,
распыленное в цитоплазме клетки. Не имеет ядерной мембраны, ядрышек. В нем локализуется ДНК, представл двухцепочечной спиралью. Обычно замкнута в кольцо и прикреплена к цитоплазматич мембране. виды изменчивости микроорганизмов.Диссоциация — измельчение гладких форм колоний (S- форма) в шероховатые (R-форма). Такой переход от S- к R-форме совершается под влиянием бактериофага и других внешних условий. С изменением формы микроор-ма меняются его некоторые морфолог и физиологич свойства.
Адаптация — приспособл к новым условиям существования, это временные изменения. Трансформация — передача опред свойств одного микроор-ма другому посредством дезоксирибонуклеиновой (ДНК) или рибонук кислот (РНК) .Мутация — вновь возникающее изменение свойств мик-ма, передающ по наследству.Бактерии с измененн признаками наз мутантами. Спонтанные мутации возникают под влиянием неизвестных причин и лежат в основе эволюции мик-мов. Факторы, вызыв мутации, наз мутагенами. Различ физич, хим и биол мутагены. Фенотипич изменчивость - модификации - не затрагивает генотип. Модификации затрагивают боль-во особей популяции. Они не передаются по наследству и с теч-м времени затухают, т.е. возвр-ся к исход фенотипу через большее (длител модификации) или меньшее (кратковрем модификации) число поколений.Генотипич изменчивость затрагивает генотип. В ее основе лежат мутации и рекомбинации.
18. Генетические рекомбинации:
Процесс образов геномов, содерж генетич материал от 2 родит-х форм.у бактерий осущ
врез-е (назв бил.). Рекомбинации:законные и незак. З. рек-я требует налич протяженных, комплементаручастков ДНК в рекомбинир-х молекулах. Она про-дит только между близкородств видами мик-мов.Н.р. не требует наличия протяж ком.уч. ДНК. Трансформация — процесс поглощения клеткой орг-ма свободной молекулы ДНК из среды и встраивания её в геном, приводит к появл у клетки новых для нее признаков, хар-ных для организма-донора ДНК. Клетки, способные воспринимать донорную ДНК, наз-ся компетентными. Сост-е комп-ти непродолж. возникает в опред период роста бактер культуры.В сост ком-ти клет стенка бактерий стан-ся проницаемой для высокополимерных фрагментов ДНК. трансформ-мый фрагмент ДНК связ-ся сбелком,,образ. трансформасому, в кот. он перен-ся в бактер-ю клетку..После проникнов внутр клетки трансформирующая ДНК деспирализуется. ->происх-ит физич включ любой из 2нитей ДНК донора в геном реципиента.Трансдукция — процесс переноса бактериальной ДНК из 1 клетки в другую бактериофагом. Неспецифич: трансдуцир фаги явл только переносчиком генетич материала от одних бактерий к другимСпецифич: хар-ся способ-ю фага переносить опред гены от б.-донора к б.- реципиенту. Абортивная: принесенный фагом фрагмент ДНК бактерии донора не включ-ся
вхро-му бактр реципиент, а располаг в цитоплазме. Конъ-ция - однонаправл перенос части генетич матер-ла при непосредств контакте 2 бак-ых клеток. 1 этап явл прикрепл клетки-донора к реципиентн клетке с пом. половых ворсинок.Затем между обеими клетками обр-ся конъюгационный мостик через кот из клетки-донора в клеткуреципиент могут передаваться F-фактор и другие плазмиды, наход-ся в цитоплазме бактерии-донора в автономном состоянии.Транспозиция - перемещ опред генетич элементов из одного места на хромосоме в другое.Генная инженерия — совокуп приёмов, методов и технологий получения рекомбинантных РНК и ДНК,выделения генов из организма(кл
еток), осуществл-я манипуляций с генами и введения их в другие организмы.
19. Нехромосомные генетические факторы у бактерий .Плазмиды — внехромосомные мобильные генетич структуры бактерий, представл собой замкнутые кольца двунитчатой ДНК несущие от 40 до 50 генов. Выделяют автономные (не связанные с хромосомой бактерии) и интегрированные (встроенные в хромосому) плазмиды.Автономные
существуют в цитоплазме бактерий и способны самост-о репродуцироват-я; в клетке может присутствовать несколько их копий.Интегрированные плазмиды репродуцся одновременно с бактериал.
хромосомой. Интеграция плазмид происходит при наличии
гомологичных последовательностей ДНК, при которых возможна рекомбинация хромосомной и плазмидной ДНК (что сближает их с профагами).Плазмиды также подразделяют на трансмиссивные (например, F- или R-плазмиды), способные передаваться посредством конъюгации, и нетрансмиссивные.iS-последовательности — короткие фрагменты ДНК.Они не несут структурных (кодирующих тот или иной белок) генов, а содержат только гены, ответственные за транспозицию (способность IS-последовательностей перемещаться по хромосоме и встраиваться в различные ее участки). ISпоследовательности одинаковы у разных бактерий.Транспозоны —это молекулы ДНК, более крупные, чем IS-после- довательности.Помимо генов, ответственных за транспозицию, они содержат и структурный ген, кодирующий тот или иной признак. Транспозоны легко перемещаются по хромосоме. Их положение сказывается на экспрессии как их собственных структурных генов, так и соседних хромосомных. Транспозоны могут существовать и вне хромосомы, автономно, но неспособны к автономной репликации.Бактериофааги — вирусы, избирательнопоражающие бактериальные кл етки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. Как правило, бактериофаг состоит из белковой оболочки и генетического материала одноцепочечной или двуцепочечной нуклеиновой кислоты (ДНК или, реже, РНК). Размер
частиц приблизительно от 20 до 200 нм
20. Молекулярные методы диагнос(пцр) (ПЦР) — эксперимент-ый метод молекулярной биологии, позволяющий
добиться значительного увеличения малых концентраций опред фрагментов нукл к-ты (ДНК) в биологич материале (пробе).
Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нукл к-ми (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко исп-ся в биологич и мед практике, н-р, для диа-ки заболеваний (наследственных, инфекц-х), для установ отцовства, для клонированиягенов, выделения новых генов.Денатурация 2-цеп- ую ДНК-матрицу нагревают до 94—96 °C чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией, так как разруш водородные связи между 2 цепями ДНК.Отжиг Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия наз-ся отжигом.Элонгация ДНКполимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки.
Это — стадия элонгации. Полимераза начинает синтез второй цепи от 3'-конца праймера, который связался с матрицей, и движется вдоль матрицы в направлении от 3' к 5'.При проведении лигазной цепной реакции исп-ся способность ДНК лигаз восстанавливать фосфодиэфирные связи в одноцепочечных разрывах 2-цеп-ных молекул ДНК. Для этого синтезируют 2 олигонуклеотида, комплементарные непрерывной последовательности нуклеотидов ДНК, которые после гибридизации с такой последовательностью примыкают друг к другу и разделены лишь одноцепочечным разрывом. При этом 3'- конец предшествующего нуклеотида должен содержать свободную 3'-ОН-группу, а в 5'- положении 5'-конца олигонуклеотида, следующего за ним, должна находиться фосфатная группа.
.
21. Учение о микробном антагонизме. Антагонизм микробный — угнетение роста одного микроба другим..Механизм антагонистического д-я микробов м.б. связан с различ причинами:образованием токсич продуктов метаболизма, а.б. .А.б. - вещ-ва микробного происхождения, облад способностью задерживать развитие и вызывать гибель различных мик-мов, главным образом бактерий..Похарактеру воздействия на бактер клетку а.б. можно разделить на 3 группы:бактериостатич(бактерии живы, ноневсостояни размножаться),
бактерициды (бактерии погибают, но физич продолжают присутств в среде), бактериолитические (бактерии погибают, и разрушаются бактер. Клет. стенки).
группы:Пенициллины — вырабатываются колониями плесневого грибка Penicillinum; Цефалоспорины — обладают схожей структурой с пенициллинами. Исп по отнош к пенициллинустойч бактериям.
Макролиды –бактериостатич. Д-е.. Тетрациклины — исп для лечения инфекций дых. и мочевыводящих путей, лечения тяж инфекцийтипа сибирскойязвы, туляремии, бр уцеллёза. Действие — бактериостатическ. Аминогликозиды — для лечения тяжелых инфекций типа заражения крови или перитонитов. Действие — бактерицидное.Левомицетины — бактериостатич.Гликопептиды
бактерицидное д-е. Противогрибковые — разруш мембрану клеток грибков и вызывают их гибель. Действие — литическое..По мехму д-я:1.Наруш синтеза клеточной стенки 2. Нарушениефункционирования мембран: нарушение целостности мембраны, 3. Подавление синтеза нукл ки-т.4Наруш синтеза пуринов и пиримидинов5. Наруш синтеза белка: ингибирование активации и переноса а|r, функций рибосом (стрептомицин,тетрациклин,)Аб.По спектру действия, по направленности, по хим составу, по происхождению.
22. Определение чувствительности микробов |
23. Механизмы возникновения и |
||
к аб(мик).Для определения чувст-ти |
|
распространения лекар уст. |
|
микробов к а.б. :диффузия в агар (метод |
|||
Резистентность микроорганизмов к |
|||
дисков) и метод последов-х разведений в |
|||
антибиотикам может |
|||
жид или плот питат среде.Метод дисков. |
|||
быть природной и приобретённой. |
|||
Испытуемую культуру засевают сплошным |
|||
|
Истинная |
природная устойчивость характеризуется |
|
газоном на пов-ть чашки Петри с мясопепт. |
|
||
|
отсутствием у микроорганизмов мишени действия |
||
агаром. Затем на пов-ть агара помещают |
|
||
диски, пропитанные растворами а.б.-в |
антибиотика или недоступности мишени вследствие |
||
|
первично низкой проницаемости или |
||
Диски готовят из спец. картона диаметром 6 |
|
||
мм.. Д-е а.б. оценивают по феномену |
ферментативной инактивации. При наличии у |
||
задержки роста вокруг диска после |
бактерий природной устойчивости антибиотики |
||
клинически неэффективны. Природная |
|||
|
|||
инкубации в термостате при 37°С в течение |
|
||
18—24 ч. В зав-ти от диаметра зоны |
резистентность является постоянным видовым |
||
признаком микроорганизмов и легко прогнозируется. |
|||
|
|||
задержки роста различ степень чувств-ти |
|
||
испытуемого штамма: чувствительные |
Под приобретённой устойчивостью понимают |
||
|
свойство отдельных штаммов бактерий сохранять |
||
(более 10 мм), малочув. (менее 10 мм) и |
|
||
|
жизнеспособность при тех концентрациях |
||
устойчивые (отсутствие зоны). Вместо дисков |
|
||
|
антибиотиков, которые подавляют основную часть |
||
при определении чув-ти микробов можно исп. |
|
||
цилиндрики (фарфоровые или |
микробной популяции. Возможны ситуации, когда |
||
большая часть микробной популяции проявляет |
|||
|
|||
металлические), куда заливают растворы |
|
||
антибиотика разной концентрации. |
приобретённую устойчивость. Появление у бактерий |
||
приобретённой резистентности не обязательно |
|||
|
|||
Метод последовательных разведений а.б. . |
|
||
Готовят серию двукратных разведений |
сопровождается снижением клинической |
||
|
эффективности антибиотика. Формирование |
||
антибиотика в жидкой или плотной питат |
|
||
|
резистентности во всех случаях обусловлено |
||
среде, а затем в пробирки или на пов-ть |
|
||
чашек Петри с каждым из разведений |
генетически: приобретением новой генетической |
||
|
информации или изменением уровня экспрессии |
||
засевают испытуемую культуру микробов. |
|
||
После инкубации в термостате опред |
собственных генов.Известны следующие |
||
|
биохимические механизмы устойчивости бактерий к |
||
минимальную подавляющую концентрацию |
|
||
|
антибиотикам:Модификация мишени |
||
антибиотика (МПК) по отсутствию роста в |
|
||
пробирке или на чашке с одним из |
действияИнактивация антибиотикаАктивное |
||
выведение антибиотика из микробной |
|||
разведений.Первую наименьшую |
|||
клеткиНарушение проницаемости внешних структур |
|||
концентрацию антибиотика (из серии |
|||
последовательных разведений), где |
микробной клеткиФормирование метаболического |
||
«шунта». |
|||
|
|||
визуально не определяется бактериальный |
|
||
рост принято считать минимальной |
|
|
|
ингибирующей концентрацией (МИК). |
|
|
|
МИК - наименьшая концентрация |
|
|
|
антибиотика которая in vitro полностью |
|
|
|
подавляет видимый рост бактерий. |
|
|
|
Терапевтическая концентрация – |
|
|
|
определенная максимальная концентрация в |
|
||
организме, которая вызывает антимикробное |
|
||
действие |
|
|
24. Сан-бак исслед воздуха;
1. Метод естественной седиментации Открытую чашку Петри с питательной средой оставляют на горизонтальной поверхности на определенное время . Затем чашку закрывают и после инкубации в термостате проводят подсчет выросших колоний 2. Метод принудительной
сдиментации микроорганизмов из воздуха онован на использовании импакторов, которые осаждают частицы на поверхность плотных питательных сред. Метод импакции с использованием аппарата Кротова заключается в прокачивании воздуха через щель в крышке, расположенной над поверхностью вращающейся чашки Петри с питательной средой. 3. Фильтрационный метод основан на пропускании исследуемого воздуха через жидкость или мембранные фильтры, с последующим мерным высевом в питательные среды, а при вирусологическом исследовании - в культуру клеток.//- общее микробное число (ОМЧ) - количество бактерий в пересчете на 1 м3 воздуха, выросших при посеве на
поверхности питательного агара через 48 часов-
|
палочкам — постоянным обитателям |
|
кишечника человека и животных.Сан-бак |
|
исследования проводятся в строгом |
|
соответствии со специальными |
|
государственными общесоюзными |
|
стандартами, приказами, методическими |
|
рекомендациями, правилами, которые |
|
позволяют дать оценку соответствия |
26. Сан-бак обслед лечеб и детс |
выявленной в окружающей среде |
Метод смывов позволяет определить как |
микрофлоры гигиеническим требованиям. В |
присутствие жизнеспособных микр-в на пов- |
нормативных документах отражены правила |
тити объекта, так и их количество на 1 см2. |
отбора проб, количество материала, условия |
Смывы берут с исследуемой поверхности |
транспортировки, методы и цель |
ватным тампоном или марлевой салфеткой, |
исследования, а также критерии оценки |
удерживаемой пинцетом. Непосредственно |
полученных результатов. |
перед взятием смыва тампонили салфетку |
|
смачивают стерильным физ ра-ром и |
|
тщатпротирают им исследуемую |
|
поверхность. После взятия смыва тампон |
|
тщательно встряхивают в пробирке с опред |
|
кол-вом стерильной жидкости (физ ра-ра или |
|
питательной среды).При исследовании |
|
на бактерии кишечной группы смывы |
|
засевают в среду Кесслер (глюкозо- |
|
пептонная среда с генцианвиолетом и |
|
лактозой) или на 0,1% пептонную воду с |
|
последующим высевом на среду Эндо. |
|
Мегод отпечатков предусматривает |
|
непосредственный контакт плотной |
|
питательной среды с исследуемым.Метод |
|
бакпечаток. Для отпечатков с поверхности |
|
нередко используют контактные чашки |
|
'бактотест" (так называемые бакпечатки). Это |
|
выполненные из пластмассы чашечки Петри |
|
малого диаметра (3,5 см), которые снабжены |
|
плотно закрывающимися крышками. Чашки |
|
"бактотест" заранее заливают доверху |
|
средой Эндо или другими плотными средами |
|
и закрывают крышками. Для взятия |
|
отпечатка снимают крышку и прижимают пов- |
|
ть среды к исслед объекту. Затем вновь |
|
закрывают чашки ''бактотест" и инкубируют |
|
их в термостате. |
|
25. Сан-бакт исслед продуктов Оценивают безоп.продукта для чел.Микробиологические показатели неспецифической микрофлоры, определяемые в пищевых продуктах, подразд на 4 группы .Для проведения исследований используют качественные и количественные методы.Качественными методами определяют характер технологической микрофлорыи возбудителей порчи продуктов.Количественными методами определяют общее количество МАФАМ - мезофильных аэробов и факультативно-
анаэробных микроорганизмов в 1 г.Молоко исследуют на:МАФАМ и их количество;титр и индекс БГКП , S.aureus.Количество МАФАМ определяют путем посева в чашки Петри с расплавленным агаром 1 мл исследуемого молока. После инкубации при 30 °С в течение 72 часов подсчитывают все выросшие
колонии..При исследовании молочных продуктов и молока на БГКП условнопатогненные и патогенные возбудители, ориентируются на массу продукта в которой нормативные документы не допускают содержание этих бактерий.Для пищевых продуктов, в отличие от других объектов, к БГКП относят - грамотрицательные. оксидазонегативные, не образующие спор. С целью определения БГКП в молоке и молочных смесях делают посев определенных объемных разведений. среду Кесслер, которая по составу почти аналогична глюкозо-петонной среде, но содержит генциан-виолет для ингибирования кокковых бактерий. Из
забродивших проб делают высевы на среду Эндо, затем проводят идентификацию выделенных бактерий.
27. Цели и задачи сан микр. Основной задачей санитарной
микробиологии является предупреждение возникновения инфекционных заболеваний, т. е. осуществление постоянного контроля за водой, воздухом, почвой, пищевыми продуктами и т. д. с целью выявления патогенных мик-мов, либо выявление санитарно-показательных мик-мов, кот явл косвенными показателями зараженности окружающей среды. Санитарнопоказательные микмы — это постоянные обитатели поверхностей и полостей тела человека и животных, выделяющихся из организма теми же путями, что и патогенные. Поэтому, чем больше выявлено санитар-но- показательных мик-мов, тем большая вероятность попадания в объекты внешней среды патогенных микроорганизмов.Для каждого объекта внешней среды имеются определенные санитарно-показательные микр-мы — критерии оценки по бактериологическим показателям. Например, в отношении кишечных инфекций роль таких индикаторов принадлежит кишечным