ЖИДКОСТНАЯ ЦИТОЛОГИЯ статья Литвинова
.pdfЖИДКОСТНАЯЦИТОЛОГИЯ |
– |
КАЧЕСТВЕННЫЙПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙЭТАП |
|
ЦИТОЛОГИЧЕСКОГОИССЛЕДОВАНИЯ |
ВЕТЕРИНАРИИ! |
Только&сокровища&ума&действительны.&Ими&можно&делиться,&ничего&не&теряя;&они&даже&умножаются,&когда&ими&делятся.&Чтобы&
приобрести&такое&богатство,&надо&трудиться.&ДЕМОФИЛ.&
&
к.в.н.&ЛИТВИНОВ+Н.В.++
Ветеринарный+врач4цитолог.+Член+ESVCP,+
Эксперт+Органа+по+сертификации+качества+Российской+Метрологической+
Академии+в+системе+Ростехрегулирования+РФ.++
Научный+руководитель+Диагностического+центра+клинической+цитологии+и+ компьютерной+цитометрии+CYTOVET+(www.cytovet.ru)++
Руководитель+коллегиальной+экспертизы.+
Эксперт+ООО+КФ+«Микроскоп+Плюс»,+СПб+тел:+(921)+942404400++++ lutiki2002@mail.ru,+litvinsgaus@gmail.com+
Цитологическийметод исследованияодинизважныхинструментов, помкоторогоосуществляетсящьюдиагмнопатологическихстикагих процесс.Данныйметодимбвсспорныеетпреимуществапередболее инвазивнымиметодикамиприжизненнойморфологии.
“Диагностическаяпункцияявляет сябезопаснымдлябольного
ме,т.е.неодомвызываетускоренияростазлокачественнойопухоли ееметастазпростав,технически,можетбытьнияменена неоднок,заниматьмаловременидляобработкинополученного материала”.
(ПетроваА.С.Цитологиче скаядиагностикаопухолей предопухолевыхпроцессов.АМНСССР. -М.Медицина: , 1985,с7.)
Техническидляприготовлинфоремативноготребуетсянияпарата минимальноеколичематериала.Асптвопункциционннныеметод биопсиималотрактвматичны ическибезболезне,доступлюбаянаны локализацияворганизмеживотного.
Цитолодиасталагическаяносеочастьюъемлемойлинического обследовжипротныхвеакнияериникеврача. рного
Носледотм,уетспехцитологическитьдиагностики,помимой квалцитфик,вмнолзогавцоттогоаоми,какимситбразомбыл получматериал,какобылнобработан,насколькоточбылосоставлено сопроводитенаправлописаместалокализацииниеьноем
исследуемогопатологическогоучастка, |
|
|
идругиемом нты |
преаналитическогоэтапа |
|
допоступлениявцитологическуюлабораторию. |
|
Преаналэтаподизосновныхтическэта,гдепроисходитза(й |
|
||
частуюнеконтролиру!)снижениеконтролякачествалабораторноймоеи |
|
||
цитологическойдиагностике. |
|
|
|
Оснфкормавнтроя |
|
ляпреаналитическогоэтапа |
– периодические |
внешниевнутпров,енедрениеинструкцийрки,наставлений |
|
||
проведениетренинговнарабочихместах,снижающие |
|
|
ошибкиперсонала, |
т.н.человеческий« фактор» |
|
|
|
Длясозданияуслпстандартизациивийпреаналитич |
ескогоэтапаи |
||
обеспечениякачествацитологическогоисследвнедреоваременныеияы |
|
||
метполучматерды,пробоподготовканияалаидоставка. |
liquid based cytology (LBC) – новый |
||
ЖИДКОСТНАЯЦИТОЛОГИЯ |
|||
стандартдляприготовлениямонослцитологическихпрепаратовйных. |
|
||
Большипривзятибокнство |
|
и илиперенпатологическогосе |
|
матедляприалаготовлосновнойямазков,являепртсяиложныхчиой |
|
|
|
результатовдиагностикибольногоживотного,снижсткачествотусющей |
|
|
|
рабоцитологическылаборатории,дискв морфологаедачай. тации |
|
|
|
Нередковрачамиос |
уществляетсянекомпетентноепунктирование |
|
|
аспизноврироспослобразоваваниедующимравнияомерным |
|
||
распредматериалнастекле.Слишкомлениемтолстыймазокявляется |
|
|
|
причинойполучениянеполноценногоматер.Сликровьи,зьала |
|
|
|
присутсвовзятвующаяом |
|
матери,мешперенесклеткианалемазокют, |
|
такжематн риалвозможноравномерноперемешать.Припереносе |
|
|
|
материнастеклотраладициспосклеткимогутнбомпопастьнымв |
|
|
|
препарат.Подсушипотеряприкинструментуваниелипшихклеток |
|
|
|
значительноуменьш |
|
аетдиагностическуюинформативность |
|
микропрепаратов. |
|
|
|
Рисунок№Маз1 , и |
|
лучнаст.Слевакланные |
– |
адициспосоннымбом |
, справа – |
идкостнойцитологии |
|
Обилиепреаналитическихошибок,уэтихспеци“ ”,ст листовновится оснобарьеромвсобственымдиагработеностическойной недопреимуществониманиемцитологическогоисследования.
ОписаннметодЖИДКОСТНОЙыЦИТОЛОГИИепозволяисключить этинегативныеф акторывсуществующихнедостпреаналитическоготках этапа.
Рисунок№Классический2 |
Рисунок№3 |
+ + Жидкостнаяцитология. |
маз.Содержимкслухового |
Глубокоесодержимое |
влагалища.Собака |
прохода.Собакаметисл7. |
шарпейл.Окраска11поПапаниколау. |
|
ОкраскаметодомПапенгейма. |
Визуаувеличение40х.ьное |
|
Визуаувеличение40х.ьное |
|
|
Основныеэтапы :
А. ДОЛАБОРАТОРНЫЙ ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙЭТАП
1.Получматклассическимирнспособамиалааспирация(, пун,эксфоли,цияотпечдр.) аток
Рисунок№4 |
урогенитальныещетки |
Рисун№Помещение5 смывак |
cytobrash ввиалу |
|
|
наконечникащетки |
|
|
|
Novaprep |
|
сприменесовременногоинструментариемцитощетк( ия |
cervix- |
|
brush, |
cytobrash, |
урогенитальныещетки,современные |
цитолтроакарыибгиопчеиглыскиеийные |
стандарта sterile eo и |
др.)
2. Транспортная среда - консервант (PreservCyt, Novaprep - solution
preservative). Собранныйклеточныйматериал,помещенныйввиалу |
|
||
сконсервантом( |
PBS,коммерческиеспирто |
-эфирно-формалиновые |
|
смесидр.),преповреждениюятствуетклеток,позволяет |
|
||
отфислиизьтровзьбежактериальногоатьзагрязнения, |
|
||
споспешествуетоптимальныхуслд вияхставитьпробу |
|
||
лабораторию. |
Позвосденесколькоатьцяет |
итологических |
|
препаратовизпробы1 . |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Рисунок№Виала6 щеткой Рисунок№7 + + Виаласконсервантом
Novaprep - solution preservative с
пункционнымматериаломиз лимфатическогоузла.
Важноот,материалхранитьможотоеддонесколькихли |
|
|
|
|
|
месяцевт.к.консервантеустойчивколебаниямтемпературы |
|
|
|
|
|
(НЕЗАМОРАЖИВАТЬ! |
).Внекоторыхконсе едвирующих |
|
|
ах |
|
клеточныйматериалпригодендля |
|
дополнительныхлабораторных |
|||
исследований (генети чески-молекулярных,И,ЦХидр.). |
|
|
|||
Б. ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП |
|
|
|||
Способыполучениямонослцитологическихпрепаратовйныхпри |
|
|
|
|
|
переносеклетокизфиксирующегорастворанастекло |
|
|
|
|
|
использметодовцентрифугированияванием,осажденияили⁄ |
|
|
|
|
|
фильтрации. |
|
|
|
|
|
1. Вареализацнтыметоджидкостнойцитологики |
|
|
|
испомощью |
|
цитоцентрифуг ( Cyto-Tek, |
CytoSpin, |
DiffSpin |
идр.). |
||
Цитоцентрифугирование,насегодде,уже,относитсяяшнийьк |
|
|
|
|
|
“Ручнспособу”приготовлениямумазк |
|
ов. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Рисунок№8Цитоцентрифуга |
|
Рисунок№9 |
Распределение |
Cyto-Tek на12кассет |
о |
жидкостногоматериалавкассеты. |
|
стеклами. |
|
|
|
Здесьследуотмпреетиэтмойьуществаетодики |
- |
простотув |
|
освоениивнедрении,возможнизготнесколькихстеколвлениястьиз1 |
|
|
|
образца,уд служивноемалозпринебольшоманиетратностьпотоке |
|
|
|
исследований. |
|
|
|
Выдинеленыдостаткиданной |
|
методики - требуютсянаработки |
|
навыкиотлабораторсотрудвпригнмазкаоикавгозависимостивлении |
|
|
|
отвидаклеточногоматериала. |
|
Полноручнойспособнизкойтью |
|
производительностью. |
Вбольшинствеслучаевнеобходимо |
разведение |
|
образцапривысокойклеточностима |
|
териалацентрифугирование( обычной |
|
центрифуге,разведеносадкамкл1000и),ексатораэто |
|
|
требует |
использдополнительногоборудованиявортекс(,нефелометр),
отсуточадствуютиобразцащения,центрифугированиеможетприводить
кразрушениюкл |
еточныхкомплексов,мультинаслаиванию. |
|
2. Клетобочноеградиентещениеплотности( |
SurePath) «золотой |
|
стандарт»качества. |
+ |
|
Первоначальнотребуетстандартизованногоперемешиваниявиал |
||
материаломвортекс). ( |
Приготовлениесупернатанта |
|
(дополнительный |
аппнаслоениюаратдвойное+ |
|
центрифугирование). |
Пригмотовнослойногомазкаение |
происходитизсупернатантавнекоторыхкомплектах оборудовапроизвостандияокраскаартизированнаяитсяпреп рата (опциональпроцесса)Всестадии. можноаблюдатьи прервмешаться/ любоймомент.Наличиеаппарата автоматизипредпапроне(позволяетаратсмотраванного сканировать,сохранятьизображ,осущобменинияствлять телеконференции).
Рисунок№10Этапыпреаналитической |
|
|
пробоподгметодомобогащентовкия |
наградиенте |
|
плотности. |
|
|
Впроцеприготовленияссеупе натоисходудаленчастнтаите |
|
|
диагностическогоматериалакровь( ,воспэлементылитльные |
|
– это |
удобноприисследованиимазковна |
гормональнуюнасыщенность |
, |
нокатегорнедопустимоприисследоче ки |
ваниивоспалительных |
|
процессовионкоморфологии!)Несколько. этапов |
|
|
центрифугированияможетприводитькразрушениюклеточных |
|
|
комплексов,деформацклеточныхструк.Ниизкаяепеньур |
|
|
автоматизации - большойобъемручнтруда50%овремениго. |
|
|
Существенный объспециальныхмрасходныхматериалбольшое( в количесскрытрат) ыхво – сложнаясистемафинансового планированиязакупок.
3.Фильтрация( ThinPrep) Автоматичесперемешив,фильтрвакоеуумомареносеция
клетокметодомотпечатковссоблюдениемстандар |
товиконтроля |
качества. |
|
Рисунок№11 |
|
|
Рисунок№ 12 |
+ + |
Анализатор |
Фильтрация( |
ThinPrep)включаетсебя |
цитологическихпроб |
ThinPrep |
||
3основныхэтапа: Сбор1об. азца |
|
|
|
|
|
2Перемешив. фильтранциея |
|
|
|
|
|
вакуумомПерен3.клетокметодомс |
|
|
|
|
|
отпечатков. Общая4.схема. |
|
|
|
|
|
Высокаястепеньавтоматизациидо( Имее70%)сис. сяема |
|
|
|
||
автоматизипредп.Минимальноероколичествоотраванного |
|
|
|
||
расходныхмате.П системаиаловостаярастоимостичета |
|
|
|
||
исследования. |
|
|
|
|
|
Однимизос овныхедостатков |
даннойсистемыявляетсязакрытая |
|
|
||
системаштрих |
-кодированиябольш( случаевневозможнонстве |
|
|
||
совмесвнутриить |
клинической (внутрилабораторной)си |
стемой |
|||
ЛИСи |
\илидругихкомпрограммьютерныхстатучета,невозможна |
|
|
|
|
рабобезштриха |
-код)Большой. рискв |
поврежденияклеток, |
|||
особенноразрушенкомприменениелексов(вакуумнойя |
|
|
|
||
аспирации)Отсутствует. возможностьприготовнесколенькиях |
|
|
|
||
стеколизпробы1 .Относительнаядороговизнасистемы. |
|
|
|
||
4. Автоматизированнаяжидкостнаяцитология |
– |
комбинированная |
|||
технология.Цитолпрогическийцессор |
NOVAPREP®“NPS” |
Автоматическийметодпассф льтрациивнойдво ного осаждениявысокий( стандарткачес). ва
Рисунок№13Методпассфильтрациивнойдвойного |
|
|
|
осажден. сбор1материала. ввиалуя2. |
|
Загрузкавиал |
|
предместеколвш 3Вативн.ыготовыхгрузкамазков. |
|
|
|
Специальноразрабовиалы:устдляройствоанныесъема |
|
|
|
наконечникцитощеток,фидотделеьтряслизив, одлянусия |
|
|
|
накопленияосажденныхклеток.Возможность |
|
|
|
одновремен/отсроченогоно |
приготовнескостеколиз1енькиях |
||
виалы. режимов10дляприготовлцитологическихпаратовния |
|
|
|
(отскрининга |
PAP-test |
довысококонцентрированногодля |
|
разреженныхпроб)Система. приготовленияпробдлямолекулярных |
|
|
|
исследавт( оматизированныййотб |
|
|
орвмикротипаробирки |
«Эппендорф»)Сист. предотвращениямаконтаминацией |
|
вирусами. |
|
Системаприготовленияпробд юбыхдополнительных |
|
|
|
исследавт( ованматотборрутинныезированныйлабораторные |
|
|
|
пробирки)Полностью. автоматизированныйпроцесс |
|
|
|
пробоподготовки.Снижениедолиручтрудаого90 |
|
-95%Ручной. |
|
трудзаниотдо2м5аетинутназагрузкувиал |
|
+вштативпроцессора |
|
(5минутнаштатив,околосек30напробу)ивыборрежима |
|
|
|
компрограммеьютерной.Отсутствиепотерь |
|
биоматериала(100%в |
|
исследовании). |
|
|
|
Кардинизменекачтльестиндоистоверностива |
|
|
|
результатов. |
Один аппробоподготовкиаратдлявсехвидов |
||
исследованиймикроскопия( ,иммун,молекулярныецитохимия |
|
|
|
методы)Универсальная. систид мантификацииоткрыта(для |
|
|
|
любыхсистемкодирования |
– ручное, |
штрих-кодит.п.рование) |
Значительнаядороговизнасистемы,техническсопровогождения расходныхматериалов – являютсяосновныминедостатками.
ОбластиприменразличныхеЖИДКОСТНОЙтодовния ЦИТОЛОГИИ
Дляцелейпервичноговнедренияуслови |
яхкрайнеограниченных |
ресурсболвспоегометоддходитв |
цитоцентрифугирования. |
Дляцелейрутиннойскр клинической,атакжеговойнаучной |
комбинированная технология |
практикиболвсподходитеего |
|
Novaprep®: |
|
Дляцелейнаучногопоискавцит логической |
практике - система |
клеточногообогащения |
(SurePath)зарекомендоваласебя,как |
«золотойстанд»приа(персоналаличииртдляобеспечения |
|
функционирования). |
|
Применениеавтоматизированныхметодов окраскицитологическихмазков
Извеосновныетныпособы окраскистекол : 1. Ручной: а.рельсоб.вкюветахый
Классическиеметодыокраскипреприменениемаратовручного трудаснизкимуровко стандартовемроляпреаналитического этапа.
Рисунок+№++14)Штативы4рельсы+
для+окраски+мазков+"наливкой")
Рельсыиз нержавеющейстали предляназначпроведенияы окрнгоризонтальноски расположстеклепутемнном наливки красителейнамазок.
Рисунок+№++15)Кюветы+для+проводки+и+
окраски+гистологических+и+
цитологических+препаратов+
Кюветысосъемнымштативом настеко12 ликрышкойизготовлены изполиоксиметиленаполиацеталя( ), устойчивогокдействиюстандартных компонентовпроводкикрасителей длягистологииспирты,(ксилол,
толуоли.д.).
2.Автоматический
«золотойстандарт »качества окрашиванияпрепаратовссоблюдением режимовокраскиотвечающийтребованвнутрилабораторногоям преаналитическогоэтапа.
Рисунок№16 Hema |
-Tek 2000 – |
Рисунок№ 17 |
МидасIII. |
прибордляокрмакровисз |
|
Стайнеравтоматизированнойокраски |
|
Дозагрузкамазковбезостановки |
|
стеколпредляназначен |
|
прибора |
|
использованиягематологии, |
|
Производительность – 60 мазков |
гистол,цитологии |
|
|
час |
|
микробилаб.ораторийлогических |
|
Простоеобслуживание |
|
Полопжительной |
цией |
Стандартизацияокраски |
|
являетсяналичиеводба, иой |
|
исключаетошибки |
|
свободныйподходквыборуреагентов |
|
Свежаякраскадлякаждогомазка |
|
иподсоекводопроводуилиинение |
|
(подслаиваниестекло) |
|
дистилляторудляпромывкистекол |
|
Восновэкономич |
еским |
и/илиаппарата. |
|
недостаткомявляетсявысокая |
|
Изнезначительныхнедостатков |
|
стоимостьанализатора |
|
даннойсистемыявляетсязагрузка |
|
стандартизированныхреагентов. |
погружногоштативастек,30 л |
|
|
Потенциальнаяв |
озможность |
излишние потекрасящихастворов |
|
использованиягематологии |
|
иоткрытыеванночкизагрязнение( |
|
редкихслучаяхвцитологии. |
|
реактивовиспарениеизменением |
|
|
|
конценрастворов) рации |
|
Характерисприбмогутровтвразличнымикиетствовать требовадиагиностическихиямаучныхлабораторий,взависимостиот пропускной способностиисследовательскогоподхода.