- •3) Типы рестриктаз
- •4) Предмет биотехнологии
- •6) Какие функции выполняют фолликулы и желтое тело в яичнике самок
- •7) Задачи биотехнологии на современном этапе
- •10) Основные этапы развития биотехнологии
- •11) Кто такие прокариоты
- •13) Перечислите основные свойства Escherichia coli
- •16) Осеменение коров доноров при трансплантации эмбрионов
- •19) Как синтезируют гены с помощью пцр
- •20) Что такое метод elisa
- •21) Назовите методы синхронизации охоты у различных сельскохозяйственных животных
- •22) Изложите принцип метода пцр
- •Симптомы дисфункции яичников
- •Причины
- •Диагностика
- •Лечение дисфункции яичников
- •Осложнения и последствия
- •Профилактика дисфункции яичников
- •Содержание
- •Отбор[править | править вики-текст]
- •Генная терапия[править | править вики-текст]
- •29) Что такое геномная дактилоскопия
- •Области применения[править | править вики-текст]
- •32) Что такое Комбинаторная библиотека кднк
- •Получение каллусной ткани у разных растительных объектов
- •Получение и культивирование каллуса из стебля картофеля
- •Научное значение[править | править вики-текст]
- •Биотехнология[править | править вики-текст]
- •Первичные клетки.
- •Получение тканевой первичной культуры.
- •Субкультивирование первичной культуры.
- •Замена питательной среды.
- •Употребление термина[править | править вики-текст]
- •Пример клонирования днк[править | править вики-текст]
- •Содержание
- •Секвенирование по Сэнгеру[править | править вики-текст]
- •Моральный аспект[править | править вики-текст]
- •XXI век[править | править вики-текст]
- •Методы генной инженерии
Содержание
[убрать]
1Рестрикция — лигирование
1.1Выделение вставки
1.2Трансформация
1.3Трансфекция
1.4Отбор
1.5Генная терапия
2Литература
Рестрикция — лигирование[править | править вики-текст]
В классических методиках рестрикции и лигирования, клонирование фрагмента ДНК включает четыре стадии: разрезание ДНК эндонуклеазами рестрикции,лигированиеДНК свектором,трансфекцияи последующий скрининг (отбор).
Выделение вставки[править | править вики-текст]
Первоначально необходимо выделить участок ДНК для клонирования. Часто препарат ДНК для клонирования получают при помощи полимеразной цепной реакции, а также разрезания ДНКрестриктазами, обработкой ДНКультразвуком, фракционированием при помощи агарозногоэлектрофореза ДНК. Выделение вставки может быть сделано технологией клонирования шотган,комплементарной ДНК, искусственным химическим синтезом.
Трансформация[править | править вики-текст]
После лигирования плазмидой трансформируют бактерии для наращивания. Бактерии далее выращивают на селективной среде для отбора колоний, содержащих встройку. Индивидуальные колонии отбирают и изучают на наличие встройки.
Трансфекция[править | править вики-текст]
После лигирования реакционную смесь со встроенным в требуемой ориентации вектором помещаютв клетки. В зависимости от типа клеток используют химическую сенситизацию клеток, электропорацию илигенные пушки. Для химической сенситизации не требуется специальное оборудование.Электропорациюиспользуют в случае необходимости высокой эффективности трансфекции. Генные пушки применяют в случае растительных клеток и тканей, так как клеточная стенка растений не дает чужеродной ДНК проникать в цитоплазму и ядро.
Отбор[править | править вики-текст]
Получают культуры трансфецированных клеток. Так как описанные выше процедуры часто имеют низкую эффективность, требуются способы выявления клеток, содержащих требуемую вставку в правильной ориентации и отделение таких клеток от не содержащих вставки. Современные векторы для клонирования содержат селективные маркеры (как правило, гены устойчивости к антибиотикам) которые дают возможность расти только клеткам с правильной вставкой расти на селективной среде (с антибиотиком). Векторы для клонирования также часто содержат маркеры, обуславливающие окраску колоний, например при выращивании на среде, содержащей X-gal. Для точного подтверждения успешного клонирования, требуется проверка при помощиполимеразной цепной реакции(ПЦР),полиморфизма длин рестрикционных фрагментов(ПДРФ) илисеквенирования ДНК.
Генная терапия[править | править вики-текст]
Генная терапияподразумевает введение работающего гена в клетки, в которых он отсутствует, что приводит к излечению болезни, связанной с отсутствием или неправильным функционированием гена. Генную терапию классифицируют на две категории. В первом случае мутации содержатся встволовыхилиполовыхклетках, тогда весь организм и все потомки имеют дефект. Во втором случае мутация возникает всоматических клетках, возможна пересадка модифицированных клеток или тканей. Клинические испытания генной терапии соматическими клетками начались в конце 1990-х, для лечения рака крови, печени и легких.