3.Материалы и методы.

3.1. Методика экспериментального исследования

Цель работы: является получение и исследование протонно-релаксационных свойств коллоидных растворов наночастиц оксида железа различных размеров.

Задача работы №1 Определить режимы метода химического синтеза наночастиц сложного оксида железа с учётом требований к их функциональным свойствам

Задача работы №2 Исследование влияния полученных растворов наночастиц сложного оксида железа на протонно-релаксационные параметры различных биологических средах.

Задача работы №3 Определение цитотоксичности раствора наночастиц сложного оксида железа

Методы, используемые для решения данной задачи Реакция Элмора (получение раствора НЧОЖ), центрифугирование (отделение крупных частиц от мелких), просвечивающая электронная микроскопия

Методы, используемые для решения данной задачи Протонная релаксометрия

Методы, используемые для решения данной задачи МТТ- тест.

3.2.Исследуемые соединения и реактивы.

• МТТ – тиазолий синий тетразолий бромид («ДиаэМ», Германия)

• Раствор ВЕРСЕНА («ПанЭко», Россия)

• Раствор трипсина 0,25% («ПанЭко», Россия)

• Среда DMEM/ cNa₂CO₃ («ПанЭко», Россия)

• Сыворотка крови эмбриональная телячья («ПанЭко», Россия)

• НЧОЖ (Образец в состав которого входят частицы железа размеров 50-60нм). Частицы получены на кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии им. Академика П.В.Сергеева МБФ

• Резовист(RV)-железосодержащее контрастное средство, предназначенное для диагностики печени со средним размером частиц 30-50 нм.

• Лимонная кислота- C₆H₈O₇

• Цитрат натрия- Na3C6H5O7

• Н2О-дистиллированная вода

• раствор хлорида железа II

• раствор хлорида железа III

• раствор солей Fe (II) и Fe (III)

• аммиак- NH3

3.3. Методика получения суперпарамагнитных и ферримагнитных

наночастиц сложного оксида железа.

Анализируя последние литературные данные, а также прослеживая прогресс, достигнутый за последние десять-пятнадцать лет, можно сказать, что проведение химических реакций в растворах представляет собой один из наиболее удобных путей для получения магнитных наночастиц. Формирование наночастиц достигается путем подбора определенных условий протекания реакции (тип реакции, растворитель, температура) и использованием лигандов и поверхностно-активных веществ, специфически ведущих себя на возникающей границе раздела фаз и полностью или частично ограничивающих дальнейший рост твердой фазы[33].

Предлагаемый нами в качестве действующего вещества сложный оксид железа – магнетит (Fe₃O₄) был получен химическим методом при осаждении магнетита щелочью из водного раствора солей двухвалентного железа в строго выбранных условиях таким образом, чтобы размер частиц в коллоидном растворе не превышал 5 – 9 нм. В качестве основной химической реакции, для получения наполнителя магнитной жидкости выбрана реакция Элмора[6], при этом исходные реактивы представляют собой соли трех и двух валентного железа:

2 Fe Cl ₃ + FeCl ₂^.+ 8 NH ₄ OH Fe ₃ O ₄ + 8 NH ₄ Cl + 4 H ₂ O

FeSO₄*4 H₂O в количестве 3 г растворяли в 12,5 мл воды и 6 г FeCl₃*6H₂O в 12,5 мл воды, каждую по отдельности в течении 15 мин. интенсивно перемешивая. Затем оба раствора перемешивали в течение 1 часа с рекомендуемой скоростью 800 об/мин. Аммиак добавляли со средней интенсивностью в количестве 25 мл, в течение 15 мин интенсивно перемешивая. Затем добавляли стабилизатор- цитрат натрия в концентрации 2,4мг/мл.