4.3. Сем. Пастереллы Род Пастереллы

Hofer M. et al. (1982), Коломнина Г. Ф. и соавт. (1988) изучали влияние различных условий культивирования на ростPasteurellamultocida.

Коротеева Л. А. (1991) готовила питательные среды для куль­тивирования вакцинных штаммов кампилобактерий и пастерелл на основе ферментативного казеиново-дрожжевого гидролизата. Позже Коротеевой Л. А. и соавт. (1996) предложена для культи­вирования пастерелл среда на основе лактопептона, биологиче­ские испытания которой показали ее перспективность.

SandhuТ.etal. (1991) отмечают отсутствие роста на цитрат-ном агаре Симмонса и агаре МакКонки всех штаммов Р. апа-tipestiber, выделенных от уток и другой домашней птицы в США, Сингапуре, Англии и Германии.

Gatewood D. et al. (1994) изучали влияние состава культураль-ной среды на экспрессию специфичных белков внешней мемб­раныP.haemolytica, образование капсулы и лейкотоксина.

Moore M. et al. (1994) разработали селективную обогащенную среду для выделения пастерелл от птиц и окружающей среды.

MosierD.etal. (1994) провели сравнительное исследование супернатантных антигенов пастерелл серотипа-1, выращенных на среде без сыворотки и с добавлением альбумина сыворотки плодов коров и сыворотки лошади.

Регламентная среда для культивирования возбудителя пасте-реллеза свиней и птиц готовится на основе ферментативного гидролизата мяса с добавкой пептона и минеральных компонен­тов. В связи с высокой стоимостью исходного сырья Клыков С. П. и соавт. (1996) предлагают среды приготовленные из альтерна­тивных источников. Сопоставимые результаты роста пастерелл получены на смесях панкреатических гидролизатов рыбно-кост-ной муки, крови и казеина при общем содержании аминного азота 200—250 мг%. Среды, на основе любого отдельно взятого

Род Хемофилус

Бактерии рода Haemophilusвызывают различные заболева­ния как у людей, так и у животных. Из-за требовательности гемо-филов, обнаружение и выделение патогена возможно только на высококачественных средах с удовлетворительным составом (CzukasZ., 1986), содержащихXиVфакторы роста. Эти микро­организмы очень чувствительны к влиянию внешней среды, фи­зических и химических факторов. Трудности бактериологиче­ской диагностики связаны также с антагонистическим влиянием на их рост ряда бактерий. Поэтому совершенствование методики выделения гемофильных палочек проводится в направлении по­вышения чувствительности питательных сред и создания селек­тивных условий. Широкое применение нашли среды Левенталя, Филдса, сердечно-мозговая, с гемином, шоколадный агар и др. Селективные условия создаются антибиотиками бацитрацином, клаксоциллином, ванкомицином. Нестабильность одних сред,трудоемкость и высокая стоимость приготовления других побуж­дают к их усовершенствованию. В частности, для выделения ге­мофильных палочек предлагается «витаминный агар» с олеатом натрия (цит. по Фаустовой М. Е., 1980).

Н. aegypticus, как и Н.influenzae, могут вызывать острые конъюнктивиты. Характеризуются своими ростовыми потребно­стями и, в отличие от Н.influenzae, не растут на триптиказо-со-евом агаре с добавлениемXиVфакторов, плохо растут на яич­ной среде, шоколадном агаре и несколько лучше—на агаре Ко­лумбия. Эти различия отчасти могут быть объяснены содержанием крахмала в среде. Жирные кислоты яичной средытоксичны для Н. aegypticus и подавляют его рост, что может быть использовано для дифференциации Н.aegypticus, и Н.influenzae, а также для определения его питательных потребностей (Abdel-AzizH.etal., 1986).

Balke E. et al. (1988) показали возможность дифференциации видов и таксоновHaemophilusпо реакции расщеплениеL-алани-

164

165

риями могла быть обнаруживаема и уровень, следовательно, оп­ределялся между 1 и 150/г.

RaccachM.,GeshellD. (1995) показали ингибирование не­скольких штаммов L. monocytogenes (CA, ОН, SA и V7) в молоке истощенной средой, обезвоженной педиококками (dehydratedpediococcalspentmedium—DPSM). Зоны ингибирования форми­ровались против всех тестируемых штаммов листерий.

EkJund M. et al. (1995) изучали сферу действия и источники L. monocytogenes в рыбных изделиях холодного копчения и продук­тах предприятий перерабатывающей промышленности. Популя­ции L. monocytogenes инокулированные на поверхности соленых кусков лососи изменялись очень незначительно в процессе холод­ного копчения при температуре от 22,2—30,6°С в течение 20 ч, с или без применения дыма, но когда температура обработки сни­жалась до 17,2—21,1°С, популяции уменьшались в 10—25 раз ко­гда дым применялся. ПроникновениеL.monocytogenesвнутрьэтих кусков увеличивалось в 2—6 раз при 17,2—21, ГС и в 100 раз при 22,2—30,6°С, независимо от присутствия дыма.

Показана реверсия покоящихся форм листерий в вегетатив­ное состояние под воздействием фетальной сыворотки и ауксина (Пушкарева В. И. и соавт., 1997).

Capell С. et al. (1995) предлагают метод и среду для электриче­ского определения Listeria spp. в пище. Описывают усовершенст­вование жидкой среды для детекции видов листерий мониторин­гом емкости образцов пиши, предварительно обогащенных в бульонеUVM1. Показан быстрый ростL.monocytogenesв жид­ких средах с селективностью, основанной на антибиотиках при­сутствующих вOxford-arape. Концентрации Оксфордских селек­тивных агентов в конечном варианте емкостной среды были вы­ше, чем в собственноOxford-arape, и эта среда не требовала проведения реакции эскулин/цитрат железа-аммония. Среда ба­зировалась на способности листерий индуцировать изменение более чем на 30% ее емкости в течение 30 ч. При параллельном сравнении выявления листерий в тестируемых образцах крупной пищевой компании, метод дал меньшее количество ложнополо-жительных результатов, чем использованиеFraser-бульона.

Выделение L. monocytogenes путем посева материала на плот­ные среды считалось невозможным, так как при этом затруднено разграничение данного микроорганизма от непатогенных листе­рий.ForetJ.,DoreyF. (1997) показали быструю идентификациюL.monocytogenesна селективной среде ЕНА. Основой среды яв­ляетсяColumbia-агар с 5% бараньей крови и с добавлением сфингомиелиназы (10 ЕД/л), способствующей образованию чет­ких зон гемолиза вокруг колоний. Добавление 0,4% 4-метилум-беллиферил-Р-О-глюкозида позволяет идентифицировать род листерий по флуоресценции колоний в ультрафиолетовом светепри 450 нм. Среда содержит 1 % хлорида лития и комплекс анти­биотиков (SR1400 «Oxoid»). Высеваемость на предложенной

среде была значительно выше, чем на средах Oxford и Palcam. Се­лективную средуPalcamдля изоляции листерий выпускают мно­гие зарубежные фирмы.

OttavianiF.etal. (1997) испытали селективную агаровую сре­ду САС дляL.monocytogenesс добавлением селективного кок­тейля и дифференцирующего реагента, состоящего из смеси ме­таллов, а также очищенных фосфолипидов. Через 24 ч на средеразвиваются голубые колонии рода листерий, a L. monocytogenes окружены мутным ореолом. Применение САС рекомендовано для первичного выделенияL.monocytogenesкак экономичный и быстрый метод.