- •Биотехнология как наука и сфера производства. Предмет, цели и задачи биотехнологии, связь с фундаментальными дисциплинами.
- •Биообъекты как средство производства лечебных, реабилитационных, профилактических и диагностических средств. Классификация и общая характеристика биообъектов.
- •Макробиообъекты животного происхождения. Человек как донор и объект иммунизации. Млекопитающие, птицы, рептилии и др.
- •Биообъекты растительного происхождения. Дикорастущие растения и культуры растительных клеток.
- •Биообъекты - микроорганизмы. Основные группы получаемых биологически активных веществ.
- •Биообъекты - макромолекулы с ферментативной активностью. Использование в биотехнологических процессах.
- •Направления совершенствования биообъектов методами селекции и мутагенеза. Мутагены. Классификация. Характеристика. Механизм их действия.
- •Направления создания новых биообъектов методами генетической инженерии. Основные уровни генетической инженерии. Характеристика.
- •Клеточная инженерия и ее использование в создании микроорганизмов и клеток растений. Метод слияния протопластов.
- •Методы клеточной инженерии применительно к животным клеткам. Гибридомная технология и ее использование в биотехнологических процессах.
- •Инженерная энзимология и повышение эффективности биообъектов. Иммобилизированные биообъекты и их преимущества.
- •Иммобилизация биообъектов. Носители, используемые для иммобилизации.
- •Включение ферментов в волокна
- •Микрокапсулирование биообъектов как один из методов их иммобилизации. Микрокапсулы. Характеристика. Вспомогательные вещества. Виды оболочек.
- •Методы получения микрокапсул. Классификация. Характеристика. Технологические схемы производства.
- •16.Липосомы. Определение. Характеристика. Использование в биотехнологических процессах и для создания инновационных лекарственных форм.
- •17.Слагаемые технологического процесса. Структура биотехнологического производства.
- •Подготовительные стадии
- •Разделение жидкости и биомассы
- •Выделение продуктов биосинтеза
- •Очистка продукта
- •Концентрирование продукта
- •Подготовительные операции при использовании в производстве биообъектов микроуровня.
- •Питательные среды. Классификация. Компоненты питательных сред. Методы стерилизации.
- •20. Очистка и стерилизация технологического воздуха. Схема подготовки потока воздуха, подаваемого в ферментатор.
- •23.Характеристика биопроцессов в зависимости от целевых продуктов: первичные и вторичные метаболиты, биомасса как целевой продукт.
- •24.3Начение асептики в биотехнологических процессах. Методы стерилизации, используемые в биотехнологическом производстве.
- •25.Аппаратурное оснащение процессов выделения и очистки продуктов микробного синтеза.
- •Брожение как разновидность биологического окисления. Спиртовое брожение
- •Получение спирта и других продуктов брожения с использованием микробиотехнологическихпроцессов.
- •32.Ферменты, используемые в генетической инженерии (рестриктазы, лигазы). Генетические маркеры.
- •Механизмы регуляции биосинтеза первичных метаболитов.
- •Биологические, физико-химические и другие методы рекуперации и обезвреживания выбросов в атмосферу.
- •Инсулин. Источники получения. Рекомбинантный инсулин человека. Синтез а- и в- цепей. Биотехнологическое производство рекомбинантного инсулина.
- •Гормон роста человека. Механизм биологической активности и перспективы применения в медицинской практике. Конструирование продуцентов. Получение соматотропина.
- •Производство ферментных препаратов. Ферменты, используемые как лекарственные средства. Традиционные способы получения ферментных препаратов.
- •Микроорганизмы прокариоты - продуценты витамина в12 (пропионово-кислые бактерии и др.). Схема биосинтеза. Регуляция биосинтеза.
- •Производство моноклональных антител и использование соматических гибридов животных клеток. Гибридомы. Этапы производства моноклональных антител.
- •Подготовительные этапы перед проведением слияния
- •Слияние
- •Клонирование гибридомных клеток
- •Вакцины на основе рекомбинантных протективных антигенов и живых гибридных носителей. Технологические схемы производства вакцин и сывороток.
- •Области применения моноклональных антител. Характеристика.
- •Культуры растительных клеток. Методы культивирования. Лекарственные препараты, получаемые из каллусных и суспензионных культур.
- •Культуры животных клеток. Методы культивирования.
- •51.Антибиотики как биотехнологические продукты. Биологическая роль антибиотиков как вторичных метаболитов. Пути создания высокоактивных продуктов антибиотиков.
- •Биомедицинские технологии. Определение. Характеристика.
- •Препараты биогенных стимуляторов. Характеристика. Классификация. Технологические схемы производств.
- •Препараты из животного сырья. Характеристика. Классификация. Технологические схемы производства.
- •Краткая история развития биотехнологии и периоды развития биотехнологии. Характеристика. Биотехнология лекарственных средств.
- •Области применения моноклональных антител. Методы анализа, основанные на использовании моноклональных (поликлональных) антител.
- •Ферменты, используемые в генетической инженерии. Последовательность операций при включении чужеродного гена в векторную плазмиду. Перенос вектора с чужеродным геном в микробную клетку.
- •Цикл развития каллусных клеток, понятие дифферинцировки и дедифференцировки в основе каллусогенеза. Тотипотентность и ее значение.
- •Характеристика каллусных и суспензионных культур тканей растений. Понятие физиологической асинхронности и физиологической гетерогенности.
- •Синтез вторичных метаболитов с использованием культуры клеток и тканей растений.
- •Иммунобиотехнология. Диагностикумы, аллергены, бактериофаги, токсины и анотоксины. Характеристика и способы получения.
- •Нормофлоры (пробиотики, микробиотики, эубиотики) - препараты на основе живых культур микроорганизмов-симбионтов. Характеристика. Резидентная микрофлора жкт, причины дисбактериоза.
- •Протеомика и геномика. Характеристика. Значение для целей фармации.
- •Контроль и управление биотехнологическими процессами. Контроль основных параметров процесса (состав технологических растворов, газов, рН среды и т.Д.).
- •Промышленные способы получения антибиотиков (общая схема).
- •Биомедицинские технологии. «Антисмысловые» нуклеиновые кислоты, пептидные факторы роста тканей и др. Биологические продукты новых поколений. Перспективы практического применения.
- •Пептидные факторы роста тканей
- •Интерлейкины. Механизм биологической активности. Перспективы практического применения.
- •Биополимеры, характеристика, микробиологический метод получения.
- •Жирорастворимые витамины (эргостерин и витамины группы д). Продуценты и схема биосинтеза.
- •Каротиноиды и их классификация. Схема биосинтеза. Образование из каротина витамина а.
- •Проблемы трансформации стероидных структур. Микробиологический синтез гидрокортизона.
- •Фитогормоны, классификация, характеристика. Индукторы митотического цикла.
- •79.Иммуносупрессоры. Циклоспорин а-ингибитор иммунного ответа кальций нейрина. Применение втрансплантологии. Новые иммуносупрессоры природного присхождения.
-
Препараты из животного сырья. Характеристика. Классификация. Технологические схемы производства.
Препараты, получаемые из животного сырья (органов, тканей, крови, мочи и т.д.). известны под названием органотерапевтические или органопрепараты (Medicamenta organotherapeutiea).
В зависимости от природы фармакологически активных веществ их можно подразделить на препараты:
- гормонов,
- ферментов,
- препараты неспецифического действия.
В зависимости от органа, из которого они получены, различают препараты из:
- гипофиза,
- поджелудочной,
- щитовидной желез,
- печени
- семенников
- надпочечников и т.д.
По способу получения и степени очистки их разделяют на:
- экстракционные - высушенные, обезжиренные и измельченные железы и ткани для внутреннего употребления
- инъекционные.
Инъекционные, в свою очередь, подразделяют на:
- максимально очищенные экстракты;
- препараты индивидуальных веществ.
-
Краткая история развития биотехнологии и периоды развития биотехнологии. Характеристика. Биотехнология лекарственных средств.
Человек, рождающийся для познания мира (в том числе — и самого себя), давным-давно освоил на практике различные процес-сы биотехнологии, не зная по существу, что они относились к такому разряду. В самом деле, с библейских времен известно виноделие, тысячелетия насчитывает хлебопечение и т. д.
Познавательная деятельностьлюдей непосредственно сказыва-лась на уровне социального развнтия общества. Недаром вторую половину XX столетия мы называем периодом научно-технической революции. Наука сегодня имеет огромное значение в жизни людей, и научный подход к решению любой задачи — веление и требование времени.
Наука формировалась и эволюционировала по мере формиро-вания и развития человеческого общества. Это, в частности, не-посредственно относится и к биотехнологии. Ее возникновение, становление и развитие условно можно подразделить на 4 периода: эмпирический, этиологический, биотехнический и генотехниче-ский. Эмпирический (от греч. empeirikos — опытный) или доисто-рический период — самый длительный, охватывающий примерно 8000 лет, из которых более 6000 лет — до нашей эры и около 2000 лет — нашей эры. Древние народы того времени интуитивно использовали приемы и способы изготовления хлеба, пива и некоторых других продуктов, которые теперь мы относим к раз-ряду биотехнологических. Кризис охотничьего промысла (хозяй-ства) стал побудительным мотивом революции в изготовлении продуктов питания. Эта революция началась около 8000 лет назад и привела к изобретению техники земледелия — началу произво-дительного ведения хозяйства (неолит и бронзовый века.) Стали формироваться так называемые приречные цивилизации Месопо-тамии, Египта, Индии и Китая. Шумеры — первые жители Месо-потамии (на территории современного Ирака) создали цветущую в те времена цивилизацию. Они выпекали хлеб из кислого теста, владели искусством готовить пиво. В этом следовали им ассирийцы и вавилоняне, жившие также в Месопотамии, египтяне и древние индусы. В течение нескольких тысячелетий известен уксус, издревле приготавливавшийся в домашних условиях, хотя о микробах — индукторах этого процесса мир узнал в 1868 г. благодаря работам Пастера, и это несмотря на существование с XIV в. так называемого "Орлеанского способа" приготовления уксуса; первая дистилляция вина осуществлена в XII в.; водку из хлебных злаков получили в XVI в.; шампанское известно с ХVШ в., но получение почти абсолютного этанола впервые удалось в ХIV в. испанцу Раймунду Луллию (ок. 1235 — 1315) благодаря перегонке вина с негашеной известью.
В те древние времена продукты питания растительного и животного происхождения использовались не только в пищу, но и для лечебных целей. Например, в ассирийской столице Ниневии (8 — 7 века до н. э.) была царская библиотека, насчитывавшая более 30 000 клинописньгх табличек, из которых в 33 имелись сведения о лекарственных средствах и их рецептуре, и в самом городе размещался сад лекарственных растений. К тому же эмпирическому периоду относятся: получение кис-ломолочных продуктов, квашеной капусты, медовых алкогольных напитков, силосование кормов, мочка лубоволокнистых растений.
Длительное накопление фактов происходило и в области ми-кологии (от греч. myKes — гриб). Сведения о грибах можно найти в источниках древности, а Луции Лициний Лукулл (106 — 56 гг. до н. э.), славившийся богатством, роскошью и пирами ("лукуллов пир"), прсдпочитал всем сьедобным грибам кесарев гриб (Amanita cesarea, L.). Древние евреи хорошо знали ржавчину хлебных злаков и головню. В (V — I веках до н. э. были собраны интересные материалы о грибах, нашедшие отражение в работах Аристотеля, Диоскорида, Плииия Младшего, Теофраста. В последующие века нашей эры микология стала самостоятельной наукой — велика роль в этом Д. Персоона и Э. М. Фриза, по праву считающихся отцами систематической микологии.
Таким образом, народы исстари пользовались на практике микробиологическими процессами, ничего не зная о микробах. Эмпиризм также был характерен и в практике использования полезных растений и животных.
Второй, этиологический (от греч. aitia — причина) период в развитии биотехнологии охватывает вторую половину XIX века и первую треть XX века (1856 — 1933 гт.). Он связан с выдающимися исследованиями великого французского ученого Луи Пастера (1822 — 1895) — основоположника научной микробиологии и ряда микробиологических дисциплин (промышленной, медицинской, химической, санитарной). С аналитической микробиологией непосредственно связано открытие Пастером молекулярной ассиметрии (стереоизомерии). Это, по существу, бриллиантовыи век микробиологии. Пастер вскрыл микробную ирироду брожений, доказал возможность жизни в бескислородных условиях, экспериментально опроверг ходячее тогда представление о самопроизвольном зарождении живых существ, создал научные основы вакцинопрофилактики и вакцинотерапии; предложил метод стерилизации, называемый по его имени пастеризацией и т. д.
Немеркнущая слава Пастера не затмила имен его выдающихся учеников и сотрудников: Э. Дюкло, Э. Ру, Ш. Э. Шамберлана, Ж. А. Вильемена, И. И. Мечникова. В этот же период творили Р. Кох, Д. Листер, Ш. Китазато, Г. Т. Риккетс, Д. И. Ивановский, А. Лаверан и другие.
Параллелъно с Пастером трудился в Германии, а позднее — во Франции, выдающийся миколог А де Бари (1831 — 1888) — основоположник физиологической микологии. Изучив стадии раз-множения и историю индивидуального развития грибов (онтоге-нетический метод), с учетом их взаимоотношений с другими видами, а также цитологических и биологических особенностей, де Бари создал классификацию, которая и сегодня лежит в основе современных классификационных схем микро и макромицетов.
Де Бари — основоположник микофитопатологии — науки о грибных болезнях растений (от греч. filon — растение, palhos — болезнь), под его руководством сформировалась плеяда выдающихся ученых (в том числе — из России): Ф. М Бальфур, И. В. Баранецкий, М. Бейеринк, О. Брефельд, М. С. Воронин, А Кох, А. С. Фаминицин и др.
В биотехнологии важными являются питательные среды ддя культивирования ряда биообъектов. Уже А Пастер приготовил первую жидкую питательную среду в 1859 году, метод выращива-ниягрибов нажелатине предложил О. Брефельдв 1864 г.г Ж. Ролен сообщил о жидких средах для выращивания нитчатых грибов в 1870 г Р. Коху в 1876 г. удалось вырастать бациллы сибирской язвы в капле водянистой влаги, извлеченной из глаза погибшей коровы. В 80-е годы XIX столетия Р. Кох преддожил метод культи-вирования бактерий на стерильных ломтиках картофеля и затем — на агаризованных питательных средах.
В настоящее время, предлагая самые сложные и необычные в каком-либо отношении среды для выращивания биообъектов, мы опираемся на основополагающие результаты этих выдающихся ученых. Аналогичным образом можно сказать и о вариантах способов стерилизации питательных сред, имея в виду тиндализа-цию, кипячение, дробную стерилизацию и др. Все они основыва-лись на необходимости уничтожения посторонней микрофлоры, которая попадала в среды в процессе их изготовления.
В ряду открытий всемирного значения стоит обнаружение в 1892 г. вируса мозаичной болезни табака Д. И. Ивановским (1864 — 1920). Последовавшие за этим обнаружения других вирусов обеспечили становление новой научной дисциплины — вирусологии.
Этиологический период знаменателен тем, что удалось доказать индивидуальность микробов и получить их в чистых культурах. Более того, каждый вид мог быть размножен на питательных средах и использован в целях воспроизведения соответсгвующих процес-сов (бродильных, окислительных и др.). Например, маслянокислые бактерии и вызываемое ими маслянокислое брожение, лактобак-терии и молочнокислое брожение, дрожжи — сахаромицеты и спиртовое брожение, уксуснокислые бактерии и окисление этано-ла до уксусной кислоты и т. д, В этот период было начато изготовление прессованных пищевых дрожжей, а также некото-рых продуктов обмена (метаболизма) — ацетона, бутанола, лимои-ной и молочной кислот,- во Франции приступили к созданию биоустановок для микробиологической очистки сточных вод.
Знание причин биологических процессов еще не исключало нестерилъные операции, хотя и стремились к использованию чистых кудьтур микроорганизмов.
Для всестороннего изучения морфолого-физиологических свойств и продуктов обмена, прежде всего, микробов все ранее предложенные способы ихвыращивания оказались малопригод-ными. Более того, накопление однородной по возрасту большой массы клеток оставалось исключительно трудоемким процессом. Вот почему требовался принципиально иной подход для решения многих задач в области биотехнологии. В 1933 году А Клюйвер и Л. X. Ц. Перкин опубликовали работу "Методы изучения обмена веществ у плесневых грибов", в которой изложили основные технические приемы, а также подходы к оценке и интерпретации получаемых результатов при глубинном культивировании грибов. С этого времени начинается третий период в развитии биологи-ческой технологии — биотехнический. Началось внедрение в биотехнологию крупномасштабного герметизированного оборудо-вания, обеспечившего проведение процёссов в стерильных усло-виях. Особенно мощный толчок в развитии промышленного био-технологического оборудования был отмечен в период становления и развития производства антибиотиков (время второй мировой войны 1939 — 1945 rr.f когда возникла острая необходимость в противомикробных препаратах для лечения больных с инфициро-ванными ранами). Все прогрессивное в области биологических и технических дисциплин, достигнутое к тому времени, нашло свое отражение в биотехнологии. Сдедует отметить, что уже в 1869 г.. Ф. Мишер получил "нуклеин" (ДНК) из гнойных телец (лейкоци-тов); В. Оствальд в 1893 г. установил каталитическую функцию ферментов; Т. Леб в 1897 г. установил способность к выживанию вие организма (в пробирках с плазмой или сывороткой крови) клеток крови и соединительной ткани; Г. Хаберланд в 1902 г. показал возможность кулътивирования клеток различных тканей растений в простых питательных растворах; Ц. Нейберг В 1912 г. раскрыл механизм процессов брожения; Л Михаэлис и М. Л. Ментен в 1913 г. разработали кинетику ферментативных рсакций, а А. Каррел усовершенствовал способ выращивания клеток тканей животных и человека и впервые применил экстракт эмбрионов для ускорения их роста; Г. А. Надсон и Г. С. Филлипов в 1925 г. доказали мутагенное действие рентгеновских лучей на дрожжи, а в 1937 г. Г. Кребс открыл цикл трикарбоновых кислот (ЦТК); в 1960 г. Ж. Барски и др. впервые обнаружили соматические габриды опухолевых клеток мыши. Следовательно, накопленные научные факты стали побудительным мотивом для разработки способов крупномасштабного культивирования клеток различного проис-хождения. Это, яеобходимобылодляпблученияразличных клеточ-ных продуктов и самих клеток для нужд человека, и, прежде всего, в качестве или в составе лечебных и профилактических средств: пенициллина, стрептомицина, тетрациклинов, декстрана, ряда ами-нокислот и многих других веществ. К 1950 г. Ж. Моно (Франция) разработал теоретические основы непрерывного управляемого культивирования микробов; в 50-е годы вопросам практической реализации непрерывного культивирования микроорганизмов по-святили свои исследования М. Стефенсон, И. Малек, Н. Д. Иерусалимский и др.
Примерно за 40 дет третьего периода были решены основные задачи по конструированию, созданию и внедрению в практику необходимого оборудованйя, в том числе главного из них — биореакторов. Это оборудование используют и в настоящее время.
Четвертый период в биотехнологии — генотехнический (от греч. genesis — происхождение, возникновение, рождение) начал-ся с 1972 г. В этом году П. Берг со своими сотрудниками в США создали первую рекомбинантную молекулу ДНК. Однако следует отметить, что в 1969 г. Дж. Бекуит с колдегами выделил в химически чистом виде лактозный ген из кишечной палочки, показав тем самым возможиость направленных манипуляций с генетическим материалом бактерий.
Естественно, что без фундаментальной работы Ф. Крика и Дж. Уотсона (1953) по установлению структуры ДНК было невозмож-ным достигнуть современных результатов в области биотехноло-гии. Выяснение механизмов функционирования и регуляции ДНКГ выделение и изучение специфичных ферментов привело к фор-мированию строго научного подхода к разработке биотехнологи-ческих процессов на основе генно-инженерных работ. В этом суть генотехнического периода.