Первичные культуры клеток

Получены путем трипсинизации органов и тканей. Используются эмбрионы кур, почки обезьян. Как правило, однослойные, выращиваются в специальных плоских сосудах – матрацах в виде монослоя. Представлен клетками смешанного типа, срок жизни ограничен до 2-3 недель, максимально 80 дней, затем погибают. У клеток одинаковое число хромосом. Клетки наиболее чувствительны для репликации вирусов. Чаще используются как субстрат для получения вакцин, поскольку ДНК таких клеток не трансформирована и не вызывает канцерогенных эффектов.

Диплоидные клетки

Содержат диплоидный набор хромосом, они трансформированы, но безопасны для производства вакцин. Их можно диспергировать, пассировать, но не более 50 пассажей.

Перевиваемые клеточные линии

Клетки трансформированы (гетероплоидный набор хромосом).Получают из опухолевых клеток.

Неlа – рак шейки матки

Нер – рак гортани

Почки эмбриона свиньи, фибробласты мышей,

Их можно диспергировать и перевивать до бесконечности. К вирусам они менее чувствительны.

Все клеточные культуры выращиваются под слоем питательной поддерживающей среды: 199, Игла, раствор Хенкса, гидролизат лактальбумина с телячьей сывороткой и др.

Индикация вирусов

В клеточных культурах

1)гемагглютинирующей активности

2) ЦПД – способность вызывать деструктивные изменения клеток (клетки округляются, появляется зернистость, отторжение и лизис монослоя, формирование включений, формирование синцития)

3) Бляшкообразование под агаровым покрытием и окраской нейтральным красным или карбоксиметилцеллюлоза

4) Реакция гемадсорбция

5) Цветная проба

Идентификация вирусов

1. Электронная микроскопия по морфологии трудно отличить

2.ИЭМ – применяется при анализе вирусов не культивируемых in vitro

3.ИФ – для выявления Аг вирусов прямой и непрямой метод используются конъюгированные Ат (флюоресцеинизотиоцианат) яркое зеленое свечение клетки

4.Твердофазный ИФА, РИА, ИБ

5. Молекулярная гибридизация

Используется для анализа вирусных ДНК и РНК. Применяется для выявления вирусов, не культивируемых на клетках культуры ткани.Для выявления однонитчатых РНК или ДНК вируса используют специальные зонды РНК и ДНК, выявляющие комплементарные нити вирусных нуклеиновых кислот. В качестве зондов используют рекомбинантные клонированные ДНК, меченные радиоактивными изотопами (фосфор) или биотином, который способен прочно связывать авидин – результат окраска.

6. ПЦР – амплификация генома