Практические работы.

1. Определение групповой принадлежности крови по системе ав0 перекрёстным методом - стандартных сывороток и стандартных эритроцитов.

ЦЕЛЬ: ознакомиться с методикой определения групп крови по системе АВ0 методами стандартных сывороток и стандартных эритроцитов.

ОСНАЩЕНИЕ: стерильные перчатки, тарелка с нанесенными на ней обозначениями агглютининов сывороток, стандартные сыворотки I, II, III групп двух серий с разным титром антител, стеклянные палочки, физиологический раствор, стандартные эритроциты групп А(II) и В (III).

а) Метод стандартных сывороток.

ХОД РАБОТЫ: наносят на тарелку в соответствующие квадраты (лунки) пипеткой крупные капли сывороток двух серий I(0), II(A), III(B) групп (нельзя допускать смешивания сывороток!). Концом чистой стеклянной палочки (или углом предметного стекла) захватывают небольшое количество крови и помещают рядом с каплей сыворотки (капля вносимой крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки), осторожно перемешивают. Вносят кровь и в две остальные капли сывороток, используя другие стеклянные палочки или углы предметного стекла. Слегка покачивая тарелку в течение 5 мин, наблюдают за каплями. Затем добавляют каплю физиологического раствора для исключения ложной агглютинации и оценивают результат. Агглютинация выглядит в виде мелких красных крупинок, постепенно увеличивающихся в размере на фоне светлеющей сыворотки. На основании наличия (+) или отсутствия (-) агглютинации делают вывод о принадлежности эритроцитов исследуемой крови к определённой группе по системе АВО.

б) Метод стандартных эритроцитов.

ХОД РАБОТЫ: на тарелку, разделенную на секторы наносят каплю сыворотки исследуемой крови, которая в 10 раз меньше капли стандартных эритроцитов; рядом поместите каплю стандартных эритроцитов А(II) и В (III) групп. Действия проводят разными стеклянными палочками. Перемешивают капли углом предметного стекла, тарелочку покачивают в течение 3 минут; затем добавляют по капле физиологический раствор для исключения ложной агглютинации, продолжают смешивать покачиванием и через 5 минут оценивают результат. На основании наличия (+) или отсутствия (-) агглютинации делают вывод о принадлежности сыворотки исследуемой крови к определённой группе по системе АВО.

Оценка результатов.

Группы крови	стандартные сыворотки (их антитела взаимодействуют с антигенами на мембранах эритроцитов исследуемой крови)			Стандартные эритроциты (их антигены взаимодействуют с антителами сыворотки исследуемой крови)
	I ab	II b	III a	А(II)	В (III)
0(I) ab	-	-	-	+	+
A(II)b	+	-	+	-	+
B(III)a	+	+	-	+	-
АВ (IV) -	+	+	+	-	-

2. Определение групповой принадлежности крови по системе ав0 методом цоликлонов.

Цоликлоны - продукты гибридных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Индивидуальные гибридные клеточные линии продуцируют гомогенные антитела только одного класса иммуноглобулинов, полностью идентичных по структуре и биологической активности. Антитела, продуцируемые клетками одного клона (потомство одной клетки), являются моноклональными.

Цоликлоны анти-А (аналог агглютинина альфа) и анти-В (аналог агглютинина бета) предназначены для определения групп крови человека вместо стандартных сывороток. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается; температура воздуха в помещении должна быть от 15 до 25º С.

ЦЕЛЬ: освоить методику определения групп крови по системе АВ0 методом цоликлонов.

ОСНАЩЕНИЕ: стерильные перчатки, цоликлоны анти-А (розовый цвет) и анти-В (голубой цвет), исследуемая кровь.

ХОД РАБОТЫ: наденьте перчатки. Нанесите на пластинку по одной капле (0,1 мл) реагентов анти-А и анти-В и рядом по одной капле крови (0,1 мл), которая в 10 раз меньше капли сыворотки.

Реактив и кровь тщательно перемешайте стеклянными палочками. Наблюдение за ходом реакции проводите при легком покачивании пластинки в течение 2-5 минут. При положительном результате - агглютинация эритроцитов; при отрицательном результате капля - равномерно окрашена в красный цвет, агглютинаты не обнаруживаются.

Группа крови	цоликлон анти-А	цоликлон анти-В
0(I) ab	-	-
A(II)b	+	-
B(III)a	-	+
АВ (IV) -	+	+

Оценка результатов:

цоликлон анти-А	цоликлон анти-В	Вывод:
		эритроциты исследуемой крови относятся к группе