Методическое указание для студентов к практическому занятию № 30
Тема: Микробиологическая диагностика дифтерии.
Цель: Изучение группы коринебактерий и лабораторной диагностики дифтерии.
Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.
Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.
Тема занятия 30. Микробиологическая диагностика дифтерии.
Актуальность темы. Corynebacterium diphteriae (палочка Клебса Леффлера) - возбудитель дифтерии – острого инфекционного заболевания воздухоносных путей и кожных покровов, характеризующегося образованием фибринозных пленок и общей интоксикацией.
Возбудитель дифтерии - Corynebacterium принадлежит к семейству Corynebacteriaceae.
Морфология: тонкие, слегка изогнутые или прямые палочки с закругленными концами, размером от 1 до 12 мкм, часто утолщены на концах и напоминают булаву (сoryne – булава). Спор и капсул не образуют, на поверхности имеют фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки. Характерен выраженный полиморфизм (наряду с типичными формами можно обнаружить карликовые, кокковидные, толстые с колбовидными утолщениями на концах, нитевидные).
В мазках клетки располагаются под углом друг к другу (римскими цифрами V и Х), что отличает их от ложнодифтерийных бактерий, которые в мазках располагаются параллельно друг к другу (в виде частокола).
У Corynebacterium diphteriae выделяют три биовара - gravis, mitis, intermedius, Различающиеся по морфологии, культуральным и биохимическим свойствам.
Gravis – короткие неправильной формы, с небольшим количеством гранул;
Mitis – длинные, изогнутые полиморфные палочки, содержащие много зерен волютина (тельца Бабеша-Эрнста).
Intermedius – крупные с бочковидными очертаниями, имеют поперечные перегородки, разделяющие клетку на несколько сегментов.
Волютиновые зерна выявляют окраской метиленовым синим или по Нейссеру
Культуральные и биохимические свойства. Факультативные анаэробы, хорошо растут при свободном доступе кислорода. Температурный оптимум 37°С.
На простых питательных средах растут плохо, на сывороточных (Леффлера) дают рост уже через 10-12 часов.
Выращивают на теллуритовой среде – Тинсдаля-Садыковой (елективно-дифференциально-диагностическая среда - коринебактерии высокорезистентны к теллуриту калия или натрия, который ингибирует рост контаминирующей микрофлоры). В настоящее время используют теллурит-шоколадный агар Маклеода и кровяно-теллуритовый агар.
Образуют серовато-черные колонии. S тип характерен для mitis; SR- для gravis
На свернувшейся сыворотке образуют крупные перламутрово-серые колонии (на этой среде нельзя дифференцировать типы, но очень хорошо видны зерна волютина, что отличает их от ложнодифтерийных бактерий).
На жидких средах – помутнение и осадок, характер которого варьирует у различных биоваров.
Биохимическая активность: ферментируют до кислоты глюкозу, мальтозу, галактозу. Не ферментируют сахарозу, лактозу, маннит, не образуют индол, не гидролизируют мочевину.
Продуцируют каталазу, гиалуронидазу, цистиназу, нейраминидазу
Токсинообразование: Corynebacterium diphteriae продуцирует мощный экзотоксин, нетоксигенные штаммы заболевание не вызывают. Токсин ингибирует белковый синтез, в том числе и в миокарде, приводя к структурным и функциональным нарушениям, способным вызывать смерть больного. Кроме того вызывает демиелинизацию нервных волокон, что часто приводит к параличам и парезам.
Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы C. diphteriae, инфицированные бактериофагом, несущим ген tox.
Антигенная структура. Определение антигенного состава проводят в РА. Выделяют О и К-антигены. К-антигены обеспечивают видовую специфичность.