195

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ТИРОЗИНА И ТРИПТОФАНА В БЕЛКЕ

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: Изучить значение тирозина и триптофана в белке и определение их содержания .

ПРИБОРЫ И ПРИНАДЛЕЖНОСТИ: спектрофотометр СФ-26 (или аналогичный прибор), раствор яичного белка; 0,1 Н раствор NaOH.

I. Описание экспериментальной установки (СФ-26)

Смотреть лабораторную работу № 25

II. Краткие теоретические сведения.

Исследуя спектры поглощения можно производить количественный анализ смеси двух или нескольких веществ. Для данного анализа необходимо определить величину оптической плотности при двух или при нескольких длин волн

Оптическая плотность равна смеси равна сумме оптических плотностей компонентов:

Д = Да + Дв; тогда

Д

Д

а

Са

в Cв

и

а

Са в

Cв

Решая совместно вышеуказанные уравнения, получим выражение для концентрации веществ А (тирозин) и В (триптофан):

Са

Д в

Д в

(1)

и

Св

Д а Д а

(2)

где

Д иД

а

в

а

в

а

в

а

в

- оптическая плотность смеси при двух длинах волн 1 и 2;

и

-

молекулярные коэффициенты

экстинкции

тирозина и триптофана

соответственно при тех же длинах волн; Са и Св – молекулярные концентрации тирозина и триптофана соответственно.

Длины волн, при которых производятся измерения, выбираются так, чтобы при 1, поглощая преимущественно тирозин. А при 2 – триптофан. Точность определения тем больше, чем больше различие молекулярных коэффициентов экстинкции определяемых веществ при каждой из этих двух

196

длин волн. Это условие выполняется в большинстве случаев, если длины волн1 и 2 соответствуют максимумам поглощения компонентов.

III.Порядок выполнения работы

1.Приготовить раствор яичного белка в концентрации 2 мг/мл в 0,1 Н растворе NaOH.

2.Установите рукоятку 11 в работе положения «Ф» в схеме включен (сурьмяно-цезиевый фотоэлемент) и рукоятку 9 в положение «Д» (включения дейтериевая лампа).

3.Закройте фотоэлемент, поставив рукоятку 17 шторки в положение ЗАКР., и рукоятный 8 установите ширину щели примерно 0,1 мм.

4.Включите тумблер СЕТЬ, должна загореться сигнальная лампа Д (стабильная работа СФ-26 после включения в течение 1 часа).

5.При переключении ламп, после минутного прогрева лампы автоматически загораются и одновременно загорается соответствующая индикаторная лампа.

6.Установите требуемую длину волны (270 нм), вращая рукоятку 6 сторону увеличения длин волн. Если при этом шкала повернется на большую величину, то возвратите ее назад на 3-5 нм и снова подведите к требуемому делению.

7.Поставьте рукоятку 19 в положение «1» (рабочее положение). Если поток излучения недостаточен и измеряемый контрольный образцы значительно поглощают излучение, установите рукоятку в положение «2», «3» или «4». При работе в положение КАЛИБР или « 0,01» рукоятки 16 рукоятку 19 установите также в одно положение «2», «3», «4».

8.Установите на пути потока излучения контрольный образец, перемещая каретку 10. При отсутствии образца сравнения величина потока, проходящего через свободное окно держателя фильтров, принимается за 100% пропускания.