Вопрос №56. Генно-инженерные вакцины. Получение. Применение. Преимущества и недостатки.

Генно-инженерные вакцины – это препараты, полученные с помощью биотехнологии, которая по сути сводиться к генетической рекомбинации .

Для начала получают ген, который должен быть встроен в геном реципиента. Небольшие гены могут быть получены методом химического синтеза. Для этого расшифровывается число и последовательность аминокислот в белковой молекуле вещества, затем по этим данным узнают очерёдность нуклеотидов в гене, далее следует синтез гена химическим путем.

Крупные структуры, которые довольно сложно синтезировать получаются путем выделения(клонирования), прицельного выщепления этих генетических образований с помощью рестриктаз.

Полученный одним из способов целевой ген с помощью ферментов сшивается с другим геном, который используется в качестве вектора для встраивания гибридного гена в клетку. Вектором могут служить плазмиды, бактериофаги, вирусы человека и животных. Экспрессируемый ген встраивается в бактериальную или животную клетку, которая начинает синтезировать несвойственное ей ранее вещество, кодируемое эксперссируемым геном.

В качестве реципиентов экспрессируемого гена чаще всего используется E. coli, B. subtilis, псевдомонады, дрожжи, вирусы. некоторые штаммы способны переключаться на синтез чужеродного вещества до 50% своих синтетических возможностей – эти штамм называются суперпродуцентами.

Иногда к генно-инженерным вакцинам добавляется адъювант.

Примерами таких вакцин служат вакцина против гепатита В (энджерикс), сифилиса, холеры, бруцеллёза, гриппа, бешенства.

Есть определённые сложности в разработке и применении:

- длительное время к генно-инженерным препаратам относились настороженно.

- на разработку технологии для получения вакцины затрачиваются значительные средства

- при получении препаратов данным способом возникает вопрос об идентичности полученного материала природному веществу.

Преимущества:

1. Меньше побочных эффектов,т.к. не содержат м\о.

2. Узкоспецифичный иммунитет.

3. Комплектование иммуногенных свойств.

Недостатки:

1. Менее эффективны, т.к вирусы вариабельны.

Вопрос №57. Вакцинотерапия. Понятие о лечебных вакцинах. Получение. Применение. Механизм действия.

Применяются для перевода хронической стадии заболевания в острую при неэффективности антибиотикотерапии вследствие лекарственной устойчивости м\о. действие данных вакцин основано на стимуляции защитных сил макроорганизма.

Классификация:

1. Убитые (инактивированные):

• Бруцеллезная

• Герпетическая

• Гонококковая

• Стафилакокковая жидкая

• Дизентерийная

2. Химические (субклеточные):

• Протейная

• Стафилококковый антифагин

• Стафилакокковая сухая

• Поликомплементный из Аг условно-патогенных м\о.

Вопрос №58. Диагностические антигенные препараты: диагностикумы, аллергены, токсины. Получение. Применение.

Диагностические препараты относятся к иммунобиологическим препаратам, поскольку их действие основано на иммунологи­ческих принципах и реакциях. Диагностические препараты, системы и наборы широко используют для диагностики инфек­ционных и неинфекционных болезней, индикации и идентифи­кации бактерий, вирусов, грибов и простейших, для опреде­ления иммунного статуса, аллергических и иммунопатологичес­ких расстройств, иммунологической совместимости тканей, им­мунных взаимоотношений матери и плода и т.д.

Диагностикумы применяют для выявления специфических антигенов и антител, аллергенов, сенсибилизированных имму- нокомпетентных клеток (Т- и ^-лимфоцитов), факторов есте­ственной резистентности (комплемент, интерферон, белки сы­воротки крови), иммунорегуляторов (интерлейкины, интерфе­роны, пептиды тимуса, костного мозга и др.). В соответствии с целевым назначением диагностических препаратов они содержат те или иные специфические иммунореагенты (антигены, анти­тела, аллергены, иммуномодуляторы, факторы естественного иммунитета и др.), которые используют для выявления объекта исследования в определенных реакциях или тест-системах. Эф­фект реакции в соответствии с характером иммунореагентов и механизма реакции регистрируют по физическим (например, мутность), химическим (например, изменение цветности) или клиническим (симптомы и проявления) показателям. Перечень иммунологических реакций, используемых для диагностики, приведен в главе 9.

На основе перечисленных иммунологических реакций созда­ны сотни современных диагностических систем, с помощью которых диагностируют инфекционные (ВИЧ-инфекции, грипп, брюшной тиф, чума, холера, хламидиоз, вирусные гепатиты и др.) и неинфекционные ( онкологические, аллергические, им­мунопатологические и др.) болезни. Иммунологические методы диагностики специфичны, высокочувствительны и достоверны, поэтому находят широкое применение в медицине и экологии (для обнаружения и индикации микробов). Эффективность этих методов значительно возросла благодаря использованию моно- клональных антител, очищенных и концентрированных антиге­нов, а также приборному оформлению диагностических систем, более точно улавливающих эффект реакции.

В последнее время интенсивно разрабатываются биосенсоры — системы точного и быстрого регистрирования физических (тем­пература, излучение), химических (появление нового химичес­кого вещества) или биологических эффектов, которые возни­кают в результате взаимодействия антигенов и антител между собой, влияние их на клетки или молекулы изучаемого объекта.

Аллергены – это антигены, на которые в организме возникает аллергическая реакция. Аллергены могут иметь различное происхождение:

1) бытовыми;

2) лекарственными;

3) животного происхождения;

4) растительными;

5) пищевыми;

6) инфекционными.

В основе аллергии могут лежать гуморальный и клеточный иммунный ответ. По механизмам и клиническим проявлениям выделяют четыре типа аллергии.

1. Анафилактический. Образуются комплексы АГ – АТ, которые фиксируются на различных клетках-мишенях, тучных клетках, базофилах, сенсибилизируя их к соответствующему аллергену. При повторном попадании аллергена в организм происходит выделение медиаторов аллергии.

2. Цитотоксический. При повторной сенсибилизации образующийся комплекс АГ – АТ ведет к цитолизу – гибели собственных клеток.

3. Иммунокомплексный. При повторном введении антигена избыток комплекса АГ – АТ приводит к мощной активизации комплемента.

4. Клеточный. В его основе преобладает клеточный иммунный ответ. За развитие реакции ответственны Т-киллеры. Развивается гиперчувствительность замедленного типа. Лежит в основе инфекционной аллергии.

Инфекционный аллерген – слабый аллерген, состояние аллергии развивается только в его присутствии.

Инфекционная аллергия развивается:

1) при хронической форме дизентерии, гонореи, туберкулезе, в третичном периоде сифилиса; при этом образуются гуммы – опухолеподобные разрастания лимфоидной ткани;

2) при особо опасных инфекциях: чуме, сибирской язве, туляремии, бруцеллезе;

3) при глубоких микозах;

4) в период реконвалесценции при тифопаратифозных заболеваниях.

При ряде инфекций может быть использован аллергологический метод диагностики,

1) при туберкулезе – проба Манту с туберкулином;

2) при хронической форме дизентерии – проба Цуверкалова;

3) при гонорее – проба с гоновакциной;

4) при бруцеллезе – проба Бюрне с бруцеллином;

5) при туляремии – проба с туляремином;

6) при сибирской язве – проба с антраксином.

Положительные аллергические пробы дают больные, бактерионосители и вакцинированные живой вакциной.

Токсины - ядовитые вещества, образуемые живыми организмами, в том числе и микроорганизмами. По хим. природе – полипептиды. Исключение составляют афлатоксины, являющиеся производными кумаринов. Обладают антигенными свойствами. Среди микробных Т. различают экзотоксины (простые белки), которые образуются грамположительными патогенными бактериями и выделяются в среду в процессе их роста; эндотоксины (сложные белки – комплексы липополисахаридов с белками), которые освобождаются при распаде (лизисе) микроорганизмов. Гены, кодирующие экзотоксины, локализованы большей частью в плазмидах или профагах, а не в бактериальной хромосоме. Все экзотоксины обладают высокой специфичностью, т. е. поражают определенные ткани. Примеры экзотоксинов–тетаноспазмин и тетанолизин возбудителя столбняка, дифтерийный Т. и др. Эндотоксины находятся в наружных слоях клеточных стенок всех патогенных грамотрицательных бактерий. Действие их на организм относительно неспецифично. Примеры эндотоксинов–Т. возбудителей брюшного тифа, дизентерии и др.