Метод реком ПЕД

«Удовлетворительно» - тема в основном раскрыта и обобщена при написании, но литературные источники скудные, научный уровень несовременный, доклад неуверенный, затянутый и малопонятный слушателям, студент не может грамотно ответить на вопросы.

«Неудовлетворительно» - студент не ориентируется в теме и учебно-научной литературе, противоречивое содержание является компиляцией немногочисленных популярных источников, иллюстрации не относятся к содержанию доклада, обобщение неправильное, неактуальное или отсутствует.

7. Требования, предъявляемые к студентам на практических занятиях по биохимии

При проведении учебных лабораторных и исследовательских работ необходимо строго следовать правилам техники безопасности и правилам работы в биохимической лаборатории.

7.1.Правила работы в биохимической лаборатории

1.Перед каждой лабораторной работой необходимо изучить соответствующий лекционный и литературный материалы, а также материал методических указаний и рекомендаций.

2.Без указания преподавателя не проводить лабораторную работу. Пользоваться лабораторным оборудованием и реактивами без преподавателя или лаборанта запрещается. В процессе эксплуатации центрифуги запрещается прикасаться к движущимся и вращающимся частям используемого оборудования.

3.Лабораторные работы выполнять тщательно, аккуратно, спокойно и без лишней торопливости, соблюдая тишину и не загромождая рабочее место сумками, пакетами и тому подобное.

4.Работа с реактивами должна проводиться только на рабочих столах со специальным химически устойчивым покрытием. Работу с летучими веществами проводить только под тягой. Запрещается выливать в раковины концентрированные растворы щелочей и кислот, органические растворители. Все указанные отходы должны обязательно собираться в специальные ёмкости.

5.Реактивы брать в количествах, указанных в методике проведения данной лабораторной работы. Никакие вещества в лаборатории нельзя пробовать на вкус.

6.После употребления реактива банку или склянку тотчас же закрыть пробкой (крышкой) и поставить на место.

7.Сухие реактивы необходимо брать при помощи стеклянного микрошпателя.

8.Если реактив отбирается пипеткой, ни в коем случае нельзя той же пипеткой, не вымыв ее, брать реактив из другого сосуда.

9.Пипетки необходимо заполнять реактивами только с помощью резиновых груш. Бюретку следует заполнять титрованным раствором с помощью стеклянной воронки.

10. При нагревании пробирку держать только специальным держателем, направляя отверстием от себя и других людей.

11.После работы с реактивами тщательно мыть руки.

12.После окончания работы вымыть использованную посуду, выключить воду, привести в порядок рабочее место и сдать его дежурному лаборанту или преподавателю.

13.По каждой лабораторной работе составить отчет и сделать выводы по результатам каждого проделанного эксперимента.

11

7.2. Правила техники безопасности

Студент обязан соблюдать правила техники безопасности при работе в биохимической лаборатории!

Студент обязан:

-работать в застегнутом халате;

-работать на закрепленном рабочем месте;

-личные вещи хранить в специально отведенном рабочем месте;

-соблюдать тишину, порядок и чистоту в лаборатории;

-при попадании химических реактивов на стол, пол и другие предметы сообщить об этом преподавателю и привести все в порядок;

-опыты с едкими, ядовитыми или сильно пахнущими веществами проводить в вытяжном шкафу;

-при разбавлении концентрированных кислот соблюдать порядок смешивания: кислоту аккуратно наливать в воду;

-после завершения работы необходимо отключить газ, воду, электроприборы;

-при попадании щелочи или кислоты в глаза или на кожу, промыть их проточной водой (3–5 мин.), а затем раствором борной кислоты (в случае попадании щелочи) или гидрокарбоната натрия (в случае попадании кислоты) и обратиться к врачу.

Категорически запрещается:

-принимать пищу в лаборатории;

-загромождать рабочее место посторонними предметами;

-посещение лаборатории посторонними лицами;

-работать в отсутствии преподавателя или лаборанта, а также в неустановленное время;

-проводить опыты в загрязненной посуде;

-набирать реактивы в пипетку ртом;

-нагревать, смешивать, взбалтывать реактивы вблизи лица;

-выполнять работы, не связанные с учебным практикумом;

-выливать в раковину остатки кислот, щелочей и других вредных веществ;

-засорять раковину.

8.Знакомство с оснащением лаборатории. Правила работы с мерной посудой и лабораторным оборудованием

Студентам демонстрируют полный набор мерной посуды (пипетки, микробюретки) и показывают, как ими пользоваться. При знакомстве с основной аппаратурой студентам объясняют принцип работы фотоэлектроколориметра, центрифуги, центрифужных весов, термостата и показывают приборы в работе.

8.1.Правила работы с микродозатором

Микродозатор представляет собой автоматическую пипетку, работающую путем вытеснения объема воздуха, соответствующего отмеряемому объему жидкости. Распространены микродозаторы как для измерения изменяемых объемов (20–200 мкл, 100–1000 мкл), так и для измерения постоянных объемов (50 мкл, 100 мкл, 500 мкл и т.д.)

Для измерения:

1)воздух вытесняется из пипетки нажатием поршня до легкого сопротивления, носик колпачка погружается в реактив, затем медленно отпускается поршень. Реактив пневматически насасывается через носик в колпачок пипетки в заданном объеме;

2)далее реактив переносится в нужную пробирку и выливается путем повторного медленного нажатия на поршень. При этом носик колпачка контактирует со стенкой пробирки для лучшего выхода жидкости, и нажимать на поршень можно

12

до конца (при выливании реактива ход поршня не измеряющий, но важно вылить все до последней капли);

3)отпустить поршень;

4)между отмериванием разных реактивов – промыть микродозатор. Для этого операции 1-3 повторить три раза с дистиллированной водой.

Помнить:

-не пытайтесь настроить объем микродозатора больше или меньше указанного на нем номинала, это приведет к поломке дорогого оборудования. При необходимости перенастроить объем обратитесь к преподавателю или лаборанту.

-обычно в работе объемы указаны в мл. Для пересчета, 1 мл=1000 мкл

-следите, чтобы жидкость не попала за пределы сменного колпачка – это гарантия поломки. Недопустимо класть горизонтально или переворачивать дозатор с раствором в колпачке, т.е. нельзя обращаться как со шприцом!

-до и после измерения в колпачке не должно быть жидкости, это ошибка измерения. Если в колпачке капли, от них нужно избавиться промыванием.

8.2. Работа с фотоэлектроколориметром (ФЭК)

Колориметрический концентрационный анализ основан на законе светопоглощения Бугера-Ламберта-Бера, который описывается линейной зависимостью между концентрацией раствора поглощающего свет вещества и его оптической плотностью для монохроматического излучения.

Оптическая плотность раствора может изменяться от нуля до бесконечности, но достаточная точность ее измерения возможна лишь в интервале значений от 0,2 до 0,8.

Измерение оптической плотности опытного раствора проводится относительно так называемого контрольного раствора, который не содержит анализируемого компонента, но все остальные реагенты такие же, как в опытном образце. Если эти реагенты прозрачные, можно в качестве контроля использовать дистиллированную воду.

Помнить:

1)прогрев оборудования производится с открытой крышкой! крышка закрывается только на момент измерения или после выключения;

2)не закрывать крышку без кювет!

3)кюветы должны быть сухие снаружи, с чистыми оптическими поверхностями, заполнены выше метки, чтобы при измерении свет шел через раствор, а не через воздух.

Для измерения на КФК-2:

1)включить прибор в сеть за 15 мин до измерения (для стабильности показаний необходим прогрев оборудования) с открытой крышкой;

2)вращением ручки выбрать светофильтр согласно указанной в описании эксперимента длине волны;

3)вращением ручки выбрать «чувствительность», соответственно группе светофильтров (черная, красная);

4)поместить в кюветное отделение кюветы с опытным и контрольным раствором, закрыть крышку. (Перевод каретки позволяет менять их местами без вытаскивания);

5)против контроля установить НОЛЬ по нижней шкале ручками «ГРУБО» и затем «ТОЧНО» Если не устанавливается, поменять положение ручки «чувствительность» (2 или 3);

6)перевести каретку и снять показание прибора против опытной кюветы (стрелка покажет значение по нижней шкале). Открыть крышку;

13

7)Если нужны дальнейшие измерения, заменять опытные растворы на другие (и измерять как в п.6) без мытья кюветы, время от времени контролируя точность установки нуля (как в п.5);

8)После работы выключить прибор, вытащить и промыть водой кюветы.

Для измерения на КФК-2МП:

1)включить прибор в сеть за 15 мин до измерения (для стабильности показаний необходим прогрев оборудования) с открытой крышкой, нажать «ПУСК»;

2)вращением ручки выбрать светофильтр согласно указанной в описании эксперимента длине волны;

3)вращением ручки выбрать чувствительность, соответственно группе светофильтров (черная, красная), нажать кнопку «Ш0»;

4)поместить в кюветное отделение кюветы с опытным и контрольным раствором, закрыть крышку. (Перевод каретки позволяет менять их местами без вытаскивания);

5)против контроля установить НОЛЬ (нажать «К» - индикатор покажет 1);

6)перевести каретку и снять показание прибора против опытной кюветы (нажать «D5», и значение будет на индикаторе);

7)если нужны дальнейшие измерения, заменять опытные растворы на другие (и измерять как в п.6) без мытья кюветы, время от времени переустанавливая НОЛЬ (как в п.5);

8)после работы нажать «ПУСК», выключить прибор, вытащить и промыть водой кюветы.

Для закрепления полученных знаний и навыков работы с мерной посудой и приборами каждый студент выполняет несложные лабораторные операции, с использованием автоматических пипеток:

№	Сыворотка, мл	Вода, мл	Концентрация
пробирки	(дозатор)	(бюретка или	Мг/мл	мг% («СИ»)
		цилиндр)
1	0,5	4,5	0,5/0,5+4,5=0,1	0,1· 100=10
2	0,1	4,9	0,1/0,1+4,9=0,2	0,2·100=20
3	0,02	5,0	0,02/0,02+5,0=0,04	0,04·100=4

Таблица единиц концентраций в системе «СИ»

Наименование единиц	Символ	Определение
Грамм-на-литр	г/л	г вещества в 1000 мл раствора
Миллиграмм-на-литр	мг/л	мг вещества в 1000 мл раствора
Моль-на-литр	моль/л	число молей, равное количеству грамм вещества
		в 1000 мл раствора, деленному на молекулярную
		массу вещества.
Миллимоль-на-литр	ммоль/л	число миллимолей, равное количеству мг
		вещества в 1000 мл раствора, деленному на
		молекулярную массу
Наряду с вышеуказанными, в клинической практике употребляют также:
Грамм-процент	г%	г вещества в 100 мл раствора
Миллиграмм-процент	мг%	мг вещества в 100 мл раствора

9. Работа с учебной и научной литературой

Студенты должны владеть основными методами работы с учебной и научной литературой, составления картотек, рефератов, литературных обзоров.

14

Для свободной ориентации в потоке литературы по любой отрасли знаний и рациональному использованию найденных источников требуются определенные навыки. Еще до начала информационного поиска следует определить для себя круг тем и возможных смежных вопросов, их хронологические рамки, чтобы избавиться от «информационного шума».

Чтобы быстро получить подробные сведения по какому-то вопросу, целесообразно просматривать литературу в следующем порядке:

1.Медицинская энциклопедия.

2.Фундаментальные курсы биохимии (список литературы по изучаемому разделу).

3.Монографии (по данному вопросу), указатели (предметный, формульный, авторский и патентный), реферативные журналы (например, «Биохимия»), начиная с последних лет до периода, охваченного литературными ссылками в монографиях. Это позволит ознакомиться с обзорными статьями по интересующему вопросу. Далее просматривают журналы обзорного характера соответствующего профиля, специальные библиографические указатели.

Перечисленная литература дает ссылки на оригинальные статьи и патенты, которые просматриваются по мере необходимости.

В наши дни существует возможность эффективного поиска литературы с использованием ресурсов Интернет:

1.Биохимия: учебник для вузов/ под ред. Е.С.Северина - 5-е изд., - М. : ГЭОТАР-

Медиа, 2009. - 768 с. Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/

2.Биологическая химия с упражнениями и задачами : учебник / под ред. чл.-корр. РАМН С.Е. Северина. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2011. - 624 с.: ил. Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/

3.Биологическая химия: Учебник. - 3-е изд., стереотипное. - М.: ОАО "Издательство

"Медицина", 2008. - 704 с: ил. - (Учеб. лит. Для студентов мед. вузов) Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/

4.Клиническая биохимия: учебное пособие. 3-е издание / под ред. В.А. Ткачука. - М. :

ГЭОТАР-Медиа, 2008. Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/

5.http://www.xumuk.ru/biologhim/

6.http://medlink.ucoz.ru/dir/19

7.http://nehudlit.ru/books/subcat283.html

15

Тема 2. Аминокислоты и структура белка

Цель: изучить состав, строение и физико-химические свойства аминокислот и белков в ходе: выделения белков из различных органов и тканей (освоить методы гомогенизации тканей, экстракции белков из тканей и осаждения из растворов); гидролиза белковых соединений, хроматографического разделения и анализа их аминокислотного состава (освоить хроматографические способы разделения смесей аминокислот, отдельные цветные реакции на аминокислоты и белки).

Основные термины:

Аминокислоты - производные карбоновых кислот, у которых один атом водорода замещен на аминогруппу.

Пептиды - органические вещества, состоящие из остатков аминокислот (<50), соединенных пептидной связью. В живых клетках пептиды синтезируются из аминокислот либо являются продуктами обмена белков. Многие природные пептиды обладают биологической активностью. Различают дипептиды, трипептиды и т.д., а также полипептиды.

Пептидная (амидная) связь - ковалентная связь, возникающая в результате конденсации карбоксильной и аминогруппы.

Полипептиды - полимеры, построенные из остатков аминокислот (>50). Условная граница между полипептидами и белками лежит в области молекулярной массы 6000 (приблизительно 100 аминокислотных остатков). Многие антибиотики, гормоны, токсины по химической природе полипептиды.

Белки (протеины) - природные полимеры аминокислот, содержащие более 100 аминокислотных остатков.

Конформация молекулы – расположение частей молекулы белка в пространстве. Для большинства классов белков пространственная структура в физиологических условиях полностью определяется аминокислотной последовательностью.

План изучения темы:

1.Аминокислоты - мономеры белков.

2.Классификация протеиногенных аминокислот, физико-химические и биологические свойства аминокислот.

3.Белки - современные представления о строении белковой молекулы.

4.Уровни структуры, типы связей в молекуле белка и их значение для проявления биологической активности.

5.Классификация белков по структурным признакам: простые и сложные, фибриллярные и глобулярные.

6.Методы изучения аминокислот и белков: выделение, очистка, качественный и количественный анализ, хроматография, электрофорез.

ИЗЛОЖЕНИЕ УЧЕБНОГО МАТЕРИАЛА Альфа-аминокислоты ( –аминокислоты) - это органические кислоты, у которых один из атомов водорода у α-С-атома замещен на аминогруппу. Классификация протеиногенных аминокислот возможна: по строению радикала, по полярности радикала, по степени незаменимости аминокислот, по кислотно-основным свойствам. Для аминокислот характерны следующие физико-химические свойства: ионизация (диссоциация карбоксильных и протонирование аминогрупп), изоэлектрическое состояние, изоэлектрическая точка, амфотерность аминокислот и их буферные свойства.

Белки – это высокомолекулярные азотсодержащие органические соединения, состоящие из аминокислот, соединенных пептидной связью в полипептидные цепи.

16

Белки выполняют в организме многочисленные функции: ферментативную, гормональную, рецепторную, транспортную, структурную, иммунологическую и др. Белки имеют сложную форму структурной организации.

Первичная структура белка – это линейная последовательность аминокислот, соединенных между собой в цепь пептидными связями.

Вторичная структура белка - это способ укладки стержня пептидной цепи (первичной структуры) в упорядоченную –спираль или –структуру при помощи водородных связей.

-спираль – вторичная структура, формируемая остовом полипептидной цепи. Она представляет собой правую спираль, у которой на один виток приходится 3,6 аминокислотных остатка. Спираль стабилизирована водородными связями между группами СО и NH различных мономерных звеньев, отстоящих друг от друга на расстояние 4 остатков аминокислот. Водородные связи направлены вдоль оси спирали. Бета-структура - -слой или «складчатый лист» - один из регулярных элементов вторичной структуры белка: между несколькими вытянутыми (деспирализованными) полипептидными цепями возникают водородные связи (между группами СО одной цепи и NН другой).

Третичная структура белка – способ укладки –спирали или –структуры в пространстве (глобулярные, фибриллярные белки). Третичную структуру стабилизируют ионные, водородные, ковалентные (дисульфидные) связи и гидрофобные взаимодействия.

Четвертичная структура белка – это объединение нескольких полипептидных цепей с третичной структурой в единую функциональную молекулу белка. Классификация белков осуществляется: по структурным признакам (простые и сложные); по электрохимическим признакам (кислые, основные и нейтральные); по полярным признакам (полярные [гидрофильные], неполярные [гидрофобные], амфифильные); по форме молекул (глобулярные, фибриллярные); по функциям (транспортные, белки–ферменты, гормоны, антитела, структурные и т.д.). Характеристика (особенности аминокислотного состава, молекулярнуая масса, заряд, структура и функции) и основные представители простых белков (альбумины, глобулины, протамины, гистоны). Химический состав и структура сложных белков: белковая часть – апопротеин, небелковый компонент – простетическая группа. Принцип классификации (по названию простетической группы) и классы сложных белков.

Методы изучения аминокислот и белков: выделение, очистка, качественный и количественный анализ, хроматография, электрофорез.

ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ

Работа 1. Экстракция белков из скелетных мышц.

Белки (Б) мышечной ткани делят на три основные группы: саркоплазматические (1), миофибриллярные (2), белки стромы (3).Эти группы белков резко различаются по растворимости в воде и солевых средах с различной ионной силой. Белки 1ой группы – саркоплазматические (миоальбумины и миоглобулины) – растворимы в солевых растворах низкой концентрации (0,4%). Белки 2ой группы - сократительные (миозин, актин, актомиозин и др.) – растворимы в солевых растворах с высокой ионной силой (4%). 3я группа – белки стромы (главным образом – коллаген и эластин) – нерастворимы даже в солевых растворах высокой концентрации.

Экстракция – извлечение белков мышечной ткани, растворимых в солевых растворах высокой ионной силы (белки 1ой и 2ой групп) – путем перевода их в солевой раствор.

Принцип метода: Белки из тканей скелетных мышц экстрагируют 5% раствором хлористого калия, в результате чего в растворе оказываются

17

саркоплазматические и миофибриллярные белки (глобулярные), а в осадке - коллаген и эластин (фибриллярные).

Ход работы: В фарфоровую ступку вносят 2 г мышечной кашицы, щепотку кварцевого песка и приливают 3 мл 5% раствора хлористого калия, Содержимое растирают до гомогенного состояния. Центрифугируют. Надосадочная жидкость содержит раствор белков скелетных мышц.

Работа 2. Получение раствора альбумина из куриного яйца.

Яичный белок – 10% водный раствор нескольких белков. Большая часть ( 70%) – представлена альбуминами, глобулинов содержится меньше.

Принцип метода: После 10-кратного разведения белка куриного яйца дистиллированной водой глобулины, имеющие большую молекулярную массу и меньший заряд, выпадают в осадок, альбумины остаются в растворе. Осадок глобулинов удаляют фильтрованием.

Ход работы: В предварительно взвешенный мерный стакан вливают белок куриного яйца и при помешивании добавляют дистиллированную воду до 10-кратного разбавления (на 1 часть белка – 9 частей воды). Содержимое фильтруют. В фильтрате – раствор альбуминов.

Работа 3. Получение сыворотки и плазмы крови.

Принцип метода: Основан на центрифугировании крови с добавлением антикоагулянта (гепарин, лимоннокислый натрий, ЭДТА и др.). В результате оседают только форменные элементы. Над осадком остается плазма, в которой сохраняются все белки, в том числе фибриноген. Если в кровь антикоагулянты не вносятся, то она свертывается. После центрифугирования над осадком остается сыворотка крови. Она не содержит фибриноген.

Диагностическое значение: При диспротеинемиях в крови изменяется не только общее содержание белка, но и соотношение его фракций. Эти данные используют в клинике для проведения дифференциальной диагностики ряда заболеваний.

Ход работы: В центрифужные пробирки наливают по 5-6 мл крови, добавляют антикоагулянт, уравновешивают и центрифугируют 10 минут при 1500-2000 об/мин. Надосадочная жидкость содержит плазму крови. Если антикоагулянт не добавляется, то фибриноген превращается в фибрин и обеспечивает образование сгустка, при отделении которого получается сыворотка.

Работа 4. Разделение смеси аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге.

Принцип метода: Хроматография – это метод разделения и анализа смесей веществ, основанный на различном распределении компонентов смеси между подвижной (обычный газ или жидкость) и неподвижной (твердый сорбент, бумага, силикагель и др.) фазами. Элюент (80% водонасыщенный фенол), перемещаясь по бумаге, растворяет нанесенные аминокислоты и увлекает их за собой с различной скоростью вслед за фронтом растворителей. Скорость перемещения аминокислот зависит от способности их к растворению в смеси растворителей. Чем меньше растворяются аминокислоты в воде и больше в феноле, тем быстрее они будут перемещаться вслед за фронтом органического растворителя и тем дальше переместятся от места их нанесения.

Ход работы: На линию старта фильтровальной бумаги наносят растворы: исследуемой смеси аминокислот (на среднюю полоску) и «свидетелей» (на крайние полоски). В качестве «свидетелей» удобно использовать глицин (биполярный ион, гидрофильный) и лейцин (гидрофобный, растворим в органических растворителях).

18

Конец хроматографической бумаги погружают в элюент (фенол), эксикатор герметично закрывают крышкой. Когда фронт растворителей пройдет более половины длины хроматографической бумаги (1,5-2,0 часа), ее вынимают из камеры, высушивают и смачивают раствором нингидрина. Далее хроматограммы нагревают в сушильном шкафу при 105оС и обнаруживают фиолетовые пятна, указывающие на расположение отдельных аминокислот на хроматографической бумаге. Идентификации аминокислот на хроматограмме можно произвести: 1) с помощью специфических цветных реакций на отдельные аминокислоты; 2) в нашем опыте путем сопоставления на хроматограмме неизвестных компонентов смеси и «свидетелей»; 3. по величине коэффициента распределения Rf. [Rf – отношение расстояния от места старта до остановки аминокислоты (а) к расстоянию от места старта до фронта растворителя (в) : Rf = а/в]. Коэффициент распределения является характерной для каждой аминокислоты величиной, постоянной при данных условиях опыта.

ВЫВОД из проделанной работы: в исследуемой жидкости обнаружены 2 аминокислоты: глицин и лейцин.

Гли		•	●
Задача		•	●	●
Лей		•		●
старт				Фронт растворителя

Работа 5. Цветные реакции на отдельные аминокислоты и белки. а) биуретовая реакция

Принцип метода: Биурет в щелочной среде с ионами меди образует комплексные соли, окрашенные в сине-фиолетовый цвет. Реакция обусловлена взаимодействием иона меди с группировками (─СО─NH─) биурета. Белки в щелочной среде взаимодействуют с ионами меди и образуют аналогичные хелатные соединения. Следовательно, они содержат группировки (─СО─NH─), с помощью которых аминокислоты объединяются в полипепдидную цепь.

б) нингидриновая реакция на -аминокислоты Принцип метода: При взаимодействии с нингидрином -аминокислоты

(свободные или в составе белка) окисляются и распадаются с образованием аммиака. В результате реакции аммиака с нингидрином образуется сложное соединение синефиолетового цвета. Эта реакция используется для обнаружения -аминокислот в растворе.

в) ксантопротеиновая реакция Принцип метода: При нагревании растворов белков или смеси аминокислот,

содержащих ароматические аминокислоты, с концентрированной азотной кислотой исследуемая жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. Реакция обусловлена нитрованием ароматических аминокислот и образованием желтых нитропроизводных.

г) реакция Фоля Принцип метода: При нагревании со щелочью и ацетатом свинца растворов

белков или смеси аминокислот, в которых находится серусодержащая аминокислота, жидкость окрашивается в бурый или черный цвет. Реакция обусловлена разрушением в щелочной среде серусодержащих аминокислот с образованием сернистого натрия, который с ацетатом свинца образует черный осадок сульфида свинца.

Ход работы, результаты и выводы внесите в таблицу:

Наименовани	Исследуемый	Реактивы	Окраска	Чем	Вывод
е реакции	материал*		продуктов	обусловлена
			реакции	реакция
а)	раствор белка	1мл	сине-	наличие в белке	белки состоят из

19

биуретовая	(5 капель 1%	биуретового	фиолетовая	пептидных	аминокислотных
реакция	р-ра яичного	реактива		связей	остатков,
	альбумина)	(CuSO4+NaOH)			соединенных
					пептидными
					связями
б) нингидри-	раствор белка	Нингидрин	розово-	наличием в	в исследуемом
новая	(5 капель 1%	(3-4 капли)	фиолетовая	исследуемом	растворе
	р-ра яичного	нагреть до		растворе	содержатся либо
	альбумина)	кипения		фрагмента α-	аминокислоты,
				аминокислоты	либо белок
в) ксанто-	раствор белка	HNO3, конц.	лимонно-	нитрованием	в исследуемом
протеиновая	(5 капель 1%	(2-3 капли)	желтая	ароматических	растворе
	р-ра яичного	осторожно		аминокислот и	содержатся либо
	альбумина)	нагреть		образованием	свободные
		+ 10 капель		желтых ниторо-	ароматические
		30% р-ра		производных	аминокислоты,
		NaOH			либо содержащие
					их белки
г) реакция	раствор белка	NaOH (5	бурая или	разрушением в	в исследуемом
Фоля	(5 капель 1%	капель 30% р-	черная	щелочной среде	растворе
	р-ра яичного	ра) +		серусодержащих	содержатся либо
	альбумина)	Pb(CH3COO)2		аминокислот с	серосодержащие
		(1 капля 5% р-		образованием	аминокислоты,
		ра)		черного осадка	либо белки, в
		кипячение		сульфида	состав которых
				свинца.	входят эти
					аминокислоты

*Примечание: Стоматологи используют слюну вместо р-ра яичного альбумина.

Практическое значение цветных реакций: они позволяют выявить в исследуемом растворе наличие или отсутствие белка, определить аминокислотный состав белка, наличие или отсутствие определенной аминокислоты в биологической жидкости (кровь, моча, слюна).

УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ И ОСНАЩЕНИЕ

-иллюстрированная биохимия (метаболические карты);

-таблицы (первичная структура белка, вторичная структура, третичная и четвертичная структуры белка, типы связей в молекуле белка, хроматографическое разделение аминокислот);

-учебные стенды;

-вопросы для самоподготовки;

-протоколы лабораторных работ;

-сборники заданий в тестовой форме и ситуационных задач с эталонами ответов;

-карточки программированного контроля (билеты с вопросами по теме занятия);

-центрифуга, нагревательные приборы, посуда, реактивы.

ДИДАКТИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ А. Задания в тестовой форме:

1.ОТРИЦАТЕЛЬНО-ЗАРЯЖЕННЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ

1)пролин

2)лизин

3)глутаминовая кислота

4)аспарагиновая кислота

5)валин

2.ПОД ТРЕТИЧНЫМ УРОВНЕМ ОРГАНИЗАЦИИ БЕЛКА ПОНИМАЮТ

20