Проведение анализа.

Длина волны (480 – 520) нм, кювета 1 см. Определение в сыворотке, плазме, моче.

Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении от 1 + 10 до 1 + 50 (результат умножают на разведение).

Отмерить, мл	Проба	Эталон	Контрольный раствор
1. Сыворотка, плазма, моча	0,01	-	-
2. Раствор глюкозы	-	0,01	-
3. Дистиллированная вода	-	-	0,01
4. Глюкозный реактив	3,0	3,0	3,0

Перемешивают и инкубируют 30 минут при 37ºС или 60 минут при комнатной температуре (+15 – +25)ºС. Раствор предохранять от действия прямого света! Измеряют оптическую плотность пробы (А₁) и эталона (А₂) против контрольного раствора. окраска стабильна не менее часа после инкубации.

РАСЧЕТ:

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ: 3,3 – 6,1 ммоль/л.

3. Проведение анализа с использованием набора реактивов «Ольвекс-диагностикум».

Состав набора:

1. реагент 1 – буфер;

2. реагент 2 – лиофилизат;

3. реагент 3 – калибратор 10 ммоль/л;

4. реагент 4 – кислота перхлорная.

Подготовка рабочих растворов.

Содержимое одного флакона № 2, аккуратно перемешивая, растворить в содержимом одного флакона № 1. Полученный рабочий реагент стабилен в течение 6 месяцев при температуре 2-8ºС. После использования флаконы плотно закрыть!

Проведение анализа

(использовать центрифужные пробирки).

Отмерить, мл	Проба, мл	Эталон	Контрольный раствор
1. Кислота перхлорная	0,5	0,5	0,5
2. Сыворотка крови (или моча)	0,5	-	-
3. Калибратор 10 ммоль/л	-	0,5	-
4. Дистиллированная вода	-	-	0,05

Инкубируем пробы 10 минут при 37ºС. Затем центрифугируем опытную пробу при 1000 об/мин 5-10 минут. Из опытной пробы отбираем супернатант и используем в следующем этапе анализа.

Готовим 3 пробирки: опытную, калибровочную и контрольный раствор. Во все пробирки вносим по 2,0 мл рабочего реагента. В опытную пробу – 0,1 мл супернатанта; в калибровочную – 0,1 мл раствора из калибровочной пробы (см. начало анализа), в контрольный раствор вносим 0,1 мл раствора из контрольной пробы (см. начало анализа). Реакционную смесь тщательно перемешать и инкубировать 20 минут при 37ºС или 30 минут – на столе при комнатной температуре! После инкубации измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы, длина волны 500 нм, кювета 1 см. Окраска стабильна не менее часа после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

РАСЧЕТ:

НОРМАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ: 3,9 – 5,6 ммоль/л.

Приложение № 4.

Закрепление знаний, умений и навыков.