III. Исследования иммунного статуса направлены на выявление:

1) уменьшения CD4/CD8 (в N 2 и >, при СПИДе - 0,5 и <);

2) снижения CD4 клеток (<200 клеток/мл.);

3) наличия одного из лабораторных признаков, включающих анемию, лейкопению, тромбоцитопению, лимфопению;

4) повышения концентрации Ig A и Ig G в сыворотке крови;

5) снижения реакции бласттрансформации лимфоцитов на митогены;

6) отсутствия кожной реакции ГЗТ на несколько антигенов;

7) повышения уровня циркулирующих иммунных комплексов.

Патогенные грибы. Классификация грибов. Методы диагностики микозов.

КЛАССИФИКАЦИЯ ГРИБОВ 

1. Ботаническая  - за основу берется строение органов полового воспроизводства и внешний вид гриба.

Номенклатура бинарная. По ботанической классификации - 6 классов:

1. Оомицеты - непатогенные, низшие грибы.

2. Хитридиомицеты - непатогенные, с несептированным мицелием.

3. Зигомицеты - несептированные грибы, которые способны вызывать заболевания человека и животных.

4. Аскомицеты (аско - сумка) - септированные грибы, патогенные для человека и животных.

5. Базидомицеты - шляпочные грибы. Могут быть причиной пищевых отравлений. Патогенный для человека род - Criptococcus.

6. Дейтеромицеты - несовершенные грибы, у которых не выявлен половой путь размножения. Их примерно 30% всех грибов.

2. Клиническая классификация (возбудители 2  0родов)

1. Кератомикозы (Trichophyton, Trichosporon).

2. Дерматомикозы (Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton).

3. Кандидозы (Candida).

4. Глубокие микозы (Histoplasma, Coccidioides, Blastomyces, Criptococcus, Sporot-richum, Mucor, Penicillium, Aspergillus).

5. Псевдомикозы (это бактерии, но клинические проявления заболеваний, как при микозах).

Методы диагностики микозов

Забор материала  со свежих развившихся поражений, где больше элементов гриба. Пораженные волосы берутся эпиляционным пинцетом. Элементы гладкой кожи, чешуйки - скальпелем. При поражении ногтей - соскоб скальпелем или отрезается кусочек маникюрными ножницами. Соскобы со слизистой оболочки берутся шпателем. Все остальные материалы - как обычно (при бактериологическом исследовании).

Микроскопическое исследование

Исследуют: - неокрашенные (нативные) окрашенные препараты. Предварительно материал просветляется. Для этого материал обрабатывают щелочью (10-30%) в течение 20 минут. Можно также производить просветление материала разведением в физрастворе. Чтобы сконцентрировать материал, его центрифугируют.

Нативные препараты. Каплю материала наносят на предметное стекло, затем добавляют раствор Люголя и спиртовой раствор глицерина (по 50% каждого). Накрывают покровным стеклом и исследуют в фазовоконтрастном или световом микроскопе.

Окрашенные препараты готовят обычным способом, окрашивают по Граму, ЦильНильсену, Романовскому-Гимзе и специальными методами. Фиксация - только жидким фиксатором.

Микологическое исследование  включает все этапы культурального метода: выделение чистой культуры и идентификацию. Для удаления бактериальной флоры материал предварительно обрабатывают антибиотиками широкого спектра действия. Засевают на специальные среды с кислой рН и культивируют при пониженной температуре (26 - 30⁰ С). Колонии вырастают через несколько дней. Их изучают под малым и большим увеличением микроскопа. Идентификация - на основании морфологических признаков.

Большинство питательных сред для грибов готовится на основе среды Сабуро (водо-проводная вода + агар-агар + пептон + мальтоза).

Экспериментальный метод применяется для оценки патогенности выделенного гриба-возбудителя. При заражении используют чистые культуры или патологический материал. Подбор животных, техника введения материала, этапы работы - такие же, как в бактериологии.

Иммунологические исследования . (серологический и аллергический методы) - такие же, как в бактериологии.

Гистологическое исследование. - такое же, как в бактериологии (мазки-отпечатки, срезы), но изучают не только морфологию гриба, но и реакцию ткани на возбудителя, глубину поражения.

Лабораторная диагностика поверхностных микозов (кератомикозов, дерматомикозов)

1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры гриба и идентификация по морфологии.

Лабораторная диагностика кандидомикоза.

1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры: производится количественный посев материала несколько раз с промежутками в 5-7 дней. Если кандиды обнаруживаются многократно в количестве 10 53 0 на г. исследуемого материала и более, то диагноз кандидомикоза подтверждается.

3. Серологический метод: используется РСК и РА (диагностический титр антител 1:160) и РПГА (1:1600). Ставят также РП с белковыми и полисахаридными антигенами кандид.

4. Аллергический метод (кожные пробы по типу реакции Манту).

5. Выделенная культура проверяется на вирулентность на белых мышах. Если доза до 1 млн. клеток кандид вызывает гибель мыши, культура считается вирулентной.

Лабораторная диагностика глубоких микозов.

А. Криптококкоз:

1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры.

3. Серологическая диагностика (РА, РП, РСК, РПГА). Эти реакции редко бывают положительными.

4. Выявление криптококкового антигена в крови и ликворе больных с помощью РП.

5. Заражение белых мышей.

Б. Кокцидиоидоз:

1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры.

3. Серологическая диагностика:

с 2 недель до 4 месяцев выявляют антитела в РП,

с 4 месяцев и позже ставят РСК (диагностические титры 1:4 - 1:32).

4. Кожные пробы с кокцидиоидином (в разведении 1:100 и 1:1000). Проба положительная, если через 24-48 часов эритема больше 0,5 см.

В. Гистоплазмоз:

1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры.

3. Серологическая диагностика: первые три месяца в РСК и РП выявляются анти-h-антитела (это острый процесс). Позже 3 месяцев в РСК и РА выявляют анти-m-антитела (хронический процесс).

4. Кожная проба с гистоплазмином.