1. Получение вытяжки пигментов хлоропластов

Пигменты выделяют пользуясь методикой, изложенной в работе №10

2. Разделение пигментов хлоропластов методом хроматографии на бумаге

Метод основан на способности пигментов распределяться в слое адсорбентов в соответствии с размерами, формой и массой молекул. Таким адсорбентом может быть клетчатка в составе хроматографической бумаги.

ХОД РАБОТЫ

1. Взять лист хроматографической или плотной ровной фильтровальной бумаги 1313 см и простым карандашом провести стартовую линию длиной 7 см, отступя 1,5 см от нижнего края, параллельно ему и по 3 см от боковых сторон:

								Стартовая линия

2. На стартовую линию нанести капилляром вытяжку узкой полосой так, чтобы окраска ее была достаточно интенсивной. Вытяжку наносят 6-8 раз поверх предыдущей, каждый раз подсушивая высоко над плиткой, чтобы линия не расплывалась.

3. После того как получена пигментная полоска достаточной интенсивности, квадрат надо свернуть в виде цилиндра и скрепить скрепкой по центру, чтобы его края не заходили друг за друга более, чем на 1 см.

4. В сосуд налить смесь для разгонки пигментов: 5 мл петролейного эфира и 20 мл бензина (хуже гексана или гептана), отмеренных с максимальной точностью. На дно сосуда со смесью осторожно поставить приготовленный бумажный цилиндр так, чтобы пигментная полоска оказалась внизу. После этого сосуд переставлять нельзя! Если бумажный цилиндр ниже высоты сосуда, то последний следует сверху закрыть стеклом. Растворитель начнет быстро подниматься по бумаге, увлекая с собой пигменты. Так как форма, размер и масса различных пигментов разная, то через некоторое время смесь, нанесенная на бумагу в виде одной полосы, разделится на отдельные компоненты в виде полосок разных цветовых оттенков, отстоящих на разных расстояниях от старта. Порядок распределения сверху вниз: каротин, две светло-желтые полосы ксантофиллов, хлорофилл а (синеватый), хлорофилл b (желтый оттенок).

5. Хроматограмму вклеить в тетрадь:

Место вклейки хроматограммы

6. Отметить на хроматограмме соответствующие полосы пигментов.

Реактивы и оборудование: петролейный эфир, бензин, спиртовая вытяжка смеси пигментов зеленого листа, капилляр, цилиндр, закрытый стеклом  камера для разгонки смеси, мерный цилиндр на 20 мл.