Уо « Минский государственный медицинский колледж» Методическая разработка практического занятия для учащихся
Специальности «Медико-диагностическое дело» по дисциплине «Микробиология микробиологическими исследованиями»
Практическая работа № 73
Тема: « Комплексное исследование на дисбактериоз кишечника»
Подготовила Якимова Л.М
Минск
Практическая работа
Тема: « Комплексное исследование на дисбактериоз кишечника»
Цель занятия: отработать методику исследования испражнений на дисбактериоз кишечника.
Самостоятельная работа:
Приготовление 10-кратных разведений испражнений.
Посевы полученных разведений на плотные питательные среды: Эндо, Плоскирёва, Симмонса, Сабуро, ЖСА, КА.
Посевы полученных разведений на пробирочные среды: скошенный МПА, среды Блаурок и Вильсона – Блера, обезжиренное молоко.
Приготовление мазков с выросших колоний, окраска их по Граму, микроскопия.
Прямыми показаниями к исследованию на дисбактериоз кишечника являются:
- затянувшийся период реконвалесценции после дизентерии или других острых кишечных заболеваний;
- длительно протекающие кишечные расстройства (дисфункции) при которых не удается выделить патогенные микроорганизмы;
- дисфункция кишечника у лиц, длительно подвергающихся воздействию некоторых производственных вредностей (ионизирующие излучения, токсичные химические соединения и др.), а также при интенсивной антибиотико- или иммуносупрессивной терапии;
- обострения хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта (колиты, холециститы, язвенная болезнь и др.);
- наличие системной воспалительной реакции и бактериемии без выраженного очага воспаления;
- наличие трудно поддающихся лечению гнойно-воспалительных очагов и вялотекущих инфекционных процессов;
- подготовка к оперативному вмешательству на органах пищеварения;
- дисфункция кишечника у новорожденных;
. Подготовка материала на исследование
Все обследуемые за 1-3 дня до взятия пробы должны соблюдать диету, исключающую продукты, усиливающие брожение в кишечнике, а также алкоголь и антимикробные лекарственные препараты. От момента последнего принятия пищи до взятия материала должно пройти не менее 8-10 часов. Материалом служит кал после естественной дефекации, который собирают в стерильный герметичный контейнер с широким горлышком и плотно завинчивающейся крышкой без консерванта. Если использую судно, его предварительно дезинфицируют, а после дезинфекции ополаскивают стерильной (или просто кипяченой) водой, чтобы удалить следы дезинфекции другими химическими веществами. Материал берут из средней порции кала стеклянной или деревянной палочкой в количестве не менее 1г и помещают в специальную одноразовую посуду или флаконы многократного применения емкостью 10-15 мл, которые стерилизуют автоклавированием, сухим жаром или газовой стерилизацией. Материал необходимо доставить в лабораторию не позднее, чем через 2 часа после взятия пробы (интервал между взятием пробы и началом посева не должен превышать 4 часа). При необходимости материал транспортируют в холодильной сумке.
Схема исследования испражнений на дисбактериоз.
После взвешивания 1 г нативного кала (без консерванта) его гомогенизируют в 9 мл физиологического раствора (ФР, 0,85%), раствор хлорида натрия или фосфатного буфера, получая исходное разведение материала (10-1). Содержимое контейнера тщательно перемешивают стеклянной палочкой и оставляют при комнатной температуре на 10-15 минут. Попутно готовят ряд последующих разведений материала в физиологическом растворе до 10-9, 10-10. Каждое разведение кала готовят новой стерильной пипеткой. Из приготовленных разведений делают дозированные посевы на питательные среды для культивирования различных групп микроорганизмов. Для получения сосчитываемого числа колоний на плотные среды в чашках Петри наносят 0,1 мл взвеси из соответствующих разведений с последующим втиранием материала шпателем; в жидкие, полужидкие и плотные среды, разлитые в пробирки, высоким столбиком вносят 1 мл взвеси на 9 мл среды.
Предлагаемая схема посева (разведение до 10-10) на различные среды
Микроорганизмы |
Высеваемые разведения |
Питательные среды |
Количество чашек, пробирок |
Бифидобактерии |
10-7;10-8; 10-9; 10-10 |
Среда Блаурокк, бифидобульон инкубируют при 370С 24 часов |
4 пробирки |
Эшерихии (в том числе и гемолитические) |
10-6 |
Эндо, Эндо с 2,5% кровью, желчно-кровяной агар инкубируют 18-24 часа при 370С |
1 чашка |
Лактобактерии |
10-5;10-6 |
Молоко, МРС-4, лактобакагар, среда Рогоза инкубируют при 370С 24 часов |
2 чашки |
Другие ассоциации энтеробактерий Е.соli со сниженной активностью, неферментирующие бактерии (НФБ) |
10-3;10-6;10-8 |
Эндо, Плоскирева, Левина, Конго-рот-агар, инкубируют при 370С 24 часа, агар Симмонса 370С до 72 часов |
3 чашки |
Протей |
10-1 |
Скошенный агар по Шукевичу, амфолан-агар инкубируют при 370С 24 часов |
1 пробирка |
Клостридии |
10-2 |
Вильсона-Блера Ставят две пробы: гретую (при 700С в течение 15 мин) и негретую. В случае почернения среды с гретой пробой, ее подвергают дальнейшей идентификации. инкубируют при 370С 48 часов |
2 пробирки |
кампилабактерии |
10-1 |
Колумбиа агар+антибиотики, кампилобактерагар инкубируют при 420С 24-48 часов (в микроаэрофильных условиях) |
1 чашка |
Энтерококки |
10-6 |
Желчно-кровяной агар, Эндо кровяной, Конго рот агар, энтерококк агар инкубируют при 370С 24 часа |
1 чашка |
Стафилококки РКП (+) и РКП (-) |
10-1;10-3 |
ЖСА, МЖСА, Байрд-Паркер агар, манитол-солевой агар инкубируют при 370С 48 часов |
2 чашки |
Кандиды |
10-1;10-3 |
Сабуро, Никкерсона с антибиотиками инкубируют при 370С 48 часов затем оставляют еще 2-е суток при комнатной температуре. |
2 чашки |
Сальмонеллы, шигеллы |
10-1 |
Плоскирева инкубируют при 370С 24 часа |
1 чашка |