Методы исследования
Определение продукции хитинолитических ферментов:
штаммы высевали на хитинсодержащий/хитозансодержащий агар, затем культивировали в течение 7 суток. Наблюдения проводились через каждые 24 часа, в результате чего определяли продукцию ферментов по наличию и размерам зон гидролиза хитина\хитозана.
Результаты и их обсуждение
С целью исследования хитиназной и хитозаназной активности на первом этапе производили определение способности к использованию хитина либо хитозана в качестве единственных источников углерода и энергии и регистрировали рост исследуемых штаммов. Одновременно с высевом на среды, содержащие хитин либо хитозан проводился высев бактерий на минимальные среды без источника углерода.
В результате производимых исследований было установлено, что коллоидный хитин/хитозан, полученный по методике (S.C. Hsu, J.L. Lockwood, 1975) обеспечивает визуальный контроль за проявлением хитиназной и хитозаназной активности, который можно увидеть на следующих рисунках.
а) б)
Рисунок 1. Проявление хитозаназной (а) и хитоназной(б) активности.
Примечание: Результат учитывался по способности гидрилизовать коллоидный хитин, содержащийся в среде.
Результаты эксперимента по определению хитозаназной активности актиномицетов.
таблица 1
№№ штаммов |
Хитозаназная активность |
№№ штаммов |
Хитозаназная активность |
1.1 |
+ |
1.41 |
+++ |
1.2 |
+ |
1.42 |
+ |
1.3 |
++ |
1.43 |
- |
1.4 |
- |
1.44 |
++ |
1.5 |
+ |
1.45 |
- |
1.6 |
++ |
1.46 |
+++ |
1.7 |
++ |
1.47 |
- |
1.8 |
+++ |
1.48 |
- |
1.9 |
++ |
1.49 |
+ |
1.10 |
+++ |
1.50 |
++++ |
1.11 |
+ |
1.51 |
- |
1.12 |
+ |
1.52 |
- |
1.13 |
++++ |
1.53 |
+ |
1.14 |
+ |
1.54 |
++++ |
1.15 |
++ |
1.55 |
+++ |
1.16 |
++ |
1.56 |
- |
1.17 |
++ |
1.57 |
- |
1.18 |
++ |
1.58 |
+++ |
1.19 |
++ |
1.59 |
+ |
1.20 |
++ |
1.60 |
++ |
1.21 |
++ |
1.61 |
- |
1.22 |
++ |
1.62 |
+++ |
1.23 |
- |
1.63 |
++++ |
1.24 |
- |
1.64 |
- |
1.25 |
- |
1.65 |
++++ |
1.26 |
- |
1.66 |
+++ |
1.27 |
- |
1.67 |
++ |
1.28 |
- |
1.68 |
++ |
1.29 |
++ |
1.69 |
+++ |
1.30 |
+ |
1.70 |
++ |
1.31 |
++ |
1.71 |
+ |
1.32 |
++ |
1.72 |
+ |
1.33 |
- |
1.73 |
+ |
1.34 |
++ |
1.74 |
++++ |
1.35 |
+ |
1.75 |
+ |
1.36 |
+++ |
1.76 |
- |
1.37 |
+ |
1.77 |
+++ |
1.38 |
+ |
1.78 |
- |
1.39 |
++ |
1.79 |
+++ |
1.40 |
++ |
|
|
Примечание: в таблице представлены данные 6 экспериментов
«-» - отсутствие зоны гидролиза
«+» - минимальные размеры зон
«++» - незначительные зоны
«+++» - умеренные зоны гидролиза
«++++» - значительные размеры зон
Анализируя результаты, представленные в таблице 1, можно отметить, наиболее активно утилизируют хитозан 1.50, 1.65, 1.63, 1.74, 1.54, 1.13 штаммы. Штаммы 1.4, 1.23, 1.33, 1.45, 1.51, 1.56, 1.61, 1.76, 1.78, 1.64, 1.57, 1.52, 1.48, 1.47, 1.43, 1.24, 1.25, 1.26, 1.27, 1.28 активность не проявили.
Результаты эксперимента по определению хитиназной активности актиномицетов.
таблица 2
№№ штаммов |
Хитиназная Активность |
№№ штаммов |
Хитиназная Активность |
1.1 |
++++ |
1.41 |
++++ |
1.2 |
+++ |
1.42 |
++ |
1.3 |
+ |
1.43 |
+ |
1.4 |
++ |
1.44 |
++++ |
1.5 |
+++ |
1.45 |
+++ |
1.6 |
+ |
1.46 |
- |
1.7 |
+ |
1.47 |
+ |
1.8 |
++ |
1.48 |
+ |
1.9 |
++ |
1.49 |
+ |
1.10 |
+++ |
1.50 |
++++ |
1.11 |
+++ |
1.51 |
++ |
1.12 |
+++ |
1.52 |
++ |
1.13 |
+++ |
1.53 |
+++ |
1.14 |
- |
1.54 |
++++ |
1.15 |
++++ |
1.55 |
+++ |
1.16 |
++ |
1.56 |
+++ |
1.17 |
+++ |
1.57 |
++ |
1.18 |
++ |
1.58 |
++++ |
1.19 |
++ |
1.59 |
++ |
1.20 |
+++ |
1.60 |
+++ |
1.21 |
++++ |
1.61 |
++ |
1.22 |
++ |
1.62 |
++++ |
1.23 |
++ |
1.63 |
++ |
1.24 |
++ |
1.64 |
- |
1.25 |
++ |
1.65 |
+ |
1.26 |
- |
1.66 |
+++ |
1.27 |
++++ |
1.67 |
++ |
1.28 |
++ |
1.68 |
++ |
1.29 |
+++ |
1.69 |
++ |
1.30 |
++ |
1.70 |
+ |
1.31 |
++ |
1.71 |
++ |
1.32 |
++++ |
1.72 |
++ |
1.33 |
+++ |
1.73 |
+++ |
1.34 |
+++ |
1.74 |
++++ |
1.35 |
++++ |
1.75 |
++ |
1.36 |
+ |
1.76 |
+++ |
1.37 |
+ |
1.77 |
++ |
1.38 |
++++ |
1.78 |
++ |
1.39 |
+ |
1.79 |
+++ |
1.40 |
++ |
|
|
Примечание: в таблице представлены данные 6 экспериментов
«-» - отсутствие зоны гидролиза
«+» - минимальные размеры зон
«++» - незначительные зоны
«+++» - умеренные зоны гидролиза
«++++» - значительные размеры зон
Как видно из результатов, представленных в таблице 2, 4 штамма из 79 проявили хитиназную активность. Наибольшим уровнем активности обладали штаммы №№ 1.1, 1.15, 1.21, 1.27, 1.32, 1.35, 1.38, 1.41, 1.44, 1.50, 1.62, 1.74, 1.58, 1.54. Штаммы 1,14, 1.26, 1.46, 1.64 активность не проявили.
Выводы
В результате проверки коллекции актиномицетов на способность продуцировать хитинолитические ферменты было выявлено 6 штаммов (1.50, 1.65, 1.63, 1.74, 1.54, 1.13) проявивших высокую хитиназную активность и 14 штаммов (1.1, 1.15, 1.21, 1.27, 1.32, 1.35, 1.38, 1.41, 1.44, 1.50, 1.62, 1.74, 1.58, 1.54) характеризующиеся высоким уровнем хитозаназной активности.
Показано, что для штаммов 1.50, 1.54, 1.74 характерен высокий уровень продукции хитиназ и хитозаназ.