Изготовление гистологического препарата.

Процесс обработки материала для изготовления гистологических препаратов слагается из следующих этапов:

1. Взятие материала. Из органа вырезается кусочек, размеры которого не должны превышать 1 куб .см.

2. Фиксация материала. Фиксация проводится для того, чтобы остановить в тканях протекающие жизненные процессы и предупредить последующий их распад. Фиксирующие жидкости: 10-12% раствор формалина в воде (фиксировать от 3 часов до 1 суток и более).

3. Обезвоживание материала, обезжиривание и уплотнение его. Этот процесс осуществляется в спиртах возрастающей крепости и в растворах спирта с эфиром в следующей последовательности: зафиксированный кусоочек материала проводят через батарею спиртов: 5-. 70, 96 градусов (две порции), абсолютный спирт, абс. спирт + эфир) (две порции). В каждом отмеченном растворе кусочек находится не менее суток.

4. Заливка материала. Заливка производится в парафин, целлоидин или желатину. Наиболее распространенный способ заливки в целоидин. Для этого готовится раствор целлоидина разной консистенции (измельченная кинолента растворяется в смеси 100 спирта с эфиром в соотношении 1:1). Обезвоженный, уплотненный кусочек материала проводится в 3-х порциях целлоидина возрастающей крепости. В каждой порции раствора целлоидином кусочек материала переносят в плоскодонную чашку, которую до краев заполняют густым раствором целлоидина. В чашке кусочек органа, пропитанный целлодином, подсыхает до плотности рога и оказывается залитым в целлоидин. Залитый материал может долго храниться.

5. Приготовление гистологических срезов. Залитый в целлоидин кусочек материала наклеивают на блок (деревянный или стеклянный кубик), укрепляют на предметном столике микротома (микротом-прибор оснащенный бритвой для приготовления гистологических срезов) и бритвой производятся срезы, толщина которых не должна превышать 10-12 микрон. Каждый студент должен самостоятельно сделать 3-4 среза.

6. Окраска гистологических срезов. Различные тканевые элементы избирательно относятся к красителям, что, позволяет их дифференцирование окрасить. Ядра клеток прочнее окрашиваются основными красителями (гематоксилин, азур, кармин и др.). Цитоплазма красителя кислыми красителями (эозин, фуксин, аналин и др.).

7. Обезвоживание, просветление окрашенных срезов и заливка их в бальзам. Окрашенные срезы обезвоживают в 2-х порциях 96 спирта, просветляют в карболе-ксиоле. переносят посредством шпателя на предметное стекло, наносят на срез каплю бальзама и покрывают покровным стеклом.

Препарат готов для исследования может храниться долгое время.

Каждый студент должен самостоятельно в течение семестра освоить технику изготовления гистопрепаратов и приготовить к итоговому зачету по общей гистологии гистосрезы того или иного органа. Работа будет проводиться под руководством сотрудника в научной лаборатории кафедры морфологии.

2. Рецепт для самостоятельной краски гистопрепаратов.

1. Этап: Депапарафинирование срезов:

1. Ксилол –1 (бензол, толуол) - 2 мин - 4 мин

2. Ксилол-2 - 2 мин - 4 мин

3. Спирт- 1 (АБС) - 2 мин - 3 мин

4. Спирт 96% - 2 мин - 3 мин

5. Вода дистиллированная - 2 мин - 5 мин.

2. Этап: Окраска гистосрезов по методу гематоксилин Майера - эозин

1. Гематокеилин Майера - 2 мин

2. Вода водопроводная - 2 мин до 5 мин

3. Эозин - 2 мин

4. Вода дистиллированная. - 1 мин (сполоснуть)

5. Спирт 96° - 1 мин

6. Спирт .96° - 2 мин

7..Ксилол-1 - 2 мин

8. Ксилол –2 -2 мин

9. Заключить срез в бальзам.