- •Тема 1. Устройство светового микроскопа и правила работы с ним. Общая морфология клетки
- •Настройка и правила работы с микроскопом
- •Тема 2. Поверхностный аппарат клетки. Плазматическая мембрана, ее строение и свойства
- •Тема 3. Вакуолярная система клетки. Эндоплазматическая сеть, комплекс гольджи, лизосомы
- •Тема 4. Митохондрии
- •Тема 5. Опорно-двигательная система клетки
- •Тема 6. Клеточные включения
- •Тема 7. Особенности строения растительной клетки. Клеточная стенка, пластиды, вакуоли
- •Тема 8: форма и строение интерфазного ядра. Хроматин ядра, ядрышко
- •Тема 9. Репродукция клеток. Митоз, амитоз изучение митоза в клетках корешка лука (препарат 21)
- •Препараты
- •Микрофотографии
- •Литература
Тема 8: форма и строение интерфазного ядра. Хроматин ядра, ядрышко
ИЗУЧЕНИЕ ФОРМЫ ЯДЕР КЛЕТОК В МАЗКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (препарат 19)
(окрашено гематоксилин-эозином)
При малом увеличении в поле зрения мазка крови преобладают округло-овальные клетки, окрашенные эозином в розовый цвет. Это эритроциты. У млекопитающих, в том числе и у человека, зрелые клетки не содержат ядра. Среди большого числа эритроцитов следует найти ядросодержащие клетки крови - лейкоциты и рассмотреть их при большом увеличении.
Наиболее часто встречаются сегментоядерные нейтрофилы, имеющие темно-фиолетовое сегментированное на 3-5 долей ядро и слаборозовую мелкозернистую цитоплазму. Значительно реже встречаются эозинофилы, отличающиеся ярко выраженной оксифилией цитоплазмы. Ядро эозинофилов, как правило, имеет два, реже три сегмента. Еще реже можно увидеть базофилы, характеризующиеся крупнозернистой базофильной цитоплазмой и слабоокрашенным не полностью сегментированным ядром. Лимфоциты - клетки с крупным округлым ядром и небольшим ободком цитоплазмы. Вследствие сильной конденсации хроматина в ядрах лимфоцитов на препаратах они имеют интенсивную темно-фиолетовую окраску. Моноциты представляют собой крупные клетки с бобовидным бледно окрашенным ядром и серовато-голубой обширной зоной цитоплазмы.
ИЗУЧЕНИЕ ЯДЕР В КЛЕТКАХ ЛЕГКОГО (препарат 20)
( окраска на ДНК реактивом Шиффа по Фельгену)
ДНК хроматина можно идентифицировать с помощью метода, предложенного Фельгеном и заключающегося в специфической реакции альдегидных групп дезоксирибозы, освободившихся после мягкого гидролиза ткани, с реактивом Шиффа. Этот метод позволяет не только идентифицировать ДНК, но и представить внутриядерное распределение хроматина. При такой окраске хроматин ядра приобретает пурпурный или фиолетово-пурпурный цвет, тогда как цитоплазма остается бесцветной (концентрация митохондриальной ДНК слишком мала для проявления).
При малом увеличении на срезе легкого видны бронхи разного калибра, сосуды, заполненные эритроцитами, и межальвеолярные перегородки, разделяющие альвеолы. Стенка альвеолы наиболее удобна для рассмотрения ядер при большом увеличении. Клетки альвеолярного эпителия имеют довольно крупные овально-округлые ядра, окрашенные на препарате в пурпурный цвет. Структуру ядер клеток следует рассмотреть под иммерсионным объективом. Ядра клеток относительно светлые, так как основная масса хроматина в них тонкоструктурирована. Конденсированный гетерохроматин выявляется в виде интенсивно окрашенных глыбок.
Тема 9. Репродукция клеток. Митоз, амитоз изучение митоза в клетках корешка лука (препарат 21)
(окрашено железным гематоксилином)
В корешке лука при малом увеличении микроскопа можно различить три зоны: 1 (концевую часть, состоящую из тонкостенных клеток, слущивающихся на периферии) 2 ( зону деления клеток - меристему) и 3 ( зону роста, или растяжения, состоящую из вытянутых прямоугольных клеток). Деление клеток происходит только во второй зоне.
При большом увеличении следует детально рассмотреть клетки как неделящиеся, находящиеся в стадии интерфазы, так и клетки во всех стадиях митоза. В интерфазе клетки имеют прямоугольные очертания и четко обозначенную оболочку. Ядра округлой или овальной формы содержат мелкие глыбки хроматина и более интенсивно окрашенные в темный цвет 1-2 крупных ядрышка.
В ранней профазе в ядре еще хорошо заметны ядрышки и ядерная оболочка, а также более крупные, чем в интерфазе глыбки хроматина. Затем ядрышки и ядерная оболочка исчезают, и в результате конденсации ДНК появляется клубок сначала тонких, а позднее более толстых нитей хромосом. На препарате позднюю профазу можно идентифицировать по рыхлому клубку хромосом, свободно лежащих в цитоплазме клеток.
В метафазе хромосомы перемещаются в плоскость экватора клетки. В экваториальной пластинке хромосомы располагаются центромерными участками друг к другу, а плечи их обращены наружу. В результате они формируют фигуру, напоминающую звезду (материнская звезда). В метафазе завершается формирование митотического аппарата деления, который представлен микротрубочками, тянущимися от полюса к полюсу и от кинетохоров хромосом к полюсам. Следует заметить, что у высших растений митотический аппарат функционирует без участия центриолей, которые у них не обнаруживаются.
В анафазе происходит расхождение к полюсам половинок хромосом - хроматид, которые появились в результате репликации ДНК еще в синтетический период интерфазы. На полюсах хромосомы повернуты центромерными участками к полюсам, а их плечи обращены к центру клетки. Формируются, так называемые дочерние звезды, хорошо различимые на препаратах.
Телофаза начинается с деконденсации хромосом и продолжается до полной реконструкции ядра: восстановления ядерной оболочки и ядрышка и полной деконденсации хромосом.
Одновременно в центре клетки начинает образовываться перегородка, которая у растительных клеток растет от центра к периферии и делит клетку на две дочерние. Перегородку можно заметить, слегка опустив конденсор. У растительных клеток в отличие от животных образуется не перетяжка цитоплазмы, а именно перегородка, вследствие чего форма клеток всегда остается прямоугольной.
ИЗУЧЕНИЕ МИТОЗА В КЛЕТКАХ ПЕЧЕНИ АКСОЛОТЛЯ
(препарат 22)
(окрашено железным гематоксилином)
При рассмотрении препарата на малом увеличении микроскопа следует остановить внимание на краевой зоне среза печени аксолотля. В этой зоне, состоящей из 3-4 рядов клеток, можно увидеть фигуры митоза. В центральной зоне, представленной крупными клетками с округлыми интенсивно окрашенными ядрами, митотически делящихся ядер не обнаруживается. При большом увеличении в краевой зоне среза печени можно отыскать клетки в стадии интерфазы и на различных стадиях митоза.
ИЗУЧЕНИЕ ПРЯМОГО ДЕЛЕНИЯ (АМИТОЗА) В КЛЕТКАХ ДЕСЦИМЕТОВОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА ЛОШАДИ (препарат 23)
(окрашено гематоксилин – эозином)
В препарате, полученном путем отпечатывания внутренней стороны оболочки глаза на предметном стекле с его последующей фиксацией и окраской, видны крупные клетки. Это эпителиальные клетки, находящиеся в состоянии деления. Вокруг них сконцентрированы более мелкие клетки - лейкоциты.
При большом увеличении следует рассмотреть эпителиальные клетки. В них видны бледно - фиолетовые ядра со слабо различимыми ядрышками. В некоторых клетках обнаруживается два и больше ядер, имеющих различную форму и размеры. Двуядерные клетки появляются в результате амитоза - прямого деления клетки. В них ядра либо близко расположены друг к другу, либо уже отошли на некоторое расстояние. Это зависит от того, насколько далеко продвинулось деление клетки. Можно увидеть клетки с сильно вытянутыми и реже перешнурованными ядрами.
Прямое деление интерфазных ядер без равномерного распределения наследственного материала между дочерними клетками встречается, как правило, в старых или обреченных на гибель клетках.