Практическая работа № 2 (4 ч) Стерилизация и дезинфекция

Цель работы: Ознакомиться с методами стерилизации и способами дезинфекции лаборатории и лабораторного оборудования, применяемыми в микробиологических лабораториях различного профиля.

Оборудование и материалы: бактериологические петли, пастеровские пипетки, шпатели, этанол, спиртовки, сушильный шкаф, стеклопосуда, автоклав, различные среды, посуда, подготовленная для стерилизации, пористый фильтр, колба, водяная баня; химреактивы для приготовления дезинфектантов.

Стерильность - главнейшее требование при работе в микробиологической лаборатории, необходимое для выполнения практически всех микробиологических работ.

Методы стерилизации и используемое оборудование

Фламбирование - прокаливание бактериологических петель, пастеровских пипеток, шпателей на открытом огне, в частности на пламени спиртовки или газовой горелки. Продолжительность - произвольная.

Кипячение - Проводится в специальных стерилизаторах, не подвергающихся коррозии, в которые заливают кипяченую водопроводную воду или лучше дистиллированную с добавлением 1 % NaHCO₃. Стерилизуемые инструменты кладут на несколько слоев марли. Продолжительность стерилизации определяется степенью загрязнения и длится не более 10…40 мин.

Стерилизация в сушильном шкафу - Осуществляется при использовании сухого жара, образующегося путем нагрева воздуха до 140⁰С и выше в двустенном металлическом шкафу, покрытом теплоизоляционным материалом. Таким путем стерилизуют стеклянную посуду. Продолжительность зависит от степени нагрева - 2 ч при температуре 140⁰С, 45 мин - при 170⁰С.

Стерилизация автоклавированием - Осуществляется при использовании насыщенного пара под давлением в двустенном, герметически закрывающемся металлическом котле. Важнейшей частью такого котла является предохранительный клапан, который должен быть все время в исправности.

Стерилизация посуды, инструмента, сред, не содержащих органических соединений, проводится под давлением 1 атм (t ~ 121⁰С) в течение получаса, сред органического происхождения (во избежание карамелизации) - под давлением 0,5 атм (t ~ 112⁰C) в течение 15…20 мин, инфекционного материала и сред, приготовленных на основе сильно обсемененных микроорганизмами субстратов, в частности, на почвенном агаре или агаризованной почвенной вытяжке - под давлением 2 атм (t ~ 134⁰С) в течение 1…2 ч.

Тиндализация - дробная стерилизация. Осуществляется при температуре ниже 100⁰С текучим паром в аппарате Коха. С этой целью так же удобно использовать автоклав, крышка которого в этом случае не завинчивается, давление не повышается, и пар свободно выходит во внешнюю среду. Этим методом проводят стерилизацию питательных сахаросодержащих сред, свойства которых изменяются при более высоких температурах, а также стерилизацию материалов, содержащих споры, благодаря чему прорастающие споры последовательно погибают. Рекомендуемая продолжительность стерилизации - по часу в течение 3 дней (t ~ 70…80⁰С).

Фильтрование - Проводится путем создания вакуума ниже пористого фильтра, закрепленного на колбе, в которую, благодаря разрежению, проникают вирусы и фильтрующиеся бактерии.

Пастеризация - Нагревание обезвреживаемого материала при температурах 70… 90⁰С, в течение 30…15 мин соответственно. Метод позволяет освободиться только от вегетативных форм микроорганизмов.

Ультрастерилизация - Нагревание жидких пищевых продуктов при температуре 150⁰С в течение 1 сек в трубчатых аппаратах за счет введения в них химически чистого пара.