- •Место микробиологии и иммунологии в современной медицине. Роль отечественных ученых в развитии микробиологии, вирусологии иммунологии.
- •Основные этапы развития микробиологии и иммунологии. Работы л.Пастера, р. Коха и их значение для развития микробиологии и иммунологии.
- •Основные принципы классификации микробов.
- •Принципы классификации бактерий.
- •Принципы классификации грибов.
- •Принципы классификации простейших.
- •Принципы классификации вирусов.
- •(Морфология микробов)
- •Морфологические свойства бактерий.
- •Структура и химический состав бактериальной клетки. Особенности строения грамположительных и грамотрицательных бактерий.
- •Морфология грибов.
- •Морфология простейших.
- •Особенности морфологии вирусов.
- •Структура и химический состав бактериофагов.
- •Тинкториальные свойства бактерий. Методы окраски.
- •Методы микроскопии (люминесцентная, темнопольная, фазово-контрастная, электронная).
- •(Физиология микробов)
- •Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
- •Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение).
- •Типы и механизмы питания бактерий.
- •Основные принципы культивирования бактерий.
- •Искусственные питательные среды, их классификация. Требования, предъяв-ляемые к питательным средам.
- •Принципы и методы выделения чистых культур бактерий.
- •Ферменты бактерий.
- •Особенности физиологии грибов.
- •Особенности физиологии простейших.
- •Типы взаимодействия вируса с клеткой. Стадии репродукции вирусов.
- •Бактериофаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные и вирулентные бактериофаги. Лизогения.
- •Методы культивирования вирусов.
- •(Экология микробов. Влияние на микробы факторов окружающей среды)
- •Нормальная микрофлора организма человека и её значение.
- •Дисбиозы. Дисбактериозы.
- •Действие физических и химических факторов на микроорганизмы. Понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике и антисептике.
- •(Генетика бактерий. Основы биотехнологии)
- •Строение генома бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды изменчивости.
- •Механизмы передачи генетического материала у бактерий.
- •Внехромосомные факторы наследственности.
- •Мутации.
- •Генетика вирусов.
- •(Микробиологические основы химиотерапии)
- •Понятие о химиотерапии. История открытия химиопрепаратов.
- •Антибиотики. Природные и синтетические. История открытия природных антибиотиков.
- •Классификация антибиотиков по химической структуре, механизму, спектру и типу действия.
- •Механизмы лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней. Пути ее преодоления.
- •Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.
- •(Инфекция и иммунитет)
- •Понятие об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса.
- •Формы инфекции.
- •Стадии развития и характерные признаки инфекционной болезни.
- •Патогенность и вирулентность бактерий. Факторы патогенности.
- •Характеристика бактериальных токсинов.
- •Неспецифические факторы защиты организма.
- •Комплемент, его структура, функции, пути активации, роль в иммунитете.
- •Интерфероны, природа. Способы получения и применения.
- •Понятие об иммунитете. Виды иммунитета.
- •Структура и функции иммунной системы.
- •Иммунокомпетентные клетки. Т- и в-лимфоциты, макрофаги.
- •Иммуноглобулины, структура и функции.
- •Классы иммуноглобулинов, их характеристика.
- •Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной клетки.
- •Антителообразование: первичный и вторичный ответ.
- •Иммунологическая память. Иммунологическая толерантность.
- •Теории иммунитета.
- •Особенности противовирусного, противоопухолевого, трансплантационного иммунитета.
- •Понятие о клинической иммунологии. Иммунный статус человека и факторы, влияющие на него.
- •Оценка иммунного статуса: основные показатели и методы их определения.
- •Расстройства иммунной системы: первичные и вторичные иммунодефициты.
- •Аутоиммунные процессы.
- •(Реакции иммунитета)
- •Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение.
- •Реакция пассивной гемагглютинации. Компоненты. Применение.
- •Реакция преципитации. Механизм. Компоненты. Способы постановки. Применение.
- •Реакция связывания комплемента. Механизм. Компоненты. Применение.
- •Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Механизм. Способы постановки, применение.
- •Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, применение.
- •Иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.
- •Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных инфекций.
- •(Медицинские иммунобиологические препараты)
- •Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам.
- •Иммунные сыворотки. Классификация. Получение, очистка. Применение.
- •Антитоксические сыворотки. Получение, очистка, титрование. Применение. Осложнения при использовании и их предупреждение.
- •Препараты иммуноглобулинов. Получение, очистка, показания к применению.
- •Понятие об иммуномодуляторах. Принцип действия. Применение.
- •Интерфероны. Природа, способы получения. Применение.
- •Иммунотерапия и иммунопрофилактика инфекционных болезней.
- •(Частная микробиология)*
- •Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители эшерихиозов. Таксономия. Характеристика. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Микробиологическая диагностика эшерихиозов. Лечение.
- •Возбудители кишечного иерсиниоза. Таксономия. Характеристика. Микро-биологическая диагностика. Лечение.
- •Возбудители шигеллеза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители сальмонеллёзов. Таксономия. Характеристика. Микробиологический диагноз сальмонеллёзов. Лечение
- •Возбудители холеры. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Стафилококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых стафилококками. Специфическая профилактика и лечение.
- •Стрептококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
- •Менингококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
- •Гонококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика гонореи. Лечение.
- •Возбудитель туляремии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель сибирской язвы. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель бруцеллеза. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель чумы, таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель ботулизма. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель столбняка. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение
- •Возбудитель дифтерии. Таксономия и характеристика. Условно-патогенные коринебактерии. Микробиологическая диагностика. Выявление антитоксического иммунитета. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители коклюша и паракоклюша. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители туберкулеза. Таксономия. Характеристика. Условно-патогенные микобактерии. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- •Возбудитель сыпного тифа. Таксономия. Характеристика. Болезнь Брилля-Цинссера. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители хламидиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •Возбудитель сифилиса. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •Возбудитель лептоспирозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика. Лечение.
- •Возбудитель боррелиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика.
- •Микоплазмы и уреаплазмы. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •Синегнойная палочка. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
- •Классификация грибов. Характеристика. Роль в патологии человека. Лабораторная диагностика. Лечение.
- •Возбудители малярии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •Возбудитель амебиаза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическое лечение.
- •Возбудители орви. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель гриппа. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель полиомиелита. Таксономия и характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Возбудители гепатитов а, в и с Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Возбудитель клещевого энцефалита. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Возбудитель бешенства. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Возбудитель натуральной оспы. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика оспы.
- •Вирус кори. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Герпес-инфекция: таксономия, характеристика возбудителей. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Классификация и характеристика онкогенных вирусов.
- •(Санитарная микробиология)
- •Микрофлора воздуха и методы ее исследования. Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха.
- •Методы санитарно-бактериологического исследования воды. Показатели качества воды: микробное число, коли-индекс.
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы. Микробное число, коли-титр, перфрингенс-титр почвы.
Методы культивирования вирусов.
Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий — облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах.
Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.
Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.
Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей.
Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.
К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.
О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.
Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.
Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.
Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.
Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.
Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.
Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям.
Для получения чистых культур риккетсий, хламидий. и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках.
О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.
К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов.
Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки).
Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.