ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ ПО МИКРОБИОЛОГИИ
.pdfА |
Б |
В |
Рисунок 10 - Micrococcus luteus: А - схема расположения клеток в пространстве, Б – фотография полученная методом СЭМ, В - методом ФКМ
диплококки (лат. diploos - двойной) – бактерии, соединенные по две клетки;
A |
Б |
В |
Рисунок 11 - Neisseria meningitidis: А - схема расположения клеток в пространстве, Б – фотография полученная методом СЭМ, В - окраска по Граму
тетракокки (лат. tetra — четыре) – группируются по четыре клетки;
Рисунок 12 – Тетракокки
21
стрептококки (лат. streptos - цепь) – бактерии, образующие в результате деления клеток в одной плоскости разнообразной длины цепочки.
Рисунок 13 -Streptococcus mutans: А – схема расположения клеток в пространстве, Б – фотография полученная методом СЭМ, В – окрашенный препарат
сарцины (лат. sarceo - соединяю) – шаровидные бактерии, группирующиеся по 8 клеток. Располагаются они в виде куба, с каждой стороны которого по 4 клетки. Такая форма возникает в результате деления клетки в трех взаимно перпендикулярных плоскостях.
Рисунок 14 – Sarcina lutea: А – схема расположения клеток в пространстве, Б – фотография полученная методом СЭМ, В – окраска по Граму
стафилококки (лат. staphylo - гроздь) – клетки вследствие беспорядочного деления образуют скопления, напоминающие по внешнему виду гроздья винограда.
22
А |
Б |
В |
Рисунок 15 – Staphylococcus aureus (золотистый стафиллококк): А – схема расположения клеток в пространстве, Б – фотография полученная методом СЭМ, В – окраска по Граму
2. палочковидные, которые различаются по форме:
правильная (энтеробактерии (представители семейства
Enterobacteriaceae), псевдомонады (род Pseudomonas));
E.coli |
Salmonella typhimurium Pseudomonas aeruginosa |
Рисунок 16 – различные палочковидные бактерии, имеющие правильную форму
неправильная (коринебактерии (Corynebacterium)).
Рисунок 17 - Corynebacterium diphtheria: А – внешний вид клеток,
Б – фотография полученная методом ТЭМ, В – окраска по Граму
23
по размеру:
мелкие (бруцеллы (Brucella), бордетеллы (Bordetella)); средние (бактероиды (Bacteroides), кишечная палочка (E.coli); крупные (бациллы (Bacillus), клостридии (Clostridium));
по форме концов
обрубленные (бациллы); закругленные (сальмонеллы, псевдомонады); заостренные (фузобактерии); утолщенные (коринебактерии);
по характеру взаиморасположения все палочки делятся на:
расположенные одиночно; диплобактерии и диплобациллы (сцепленные попарно);
стрептобактерии и стрептобациллы (сцепленные в цепочку);
3. извитые формы - по характеру и количеству завитков они
делятся на:
вибрионы (слегка изогнутые палочки или неполные завитки);
Рисунок 18 – Вибрионы: Vibrio cholerae (А – ТЭМ, Б – окрашенный препарат, В – Vibrio fischeri (флуоресцентная микроскопия)
спириллы (один или несколько завитков); спирохеты, которые в свою очередь, делятся на:
лептоспиры (завитки с загнутыми крючкообразными концами - S-образная форма);
боррелии (4 -12 неправильных завитков);
24
трепонемы (14 -17 равномерных мелких завитков).
Leptospira interrogans |
Borrelia burgdorferi |
Treponema pallidum |
Рисунок 19 – Извитые формы бактерий
4.нитчатые формы, к которым относят актиномицеты
(Actinomycetales). Клетки актиномицетов обычно имеют вид длинных и ветвящихся нитей, напоминающих в ряде случаев мицелий одноклеточных грибов (т.н. «тонкий мицелий»). Нити мицелия имеют длину 100–600 мкм и толщину 0,2–1,2 мкм.
Actinomyces israeli |
Streptomyces sp. |
Рисунок 20 - Представители актиномицетов
Размеры бактерий в среднем составляют 0,5—5 мкм. Escherichia coli, например, имеет размеры 0,3—1 на 1—6 мкм, Staphylococcus aureus — диаметр 0,5—1 мкм, Bacillus subtilis — 0,75 на 2—3 мкм.
Крупнейшей из известных бактерий является Thiomargarita namibiensis, достигающая размера в 750 мкм (0,75 мм). Спирохеты могут вырастать в длину до 250 мкм при толщине 0,7 мкм. В то же время к бактериям относятся самые мелкие из имеющих клеточное
25
строение организмов. Mycoplasma mycoides имеет размеры 0,1—0,25 мкм.
Задание 4. Ознакомиться с микрофлорой полости рта.
Вся нормальная микрофлора человека подразделяется на резидентную (постоянную – автохтонную (облигатную), составляющую до 90% присутствующих в организме микробоорганизмов, факультативную (аллохтонную) — менее 9,5%) и транзиторную (случайную) — до 0,5 %. Около 20 % микроорганизмов от общего числа обитает в полости рта (более 200 видов), 18-20% приходится на кожные покровы, 15-16% — на глотку, а больше всего микроорганизмов (до 40%) — в желудочно-кишечном тракте.
Нормальная микрофлора организма начинает формироваться при рождении ребенка. В полости рта новорожденного она представлена лактобациллами, негемолитическими стрептококками и непатогенными стафилококками. Главными обитателями полости рта у взрослого человека являются бактерии преимущественно анаэробного типа дыхания (3/4 всех микробных видов), остальные виды представлены факультативными анаэробами. В ротовой полости самую большую группу бактерий составляют кокки.
Род Staphylococcus. Стафилококки в полости рта здорового человека встречаются в среднем в 30% случаев. В зубном налете и на деснах здоровых людей присутствуют в основном Staphylococcus epidermidis. У некоторых людей в полости рта могут обнаруживаться и Staphylococcus aureus. Обладая значительной ферментативной активностью, стафилококки принимают участие в расщеплении остатков пищи в полости рта.
Патогенные стафилококки, встречающиеся на слизистой носоглотки и в полости рта, являются частой причиной эндогенных инфекций, вызывая различные гнойно-воспалительные процессы полости рта.
26
Таблица 1 - Микробная флора полости рта в норме
|
Микроорганизмы |
|
|
|
В слюне |
|
Частота |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
обнаружения в |
|
|
|
|
Частота |
|
Количество в 1 |
|
|||
|
|
|
|
|
|
зубодесневых |
||||
|
|
|
|
обнару- |
|
мл |
|
|||
|
|
|
|
|
|
карманах, % |
||||
|
|
|
|
жения, % |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Резидентная флора |
|
|||||||
|
1. Аэробы и факультативные анаэробы: |
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
1. |
S. mutans |
|
100 |
|
1,5x105 |
|
100 |
|||
2. |
S. salivarius |
|
100 |
|
107 |
|
|
|
100 |
|
3. |
S. mitis |
|
100 |
|
106 -108 |
|
|
|
100 |
|
4. |
Сапрофитные |
|
100 |
|
105 -107 |
|
|
|
+ + |
|
нейссерии |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5. |
Лактобактерии |
|
90 |
|
103-104 |
|
|
|
+ |
|
6. |
Стафилококки |
|
80 |
|
103-104 |
|
|
|
+ + |
|
7. |
Дифтероиды |
|
80 |
|
Не определено |
|
|
+ |
||
8. |
Гемофилы |
|
60 |
|
Не определено |
|
|
0 |
||
9. |
Пневмококки |
|
60 |
|
Не определено |
|
|
Не определено |
||
10. Другие кокки |
|
30 |
|
102 -104 |
|
|
|
+ + |
||
11. Сапрофитные |
|
+ + |
|
Не определено |
|
|
+ + |
|||
микобактерии |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
12. Тетракокки |
|
+ + |
|
Не определено |
|
|
+ + |
|||
13. Дрожжеподобные |
|
50 |
|
102- 103 |
|
|
|
+ |
||
грибы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2. Облигатные анаэробы: |
|
||||||||
1. |
Вейллонеллы |
|
100 |
|
106 - 108 |
|
|
|
100 |
|
2. |
Анаэробные |
|
100 |
|
Не определено |
|
|
100 |
||
стрептококки |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3. |
Бактероиды |
|
100 |
|
Не определено |
|
|
100 |
||
4. |
Фузобактерии |
|
75 |
|
102 -103 |
|
|
|
100 |
|
5. |
Нитевидные бактерии |
|
100 |
|
102 -104 |
|
|
|
100 |
|
6. |
Актиномицеты |
|
100 |
|
Не определено |
|
|
+ + |
||
7. |
Спириллы и вибрионы |
|
+ + |
|
Не определено |
|
|
+ + |
||
8. |
Спирохеты |
|
+ |
|
Не определено |
|
|
100 |
||
|
|
Непостоянная флора |
|
|||||||
|
1. Аэробы и факультативные анаэробы: |
|
||||||||
1. Klebsiella |
|
15 |
|
10-102 |
|
|
|
0 |
||
2. |
Escherichia |
|
2 |
|
10-102 |
|
|
|
± |
|
3. |
Aerobacter |
|
3 |
|
10-102 |
|
|
|
0 |
|
4. |
Pseudomonas |
|
± |
|
Не определено |
|
|
0 |
||
7. |
Бациллы |
|
+ |
|
Не определено |
|
|
0 |
||
|
2. Облигатные анаэробы: |
|
||||||||
1. |
Clostridium putridium |
|
± |
|
Не определено |
|
|
0 |
||
|
|
27 |
|
|
|
|
|
|
Staphylococcus aureus |
Staphylococcus epidermidis |
Рисунок 21 – Представители рода Staphylococcus (окрашенные препараты)
Род Streptococcus. Стрептококки являются основными обитателями полости рта (в 1 мл слюны — до 108-1011 стрептококков). В окрашенных мазках стрептококки располагаются в виде цепочек, грамположительны. Большинство из них являются факультативными анаэробами или микроаэрофилами, но встречаются и строгие анаэробы (например, пептострептококки). Стрептококки сбраживают углеводы с образованием молочной кислоты, вызывая молочнокислое брожение. Кислоты, появляющиеся в результате брожения, подавляют рост ряда гнилостных микробов, встречающихся в полости рта. Колонизация оральными стрептококками различных участков ротовой полости имеет качественные и количественные вариации в зависимости от условий жизни. S.salivarius и S.mitis в 100% случаев присутствуют в полости рта. S.mutans и S.sanguis обнаруживаются в большом количестве на зубах, a S.salivarius — главным образом на поверхности языка.
28
Streptococcus mutans |
Streptococcus salivarius |
Рисунок 22 – Представители рода Streptococcus
Род Veillonella. Вейллонеллы — это мелкие грамотрицательные кокки, располагаются кучками, парами или короткими цепочками. Строгие анаэробы.
Рисунок 23 – Veillonella parvula (СЭМ и окрашенный по Граму препарат)
Род Neisseria. Нейссерии — грамотрицательные диплококки. Строгие аэробы. Нейссерии всегда в большом количестве встречаются в полости рта здоровых людей (до 1—3 млн. в 1 мл слюны).
В полости рта помимо кокков обитают разнообразные палочковидные формы бактерий. Род Fusobacterium включает более 10 видов, изолированных из ротовой полости человека и животных. Фузобактерии — грамотрицательные анаэробные палочки, в культуре
29
выглядят как прямые или искривленные палочки, короткие нити с заостренными концами, напоминающие веретено.
Лептотрихии (род Leptotrichia содержит один вид - Leptotrichia buccalis) имеют вид длинных нитей разной толщины с заостренными или вздутыми концами, дают густые сплетения, могут располагаться попарно в виде зернистых палочек. Лептотрихии присутствуют в полости рта постоянно (чаще у шейки зубов) в большом количестве (в 1 мл слюны 103104).
Рисунок 24 - Leptotrichia buccalis
Чтобы поселиться в полости рта, бактерии должны прикрепиться к зубам или к слизистой оболочке и за счет этого обеспечить себе устойчивость к току слюны. Адгезия опосредована адгезинами поверхности бактерий и рецепторами эпителиоцитов ротовой полости, структурами зубной эмали (рис. 25). Микробные адгезины состоят из полисахаридов, липотейхоевых кислот, а также могут быть представлены гликозилтрансферазами и белками, связанными с углеводами (лектины). Эти адгезины являются компонентами клеточной стенки или ассоциированы с такими структурами
30