- •Исследование клеточного цикла у людей, подвергшихся низкоинтенсивному хроническому радиационному воздействию
- •2012 Г. Содержание
- •Введение
- •1. Клеточный цикл
- •1.1. Стадии клеточного цикла
- •1.2. Фазы митоза
- •1.3. Методы изучения регуляции клеточного цикла
- •2. Регуляция клеточного цикла
- •2.1. Циклины и циклинзависимые киназы
- •2.2. Ингибиторы клеточного цикла
- •2.3. Контроль клетки за прохождением клеточного цикла
- •2.3.1. Объекты контроля и сверочные точки
- •2.3.2. Механизм остановки цикла
- •2.4. Датчики атм и атr
- •2.5. Чекпойнт-киназы Chk1 и Chk2
- •2.6. Белок Ki-67
- •3. Нарушения регуляции клеточного цикла и канцерогенез
- •4. Клеточный цикл и ионизирующее излучение
- •5. Проведение методики оценки задержки клеточного цикла лимфоцитов периферической крови методом проточной цитометрии
- •5.1. Выделение лимфоцитов периферической крови человека на градиенте фиколл-урографин
- •5.2. Культивирование лимфоцитов периферической крови человека
- •5.3. Анализ пролиферативной активности лимфоцитов с использованием набора Кi-67
- •5.4. Анализ проб на проточном цитометре
- •Заключение
- •Список использованной литературы
1.2. Фазы митоза
1) Профаза — в ядре клетки конденсируются хромосомы, поэтому они начинают обнаруживаться под световым микроскопом в виде нитчатых структур. При этом каждая хромосома содержит две прилегающие друг к другу хроматиды. что является результатом репликации хромосом S-периоде. я выявляется лишь и конце профазы. Но и в профазе сестринские хроматиды еще связаны друг c другом во многих местах с помощью белков когезинов.
Синтез РНК на хромосомах, естественно, полностью прекращается. Из-за инактивации рибосомных генов исчезают ядрышки. Постепенно разрушается ядерная оболочка:
- ядерная ламина (связанная с внутренней ядерной мембраной) разрушается путем деполимеризации составляющих ее промежуточных филамеитов,
- а сами ядерные мембраны (внутренняя и наружная) распадаются на мелкие пузырьки.
Аналогичный процесс происходит в цитоплазме: эндо-плазматическая сеть (ЭПС) и аппарат Гольджи тоже распадаются на везикулы. Две диплосомы (каждая из которых — это пара центриолей) постепенно расходятся к полюсам клетки и начинают участвовать в формировании веретена деления. Синтез белка на рибосомах значительно снижается (до 25 % от прежнего уровня).
б) Метафаза — хромосомы достигают максимальной степени конденсации и выстраиваются в экваториальной плоскости клетки, образуя метафазную пластинку хромосом, или материнскую звезду.митоза:
Постепенно в хромосомах разрушаются когезиновые комплексы между сестринскими хроматидами. К концу метафазы разделение хроматид завершается; они сохраняют только кажущуюся связь в области центромериых перетяжек.
Путем полимеризации белка тубулииа завершается формирование веретена деления. В его состав входят микротрубочкн трех видов:
- кинетохорные — связывают каждую хроматиду (отходя от ее кинетохоры. — специального белкового комплекса в области центромеры) с одной из днплосом;
- полярные — идут от одной из диплосом к центру веретена, где перекрываются с микротрубочками от другого полюса;
- астральные — направлены от диплосомы к поверхности клетки.
У дрожжей и других грибов ядерная оболочка в профазе митоза не разрушается. Так что митотическое веретено формируется внутри ядра (которое позднее расщепляется на два ядра).
в) Анафаза — это самая короткая стадия митоза. Хроматиды, сохраняя максимальную степень конденсации, теряют связь друг с другом и начинают расходиться к полюсам клетки. При этом они ориентированы центромерными участками к соответствующему полюсу, а теломерными - к экватору клетки.
Причем две хроматиды каждой хромосомы расходятся к противоположным полюсам. Поэтому обе дочерние клетки получают полные и равные наборы однохроматидных хромосом.
Движение хромосом обеспечивается несколькими факторами. С одной стороны, видимо, имеет значение изменение длины микротрубочек веретена деления:
-укорочение (разборка) кинетохорных микротрубочек и удлинение полярных микротрубочек (что ведет к расхождению самих полюсов).
С другой стороны, считается, что в процессе участвуют и белки транслокаторы:
- одни из них перемещают хромосомы вдоль кинетохорных микротрубочек,
- другие перемещают полярные микротрубочкн в стороны друг от друга.
г) Телофаза — каждый набор расходящихся однохроматидных хромосом, приблизившись к «своей» диплосоме, останавливается.
С хромосомами ассоциируют пузырьки, образовавшиеся в профазе из разрушенных ядерных мембран. В их стенки вновь встраиваются комплексы ядерных пор. Через последние в пузырьки проникают белки, формирующие промежуточные филамеиты, которые, в свою очередь, образуют ядерную ламину.
Благодаря этому пузырьки сливаются. Вначале они образуют двойную оболочку вокруг каждой хромосомы. Получаются своего рода мини-ядра, называемые кариомерами. Каждое из них сохраняет связь со «своей» диплосомой.
Позднее сливаются друг с другом сами кариомеры, связанные с одной и той же диплосомой. Таким образом образуются два дочерних ядра.
Хромосомы постепенно деконденснруются, и начинают формироваться ядрышки.
В поздней телофазе происходит цитотомия (иногда называемая цитокинезов) — разделение тела клетки между ядрами. Для этого по экватору клетки формируется актомиозиновое кольцо, которое постепенно сжимается, стягивая за собой плаз- 1 молемму и образуя перетяжку все уменьшающегося диаметра.
В конце концов получаются две дочерние клетки.
После цитотомии в клетках восстанавливаются эндоплазматическая сеть и аппарат Гольджи.