1.5 Наряду с белками и углеводами, компонентами живой клетки являются жирные кислоты и липиды.

Из растительного сырья жирные кислоты извлекают смесью хлороформ-метанол (2:1) или (1:1).

Для выделения суммы свободных жирных кислот спиртовый экстракт подвергают омылению при нагревании в колбе с обратным холодильником с избытком водного раствора щелочи. После омыления, образец нейтрализуют раствором соляной или серной кислот, дополнительно добавляют 3-5% водный раствор кислоты фосфорно-молибденовой. Сумму кислот отделяют центрифугированием или фильтрованием [200].

В растениях структурное многообразие жирных кислот обусловлено степенью и характером разветвления углеродной цепи, числом и положением двойных связей, природой и количеством других функциональных групп, длиной углеродной цепи.

Простейшими представителями класса «нормальных» или основных кислот являются пальмитиновая (16:0), стеариновая (18:0), лауриновая (12:0), миристиновая (14:0) и другие кислоты, которые в сумме кислот растительных липидов отнесены к минорным компонентам [235].

Жирные кислоты отдельных органов и тканей биосинтезируют или кумулируют в липидной фракции клеточных мембран строго специфические полиеновые кислоты, которые служат материалом образования простогландиноподобных веществ природного генеза. Простогландины - это, по существу, ненасыщенные высшие гидроксилированные жирные кислоты, с числом углеродных атомов в цепи 20, характеризующиеся наличием пентацикла в положении С_8-11.

Более ценные в биологическом отношении полиеновые высшие жирные кислоты с четырьмя, пятью и шестью двойными связями в изолированном положении в растениях встречаются в крайне низких, а иногда в следовых количествах [236-237].

Для разделения жирных кислот и их производных используются ТСХ на носителях, содержащих ион серебра, ГЖХ на жидких полярных фазах, ВЭЖХ на колонках с обращенной фазой.

Обычно жирные кислоты разделяют после их превращения в метиловые эфиры. Однако для идентификации неизвестных жирных кислот удобнее вначале разделить их на группы, одинаковые по степени ненасыщенности и геометрической конфигурации. Это осуществляется, в основном, ТСХ на носителях, содержащих ионы серебра. Этот метод основан на том, что между ионами серебра и двойными связями в углеводородной цепи образуется комплекс с обратимым переносом заряда, в результате чего происходит фракционирование смесей эфиров жирных кислот в соответствии с числом двойных связей в молекуле [200].

Разделение метиловых эфиров жирных кислот также осуществляется на колонках с силикагелем, пропитанным сульфаматом серебра. Элюирование, в этом случае, проводится смесью н-гексан-петролейный эфир-диэтиловый эфир-уксусная кислота (35:12:2:1) при температуре 12-15^оС. Сульфаминовая кислота не влияет на разделение липидов. Для разделения насыщенных и ненасыщенных жирных кислот используют хроматографию на колонках с кремниевой кислотой, пропитанной нитратом серебра. Недостаток таких колонок – их недолговечность.

ГЖХ – наиболее эффективный метод разделения сложных смесей жирных кислот; при этом существуют корреляции между временем удерживания и структурой жирной кислоты. Однако присутствие в смесях природных жирных кислот большого числа изомеров не позволяет провести полную идентификацию и разделение соединений, поэтому, предварительно, смеси хроматографируют на носителях, содержащих ионы серебра, а затем подвергают ГЖХ-анализу. Для более полной идентификации жирных кислот используют ГЖХ в сочетании с масс-спектрометрией.

Моно-, ди-, полиеновые жирные кислоты, как правило, разделяют на обычных колонках для ГЖХ, содержащих полярные жидкие фазы (10% EGSS-X, 10% DEGS, 10% TGS) или некоторые неполярные жидкие фазы (10% апиезона L) при постоянной температуре около 200^оС.

В настоящее время для разделения жирных кислот широко используется метод ВЭЖХ. Поскольку обнаружение по поглощению в УФ-области спектра не позволяет уловить малые количества жирных кислот, вначале используют метод получения производных с сильным поглощением в УФ-области. Среди таких производных наиболее часто используют фенациловые, нитробензоиловые и 2-нафтациловые эфиры. В качестве сорбентов часто используют лихросорб 10 RP-18 при элюировании ацетонитрилом, μ-бондапак С₁₈, порасил при элюировании смесью метанол-вода, ацетонитрилом, лихросорб хибар –II RP-8 в сочетании с элюирующей смесью тетрагидрофуран-ацетонитрил-вода (3:67:30) [200, 238-240].

Предельные и непредельные высшие жирные кислоты играют важную роль в живой природе. Они входят в состав глицеридов, образующих основу клеточных мембран, поэтому их следует классифицировать как биологически важные соединения, причем установлено, что большую биологическую активность проявляют не отдельные липиды, а весь комплекс липидов растений, хотя каждый из классов липидной фракции проявляет какую-либо биологическую активность.

Непредельные алифатические кислоты – линолевая, линоленовая и арахидоновая, освобождаясь из состава глицеридов и подвергаясь действию окислительных ферментов, дают начало последовательным реакциям, которые приводят, в конечном счете, к гидроксилированным непредельным соединениям с высокой биологической активностью [241].

Высшие полиненасыщенные жирные кислоты положительно влияют на функцию печени, миокарда, фибринолитическую активность крови, определенное цитостатическое и, особенно, гипохолестеринемическое действие [242-246].

Физиологическая активность полиненасыщенных высших жирных кислот возрастает с увеличением их ненасыщенности. Известно, что гипохолестеринемическое действие арахидоновой кислоты, имеющей четыре двойные связи в изолированном положении, в среднем, в 3,5 раза превосходит действие линолевой кислоты, имеющей только две двойные связи, а аналогичная активность докозагексановой кислоты, с шестью изолированными двойными связями, почти в пять раз выше. Особенно благоприятный эффект на функцию сосудов и печени, а также на уровень холестерина в крови проявляется при совместном воздействии арахидоновой и гексаеновой кислот. Именно это и обусловило внедрение в медицинскую практику препаратов высших жирных кислот, обычным источником которых являются животные и растительные жиры [237, 241-244].

Незаменимые жирные кислоты: олеиновая, линолевая, линоленовая не синтезируются в организме животного и человека, а поступают с пищей и являются исходным продуктом для синтеза арахидоновой кислоты, недостаток которой приводит к целому ряду нарушений: дерматоз, экзема, ломкость и выпадение волос, хрупкость и расслоение ногтей, снижение остроты зрения, нарушение функций почек и другое [118].