- •Руководство для студентов к практическим занятиям по микробиологии
- •Этапы приготовления препарата
- •Алгоритм приготовления мазка
- •Способ грама
- •Правила иммерсионной микроскопии
- •Диагностика туберкулеза легких бактериоскопическим методом
- •Метод циля-нильсена (инструкция 1999год)
- •Метод циля-нильсена
- •Обнаружение капсул по методу бурри
- •Окраска по методу ожешко
- •Метод раздавленной капли
- •Метод висячей капли
- •2009 Год
Этапы приготовления препарата
Приготовление мазка
Высушивание
Фиксация
Окрашивание
Алгоритм приготовления мазка
из культуры, выращенной на скошенном агаре(«косячке»)
Предметное стекло аккуратно берут за ребро и с обратной стороны нанесения мазка наносят его границы и номер культуры
Зажигают спиртовку, горелку, предварительно выпустив пары спирта
Фламбируют поверхность стекла, где будет располагаться мазок
Стекло помещают вблизи спиртовки на чашку Петри
В левую руку берут пробирку со стерильным физическим раствором (дистиллированной водой) и помещают между 1 и 2 пальцами таким образом, что ладонь находится под пробиркой и горлышко пробирки направлено в зону спиртовки
В правую берут бактериальную петлю, как карандаш
Петлю фламбируют до покраснения сначала горизонтально, затем вертикально (рис. №1)
Не выпуская петли, мизинцем правой руки прижимают пробку физ.р-ра к ладони и осторожно вынимают е из пробирки. Движения должны быть плавными
Горло пробирки обжигают в пламени и вводят петлю
Берут выпускной петлей физ. р-р и выносят на стекло пару капель в границы мазка
Закрывают пробку, предварительно проведя через пламя спиртовки пробку и горло пробирки одновременно
Ставят пробирку в штатив
В левую руку берут пробирку с культурой и помещают, как и пробирку с физ. р-ром (см. пункт №5), петля в правой руке
Петлю фламбируют
Над пламенем спиртовки спокойно вынимают пробку с культуры (см. пункт №8), одновременно обжигая пробку и горло пробирки
Вводят в пробирку петлю, охлаждая ее о стенки пробирки
Осторожно закрывают и захватывают петлей культуру, не повреждая агара, и вынимают петлю, не касаясь ею стенок пробирки
Петлю с культурой вносят в каплю физ. р-ра и осторожно эмульгируют, незаходя за границы мазка
Бактериальную петлю с остатками культуры прожигают до покраснения в пламени спиртовки
Прожигают горло пробирки пробку в пламени, одновременно. Закрывают пробирку.
Пробирку с культурой и петлю ставят в штатив
Приготовленный мазок высушивают либо на воздухе либо высоко над пламенем спиртовки
Примечание:
Приготовление мазка из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, не требует использования физ. р-ра. Мазок готовят согласно пунктам №13 -№22
При приготовлении мазка из культуры, выросшей на чашке Петри необходимо:
отметить изолированную колонию со стороны дна чашки
чашку берут в левую руку и в сторону спиртовки приоткрывают крышку, придерживая ее 1и 2 пальцами левой руки
прокаленную петлю вводят под крышку чашки, остужая ее о крышку
осторожно откалывают часть выделенной колонии и, не задевая края чашки, выносят на стекло с физ. р-ром
дальнейшие манипуляции согласно пунктам №18, 19, 21, 22
При подсушивании мазка следует помнить: высокая температура может нарушить структуру клетки
Рис. №1. Схема приготовления мазка
Виды фиксации
Физический – в пламени спиртовки
Химический – в растворах спирта, ацетона, смеси Никифорова (1:1 спирт и эфир)
Цели фиксации
Обеззараживание патогенных микробов
Закрепление клеток на стекле
Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители