2.3.1.4. Определение концентрации цитокинов в сыворотке

Проводили на планшетном фотометре «Multiscan plus» (Labsystems, Финляндия) при длине волны 450 нм с применением тест-систем (таблица 1).

Таблица 1

Характеристика тест-систем для определения цитокинов

Тест-система	Название	Произво-дитель	Чувствительность	Интер- Вал
INF-γ, пг/мл	Гамма – интерферон – ИФА-БЕСТ для определения в биологических жидкостях	«Вектор-Бест», Новосибирск	2	20-1000
IL-1β, пг/мл	ИЛ - 1бета – ИФА – БЕСТ (А-8766) для определения в биологических жидкостях	«Вектор-Бест», Новосибирск	1	0– 250
IL-4, пг/мл	ИЛ – 4 – ИФА – БЕСТ для определения в биологических жидкостях	«Вектор-Бест», Новосибирск	2	0–400
TGF-β1, пг/мл	Трансформирующий фактор роста - β1	«Bender Medsystems», Австрия	2	31,2-2000
EGF,пг/мл	Эпидермальный фактор роста	«Biosource» (США)	1	3,9-250

2.3.2. Морфологические методы исследования

Морфологическое определение апоптоза лимфоцитов проводили методом суправитальной окраски клеток ядерным флюоресциирующим красителем «Hoeсhst 33342» с последующим морфологическим учетом на микроскопе «ЛЮМАМ-АИ1» (Россия) при длине возбуждения 360 нм и эмиссии 470 нм. Подсчитывали % лимфоцитов, имеющих выраженную фрагментацию хроматина.

Методы оценки состояния ожоговой раны. Для оценки состояния дефекта кожи после ТТ исследовали его дно, края, окружающую кожу, а также характер грануляционной ткани в дне, наличие налетов и их характер (фибринозные, гнойные); наличие краевой и очаговой эпителизации; наличие отделяемого; отёк; состояние окружающей кожи. Наиболее важным показателем заживления ожоговой раны является ее эпителизация. Для оценки динамики эпителизации измеряли площадь раневого дефекта методом контактной планиметрии с использованием прозрачной полиэтиленовой пленки, которую предварительно подвергали антисептической обработке. Пленку накладывали во время перевязки, обводили контур дефекта на пленке маркером. В дальнейшем сопоставляли пленку с листом миллиметровой бумаги и, перенося контур, подсчитывали площадь дефекта. Планиметрическое исследование выполнялось на 1, 3, 7, 14, 21, 28 сутки после термической травмы.

Скорость эпителизации (VS ) рассчитывалась по формуле :

VS = S − S_n / t, где

S — начальная площадь раны до лечения (в дальнейшем, площадь при предыдущем измерении); S_n — площадь при последующем измерении;

t — число дней между измерениями [4].

При этом площадь раны в последующих измерениях определяли в %, принимая за 100% площадь ожоговой раны до лечения, результат выражали в % за сутки.

Для гистологического исследования кусочки кожи забирали в 10% нейтральный формалин, затем его обезвоживали и заливали в парафин по общепринятой методике. С парафиновых блоков изготавливали срезы толщиной 5мкм. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином для обзорной микроскопии. Микроскопическое изучение гистологических срезов проводили на микроскопе «Leika DMRXA» (Германия). Морфометрические исследования осуществляли с помощью компьютерной программы анализа изображений «Image Scope M» (Россия, Москва), проводящий цифровые преобразования изображения гистологических структур и компьютеризированный подсчет параметров выбранных объектов. Морфометрически были оценены высота эпителиального слоя, количество клеток в нем, клеточный состав инфильтрата дермы.