3. Особенности транскрипции у эукариот.
У эукариот существуют специализированные РНК-полимеразы. В ядре выделяют 3 типа РНК-полимераз,которые сост.из большого количества полипептидных субединиц. РНК-полимераза I – синтезирует 18S,58S,28S Ррнк-транскрипция в ядрышках. РНК-полимераза II - синтезирует mРНК и некоторые sPHK. РНК-полимераза III - синтезирует tPHK, некоторые sPHK и 5SrPHK.омимо ядерных РНК-полимераз у эукариот есть еще РНК-полимеразы хлоропластов и митохондрий. Они кодируются в ядре, а не в соответствующих органеллах.
В органеллах образуются свои tPHK, rРНК и рибосомные белки.Единицей транскрипции у эукариот является отдельный ген, а не оперон, как у прокариот.
Оператор, как таковой, отсутствует. Промотор есть, но он организован иначе.
На расстоянии -25 п.н. от +1 нукл. находится ТАТА-бокс. Его позиция определяет точку инициации транскрипции.А на расстоянии -60-80 п.н. находится ЦААТ-бокс,Помимо этих есть еще несколько белков, называемых факторами транскрипции..факторы транскрипции - белки, необходимые для инициации транскрипции.они необходимы для инициации транскрипции всеми тремя ядерными РНК-полимеразами.
Для любого гена, кодирующего белок, есть энхансеры (усилители).Кроме энхансеров есть сайленсеры (ослабители). сайленсеры – последовательности ДНК, ослабляющие транскрипцию при взаимодействии с белками.При соответствующем наборе белков экспрессия отдельных генов в клетке может быть подавлена.
4. Строение промоторов прокариот и эукариот.
Типичный промотор прокариот имеет три основных компонента: точку старта транскрипции, выше нее, примерно на 10 нуклеотидов располагается бокс Прибнова 5’-ТАТАТТ-3’, и в положении -35 вторая консервативная последовательность ТГАЦ
Промотор РНК полимеразы II эукариот имеет большую протяженность и более сложное строение. ТАТА-бокс (первый промоторный элемент) отделен от стартовой точки транскрипции приблизительно на 25 пар нуклеотидов, а вторая промоторная последовательность – СААТ-бокс – примерно на 40 (иногда до 120) пар от него. В промоторе содержатся и другие регуляторные участки, с которыми взаимодействуют разнообразные регуляторные факторы.
5.Активация аминокислот при биосинтезе белка
Необходимым условием синтеза белка, который в конечном счете сводится к полимеризации аминокислот, является наличием в системе не свободных, а так называемых активированных аминокислот, располагающих своим внутренним запасом энергии. Активация свободных аминоксилот осуществляется при помощи специфических ферментов аминоацил -тРНК-синтетаз в присутствии АТФ. Этот процесс протекает в 2 стадии:
Обе стадии катализируются одним и тем же ферментом. На первой стадии аминокислота реагирует с АТФ и образуется пирофосфат и промежуточный продукт, который на второй стадии реагирует с соответствующей 3-ОН-тРНК, в результате чего образуется аминоацил -тРНК и освобождается АМФ. Аминоацил-тРНК располагает необходимым запасом энергии.
Аминокислота присоединяется к концевому 3-ОН-гидроксилу АМФ, который вместе с двумя остатками ЦМФ образует концевой триплет ЦЦА, являющийся одинаковым для всех транспортных РНК. ИЛИ Генетическая информация, закодированная в ДНК с помощью 4-х нуклеотидов (четырехбуквенного алфавита), в процессе биосинтеза белка переводится в последовательность аминокислот белков (двадцатибуквенный алфавит) с помощью молекул-адапторов («переводчиков») тРНК. Каждая из 20 аминокислот, входящих в состав белков,должна присоединится к своей тРНК. Эти реакции протекают в цитозоле и катализируются двадцатью ферментами АРСазами (аминоацил-тРНК-синтетазами). Каждый фермент имеет двойное сродство: к «своей» аминокислоте и к соответствующей ей тРНК (одной или нескольким). Для активации используется энергия АТФ.
Процесс состоит из двух стадий, протекающих в активном центре фермента. На первой стадии в результате взаимодействия аминокислоты и АТФ образуется аминоациладенилат, на второй – аминоацильный остаток переносится на соответствующую тРНК.Эфирная связь между аминоацилом и тРНК является высокоэнергетической, энергия используется в синтезе пептидной связи.
Так образуются в цитоплазме клетки все необходимые для биосинтеза белка активированные аминокислоты, соединенные с соответствующими им адапторами − разнообразные аминоацил-тРНК (аа-тРНК ). Они используются в белковом синтезе на стадиях инициации и элонгации.