125. Формы существования вирусов. Морфология и биохимическая структура вирионов. Структура, свойства и функции нуклеиновых кислот, белков, углеводов, липидов вирионов. Прионы.

Формы существования вирусных молекул:

а) внеклеточная (элементарные частицы, вирусные частицы, вирионы) – корпускулярные частицы сферической, кубической, нитевидной формы. Размеры: 15-30 до 200-500 нм. Обладают скрытой инфекциозностью.

б) внутриклеточная – репродуцирующая, вегетативная форма. Тесна связана с генетическим аппаратом и метаболизмом кл. Проявляет патогенность.

в) интегрированная с клеточным геномом - провирус

Вирусы: 1) инфекционные с автономной репликацией нуклеиновых к-т и продукцией вирионов (продуктивная инфекция) 2) интеграционные вирусы, способные интегрироваться с геномом кл и утрачивающие способность вызывать продуктивную инфекцию.

Структурная организация вирионов простая, органеллы отсутствуют, у многих нет даже ферментов, различают вирионы а) простые – нуклеиновая к-та, окруженная снаружи белковой оболочкой – капсидом б) сложные – имеют дополнительно внешнюю оболочку – суперкапсид (пеплос).

Структура и химический состав простых вирионов.

В основном состоят только из капсидных белков (1-3 вирусоспецифических белка), у некоторых содержатся также терминальные, ковалентно связанные с концом вирионной НК белки, участвующие в регуляции вирусного генома.

Капсид имеет строго упорядоченную структуру, в основе которой принципы а) спиральной (вирусы растений) – у палочковидных и нитевидных вирионов б) кубической (большинство патогенных для ч-ка вирусов) – у сферических вирионов или в) смешанной симметрии. Капсид спиральной симметрии: капсомеры уложены в виде спирали вокруг оси, кубической симметрии: в основе – фигура икосаэдра. Формирование нуклеокапсидов происходит самопроизвольно.

Структура и химический состав сложных вирионов.

Имеют много разновидностей белков (кроме капсидных и геномных также ферменты транскрипции и репликации вирусного генома и т.д.). Цикл образования сложных капсидов носит многоступенчатый характер.

В суперкапсиде – липидном бислое – превалируют гликопротеиды, часто образующие поверхностные «шипы». Функции гликопротеидов: 1) прикрепительные белки – распознают специфические клеточные рецепторы и взаимодействуют с ними 2) белки слияния – обуславливают проникновение вируса в кл, инициируя слияние его с мембранами кл. Кол-во углеводов в гликопротеидах – до 10% общей массы вириона. Углеводы гликопротеидов обеспечивают сохранение конформации белка и его устойчивость к протеазам. Липиды суперкапсида в основном представлены фосфолипидами (2/3) и холестеролом (1/3), также являются стабилизаторами, поэтому обработанные эфиром, дезоксихолатом, детергентами вирионы распадаются и утрачивают инфекциозность. Липидно-углеводные компоненты суперкапсида клеточного происхождения (включаются из плазматических мембран при отпочковывании от них вирусов).

Т.о., по хим. структуре все вирусы – нуклеопротеиды, а по организации – простые и сложные.

Прионы – белковые молекулы определенной структуры, способные индуцировать деструктивные процессы в кл организма человека и животных. Отсутствие в составе прионов нуклеиновых кислот определяет необычность некоторых из свойств: устойчивость высоким температурам, ионизирующей радиации, УФ, но чувствительны к фенолу и детергентам при нагревании. Ген, кодирующий прионовый белок, находится не в составе приона, а в клетке. Прионовый белок, попадая в организм, активирует этот ген и вызывает индукцию синтеза аналогичного белка. Вместе с тем прионы (необычными вирусами) обладают рядом свойств обычных вирусов: 1) проходят через бактериальные фильтры б) не размножаются на искусственных питательных средах 3) репродуцируются до концентраций 105—1011 на 1 г мозговой ткани 4) адаптируются к новому хозяину 5) изменяют патогенность и вирулентность 6) воспроизводят феномен интерференции 7) обладают штаммовыми различиями и способностью к персистенции в культуре клеток, полученных из органов зараженного организма 8) могут быть клонированы.

Персистируют в организме ч-ка длительное время, не вызывают ГИО и КИО, не являются индукторами ИФН и не чувствительны к нему. Являются возбудителями медленных инфекций, существуют в двух формах: нормальной (являются естественным компонентом кл здорового организма, принимают участие в механизме старения мозга и нервной системы) и патогенной.

Инфекции, вызываемые прионами: Куру ( “хохочущая смерть”), болезнь Крейтуфельда-Якоба, болезнь Геротнера-Штреуспера, амиотрофический лейкоспонгиоз.

Существует мнение, что вирусы и прионы имеют большое значение в процессе старения, которое происходит при ослаблении иммунитета.

Структурно-функциональная организация генома вирусов.

Геном вируса гаплоидный, т.к. представлен одним набором генов. Частично диплоидны ДНК-содержащие вирусы с повторяющимися последовательностями. Полностью диплоидны ретровирусы, геном которых содержит две идентичные молекулы РНК.

Считывание информации с оперона вирусов регулируется энхансером (усилитель транскрипции), промотором (инициирует транскрипцию), оператором и терминатором. В структурных генах имеются экзоны (несут информацию) и интроны (некодируемые вставочные последовательности, вырезаемые посредством сплайсинга).

Экономия генетического материала вирусов достигается:

1. вирусные иРНК могут направлять синтез двух-трех белков (за счет двухкратного считывания одной и той же РНК с находящихся в ней в разных участках двух-трех инициирующих кодонов АУГ)

2. сдвига рамки считывания на один или два кодона при транскрипции

3. трансляция гигантских полипептидов-предшественников с последующих их нарезанием на более мелкие.

Общий механизм реализации генетической информация:

Существует несколько путей реализации генетической информации: 1) ДНК  иРНК  белок (как в кл) 2) +РНК  белок 3) –РНК  иРНК  белок 4) РНК  ДНК  иРНК  белок (позитивный геном с наличием обратной транскриптазы) 5) одноцепочечная ДНК  промежуточный двухцепочечный ДНК-транскрипт иРНК  белок (у парвовирусов).

Вирусные ДНК:

Молекулярная масса примерно в 10-100 раз меньше, чем у ДНК бактерий. В геноме до нескольких сотен генов. ДНК могут быть однинитевыми или двунитевыми, кольцевыми или линейными, цельными или с «разрывом-дефектом» в одной цепи, на концах находятся инвертированные последовательности, функциональное назначение которых: 1) маркеры, позволяющие отличать вирусную ДНК от клеточной 2) способность замыкаться в кольцо.

Вирусные РНК:

могут быть однонитевыми или двунитевыми, кольцевыми или линейными, фрагментированными (РНК гриппа) или нефрагментированными (РНК парамиксовирусов). В составе однонитевых РНК часто имеются спиральные участки типа двойной спирали ДНК.

Группы однонитевых РНК в зависимости от их функций: а) плюс-нить (позитивный геном) – РНК, выполняющие функцию иРНК. Имеют модифицированные концы в виде «шапочки» для прикрепления рибосом б) минус-нить (негативный геном) – РНК, служащие матрицей для образования иРНК. Некоторые вирусы могут содержать и плюс, и минус нити РНК (амбисенсвирусами).

У двунитевых ДНК- и РНК-содержащих вирусов информация обычно записана в одной цепи и лишь у некоторых для хранения информации используется вторая цепь (экономия ген. материала).

Геномная РНК ретровирусов, имеющих в своем составе обратную транскриптазу (РНК-зависимую ДНК-полимеразу), относятся к плюс нитевым, т.к. иРНК у них синтезируется по схеме РНК  одна нить ДНК  вторая нить ДНК  интеграция в клеточный геном  иРНК и она не просто комплементарна геномной, а полностью гомологична ей.

Вирусные белки.

а) структурные – входят в состав вирусного капсида: капсидные белки, белки, несущие «адресную функцию» и узнающие рецепторы кл хозяина, белки адсорбции вирусов на поверхности кл, защитные белки и т.д. Особенность капсидных белков: строго упорядоченная структура, обеспечивающая построение капсида из субъединиц-капсомеров, состоящих из идентичных полипептидных цепей, способных к самосборке.

Внешняя оболочка сложных вирионов состоит из белков, входящих в состав гликолипидов и гликопротеидов. Гликопротеиды обладают антигенными свойствами и ответственны за адсорбцию на специфических рецепторах кл. Гликолипиды стабилизируют структуру вирионов. Липидный и углеводный состав сложного вириона определяется кл хозяина, но модифицируется суперкапсидными белками.

б) функциональные – ферменты, участвующие в репродукции вирусов:1) ферменты репликации и транскрипции, 2) ферменты, участвующие в проникновении вирусной НК в кл хозяна и выходе образовавшихся вирионов из нее (нейраминидаза, лизоцим).

Ферменты вирусов: а) вирионные – ферменты транскрипции и репликации (ДНК- и РНК-полимеразы), обратная транскриптаза ретровирусов, экзо- и эндонуклеазы, АТФаза и т.д. б) вирусиндуцированные – структура которых закодирована в вирусном геноме – РНК-полимеразы пикорна-, тога-, орто- и парамиксовирусов, ДНК-полимераза покс- и герпесвирусов в) клеточные ферменты, модифицируемые в процессе репродукции вируса.

126. Типы взаимодействия вируса с клеткой. Различают три типа взаимодействия вируса с клеткой: продуктивный, абортивный и ин-тегративный.

Продуктивный тип — завершается обра­зованием нового поколения вирионов и ги­белью (лизисом) зараженных клеток (цитоли-тическая форма). Некоторые вирусы выходят из клеток, не разрушая их (нецитолитическая форма).

Абортивный тип — не завершается обра­зованием новых вирионов, поскольку инфек­ционный процесс в клетке прерывается на одном из этапов.

Интегративный тип, или вирогения — характеризуется встраиванием (интеграцией) вирусной ДНК в виде провируса в хромосому клетки и их совместным сосуществованием (совместная репликация).

Репродукция вирусов осуществляется в несколько стадий, последовательно сменяющих друг друга: адсорбция вируса на клетке; проникновение вируса в клетку; «раздевание» вируса; биосинтез вирусных компонентов в клетке; формирование вирусов; выход вирусов из клетки.

Адсорбция. Взаимодействие вируса с клеткой начинается с процесса адсорбции, т. е. прикрепления вирусов к поверхности клетки. Это высокоспецифический процесс. Вирус адсорбирует­ся на определенных участках клеточной мембраны — так назы­ваемых рецепторах. Клеточные рецепторы могут иметь разную хи­мическую природу, представляя собой белки, углеводные ком­поненты белков и липидов, липиды. Число специфических ре­цепторов на поверхности одной клетки колеблется от 10⁴ до 10⁵. Следовательно, на клетке могут адсорбироваться десятки и даже сотни вирусных частиц.

Проникновение в клетку. Существует два способа проникнове­ния вирусов животных в клетку: виропексис и слияние вирусной оболочки с клеточной мембраной. При виропексисе после адсорб­ции вирусов происходят инвагинация (впячивание) участка кле­точной мембраны и образование внутриклеточной вакуоли, ко­торая содержит вирусную частицу. Вакуоль с вирусом может транс­портироваться в любом направлении в разные участки цитоплаз­мы или ядро клетки. Процесс слияния осуществляется одним из поверхностных вирусных белков капсидной или суперкапсидной оболочки. По-видимому, оба механизма проникновения вируса в клетку не исключают, а дополняют друг друга.

«Раздевание». Процесс «раздевания» заключается в удалении защитных вирусных оболочек и освобождении внутреннего ком­понента вируса, способного вызвать инфекционный процесс. «Раздевание» вирусов происходит постепенно, в несколько этапов, в определенных участках цитоплазмы или ядра клетки, для чего клетка использует набор специальных ферментов. В случае проникновения вируса путем слияния вирусной оболочки с кле­точной мембраной процесс проникновения вируса в клетку со­четается с первым этапом его «раздевания». Конечными продук­тами «раздевания» являются сердцевина, нуклеокапсид или нук­леиновая кислота вируса.

Биосинтез компонентов вируса. Проникшая в клетку вирусная нуклеиновая кислота несет генетическую информацию, которая успешно конкурирует с генетической информацией клетки. Она дезорганизует работу клеточных систем, подавляет собственный метаболизм клетки и заставляет ее синтезировать новые вирус­ные белки и нуклеиновые кислоты, идущие на построение ви­русного потомства.

Реализация генетической информации вируса осуществляет­ся в соответствии с процес­сами транскрипции, трансляции и репликации.

Формирование (сборка) вирусов. Синтезированные вирусные нуклеиновые кислоты и белки обладают способностью специфи­чески «узнавать» друг друга и при достаточной их концентра­ции самопроизвольно соединяются в результате гидрофобных, со­левых и водородных связей.

Существуют следующие общие принципы сборки вирусов, имеющих разную структуру:

1. Формирование вирусов является многоступенчатым процессом с образованием промежуточных форм;

2. Сборка просто устроенных вирусов заключается во взаимодей­ствии молекул вирусных нуклеиновых кислот с капсидными белками и образовании нуклеокапсидов (например, вирусы полиомиелита). У сложно устроенных вирусов сначала форми­руются нуклеокапсиды, с которыми взаимодействуют белки суперкапсидных оболочек (например, вирусы гриппа);

3. Формирование вирусов происходит не во внутриклеточной жидкости, а на ядерных или цитоплазматических мембранах клетки;

4. Сложно организованные вирусы в процессе формирования включают в свой состав компоненты клетки-хозяина (липиды, углеводы).

Выход вирусов из клетки. Различают два основных типа выхо­да вирусного потомства из клетки. Первый тип — взрывной — характеризуется одновременным выходом большого количества вирусов. При этом клетка быстро погибает. Такой способ выхода характерен для вирусов, не имеющих суперкапсидной оболочки. Второй тип — почкование. Он присущ вирусам, имеющим суперкапсидную оболочку. На заключительном этапе сборки нук­леокапсиды сложно устроенных вирусов фиксируются на клеточ­ной плазматической мембране, модифицированной вирусными белками, и постепенно выпячивают ее. В результате выпячива­ния образуется «почка», содержащая нуклеокапсид. Затем «поч­ка» отделяется от клетки. Таким образом, внешняя оболочка этих вирусов формируется в процессе их выхода из клетки. При та­ком механизме клетка может продолжительное время продуци­ровать вирус, сохраняя в той или иной мере свои основные функции.

Время, необходимое для осуществления полного цикла реп­родукции вирусов, варьирует от 5—6 ч (вирусы гриппа, нату­ральной оспы и др.) до нескольких суток (вирусы кори, адено­вирусы и др.). Образовавшиеся вирусы способны инфицировать новые клетки и проходить в них указанный выше цикл репро­дукции.

127. 1.В настоящее время вирусные инфекции составляют преобладаю­щую часть инфекционной патологии человека. Самыми распро­страненными среди них остаются острые респираторные (ОРВИ) и другие вирусные инфекции, передаваемые воздушно-капель­ным путем, возбудители которых относятся к абсолютно раз­личным семействам, чаще всего это РНК-содержащие вирусы (вирус гриппа А, В, С, вирус эпидемического паротита, вирусы парагриппа, кори, риновирусы и др.).

Не менее распространены и кишечные вирусные инфекцион­ные заболевания, вызываемые вирусами, также относящимися к различным семействам РНК- и ДНК-содержащих вирусов (энтеровирусы, вирус гепатита А, ротавирусы, калициновирусы и др.).

Широко распространены во всем мире такие вирусные инфек­ционные заболевания, как вирусные гепатиты, особенно гепа­тит В, передаваемый трансмиссивным и половым путем. Их возбудители - вирусы гепатита А, В, С, D, E, G, ТТ - отно­сятся к разным таксономическим группам (пикорнавирусов, гепаднавирусов и др.), имеют разные механизмы передачи, но все обладают тропизмом к клеткам печени.

Одна из самых известных вирусных инфекций — ВИЧ-инфек­ция (часто называемая СПИДом - синдромом приобретенного иммунодефицита, который является ее неизбежным исходом). Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) — возбудитель ВИЧ-инфекции — относится к семейству РНК-вирусов Retroviridae, роду лентивирусов.

Весьма распространены в настоящее время арбовирусные ин­фекционные заболевания. Естественные хозяева их возбудите­лей — мелкие грызуны и их эктопаразиты. Человеку эти виру­сы передаются через укусы кровососущих насекомых, т. е. пе­реносчиками являются членистоногие, поэтому и называются все эти вирусы, независимо от их таксономической принад­лежности, арбовирусами.

Большинство из них - РНК-содержащие, входят в семейства -тога-, флави-, буньявирусов и являются возбудителями энце­фалитов и геморрагических лихорадок. Возбудителями тяжелых форм геморрагических лихорадок (лихорадки Эбола, Марбург-ская лихорадка и др.) являются фило-, аденовирусы. Но транс­миссивный путь заражения при этих инфекционных заболева­ниях не является единственным. Вышеназванные инфекции в основном представляют собой эндемичные заболевания, но тяжелые вспышки некоторых из этих заболеваний (крымской геморрагической лихорадки, лихорадки западного Нила) имели место в Ростовской и Волгоградской областях летом 1999 г.

Кроме инфекционной патологии человека, доказана роль ви­русов и в развитии некоторых опухолей животных и человека (онкогенные, или онковирусы). Среди известных вирусов, обла­дающих онкогенным действием, есть представители как ДНК-содержащих (из семейства паповавирусов, герпесвирусов, аде­новирусов, поксвирусов), так и РНК-содержащих (из семейства ретрорвирусов, род пикорновирусов) вирусов.

2. Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используют­ся различные методы.

Вирусологическое исследование (световая микроскопия) позволяет обнаружить характерные вирусные включения, а электронная микроскопия — сами вирионы и по особенностям их строения диагностировать соответствующую инфекцию (например, ро-тавирусную).

Вирусологическое исследование направлено на выделение вируса и его идентификацию. Для выделения вирусов используют за­ражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры тканей.

Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семей­ства можно провести с помощью:

• определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиу-ридоном);

• особенностей ее строения (электронная микроскопия);

• размера вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100 нм);

• наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром);

• гемагглютининов (реакция гемагглютинации);

• типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия).

Результаты оцениваются по заражению культуры ткани про­бой, подвергнутой соответствующей обработке, и с последую­щим учетом результатов заражения методом цветной пробы фильтрования. Существенное значение для идентификации вирусов (до рода, вида, внутри вида) имеет также изучение их антигенного строения, которое проводится в реакции вирусо-нейтрализации с соответствующими иммунными сыворотками. Сущность этой реакции состоит в том, что после обработки гомологичными антителами вирус утрачивает свою биологиче­скую активность (нейтрализуется) и клетка хозяина развивает­ся так же, как и неинфицированная вирусом. Об этом судят по отсутствию цитопатического действия, цветной пробе, резуль­татам реакции торможения гемагглютинации (РТГА), отсутст­вию изменений при заражении куриных эмбрионов, выживае­мости чувствительных животных.

Вирусологическое исследование — это "золотой стандарт" виру­сологии и должно проводиться в специализированной вирусо­логической лаборатории. В настоящее время оно используется

практически только в условиях возникновения эпидемической вспышки того или иного вирусного инфекционного заболевания.

Для диагностики вирусных инфекций широкое применение нашли методы иммунодиагностики (серодиагностики и имму-ноиндикации). Они реализуются в самых разнообразных реакци­ях иммунитета:

• радиоизотопный иммунный анализ (РИА);

• иммуноферментный анализ (ИФА);

• реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

• реакция связывания комплемента (РСК);

• реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);

• реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и др.

При использовании методов серодиагностики обязательным яв­ляется исследование парных сывороток. При этом 4-кратное на­растание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперене-сенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет об­наружение антител класса IgM, свидетельствующее об острой инфекции.

Большим достижением современной вирусологии является внедрение в практику диагностики вирусных инфекций моле-кулярно-генетических методов (ДНК-зондирование, полимераз-ной цепной реакции — ПЦР). В первую очередь с их помощью выявляют персистирующие^ вирусы, находящиеся в клиниче­ском материале, с трудом обнаруживаемые

128.

Противовирусный иммунитет. Основой противовирусного иммунитета является клеточный иммунитет. Клетки-мишени, ин­фицированные вирусом, уничтожаются цитотоксическими лим­фоцитами, а также NK-клетками и фагоцитами, взаимодействую­щими с Fc-фрагментами антител, прикрепленных к вирусспецифическим белкам инфицированной клетки. Проти­вовирусные антитела способны нейтрализовать только внеклеточно расположенные вирусы, как и факторы неспецифическо­го иммунитета — сывороточные противовирусные ингибиторы. Такие вирусы, окруженные и блокированные белками организ­ма, поглощаются фагоцитами или выводятся с мочой, потом и др. (так называемый «выделительный иммунитет»). Интерфероны усиливают противовирусную резистентность, индуцируя в клет­ках синтез ферментов, подавляющих образование нуклеиновых кислот и белков вирусов. Кроме этого, интерфероны оказывают иммуномодулирующее действие, усиливают в клетках экспрес­сию антигенов главного комплекса гистосовместимости (МНС). Противовирусная защита слизистых оболочек обусловлена сек­реторными IgA, которые, взаимодействуя с вирусами, препятст­вуют их адгезии на эпителиоцитах.

1.Существование вирусов в 2 (внеклеточной и внутриклеточной) формах предопределяют и особенности иммунитета при вирус­ных инфекциях. В отношении внеклеточных вирусов действуют те же неспецифические и специфические механизмы антимик­робной резистентности, что и в отношении бактерий. Клеточная ареактивность — один из неспецифических факто­ров защиты. Она обусловлена отсутствием на клетках рецеп­торов для вирусов, что делает их невосприимчивыми к вирус­ной инфекции. К этой же группе защитных факторов можно отнести лихорадочную реакцию, выделительные механизмы (чихание, кашель и др.). В защите от внеклеточного вируса участвуют:

• система комплемента;

• пропердиновая система;

• NK-клетки (естественные киллеры);

• вирусные ингибиторы.

Фагоцитарный механизм защиты малоэффективен в отноше­нии внеклеточного вируса, но достаточно активен в отношении клеток, уже инфицированных вирусом. Экспрессия на поверхно­сти таких вирусных белков делает их объектом макрофагально-го фагоцитоза. Поскольку вирусы представляют собой ком­плекс антигенов, то при их попадании в организм развивается иммунный ответ и формируются специфические механизмы защиты — антитела и эффекторные клетки.

2. Антитела действуют только на внеклеточный вирус, препятст­вуя его взаимодействию с клетками организма и неэффектив­ны против внутриклеточного вируса. Некоторые вирусы (вирус гриппа, аденовирусы) недоступны для циркулирующих в сыворотке крови антител и способны персистировать в организме человека достаточно долго, иногда пожизненно.

При вирусных инфекциях происходит продукция антител классов IgG и IgM, а также секреторных антител класса IgA. Последние обеспечивают местный иммунитет слизистых обо­лочек на входных воротах, что при развитии вирусных инфек­ций желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей может иметь определяющее значение. Антитела класса IgM появля­ются на 3—5-й день болезни и через несколько недель исчеза­ют, поэтому их наличие в сыворотке обследуемого отражает острую или свежеперенесенную инфекцию. Иммуноглобули­ны G появляются позже и сохраняются дольше, чем иммуног­лобулины М. Они обнаруживаются только через 1-2 недели после начала заболевания и циркулируют в крови в течение длительного времени, обеспечивая тем самым защиту от по­вторного заражения.

Еще более важную роль, чем гуморальный иммунитет, при всех вирусных инфекциях играет клеточный иммунитет, что связано с тем, что инфицированные вирусом клетки становят­ся мишенью для цитолитического действия Т-киллеров. Кроме всего прочего, особенностью взаимодействия вирусов с иммунной системой является способность некоторых из них (так называемые лимфотропные вирусы) поражать непосредст­венно сами клетки иммунной системы, что приводит к разви­тию иммунодефицитных состояний.

Все перечисленные' механизмы защиты (исключая фагоцитоз зараженных клеток) активны только в отношении внеклеточ­ного вируса. Попав в клетку, вирионы становятся недоступ­ными ни для антител, ни для комплемента, ни для иных меха­низмов защиты. Для защиты от внутриклеточного вируса в ходе эволюции клетки приобрели способность вырабатывать осо­бый белок — интерферон.

3. Интерферон — это естественный белок, обладающий противови­русной активностью в отношении внутриклеточных форм вируса. Он нарушает трансляцию и-РНК на рибосомах клеток, инфи­цированных вирусом, что ведет к прекращению синтеза вирус­ного белка. Исходя из этого универсального механизма дейст­вия интерферон подавляет репродукцию любых вирусов, т. е. не обладает специфичностью, специфичность интерферонаиная. Она носит видовой характер, т. е. человеческий интер­ферон ингибирует репродукцию вирусов в клетках человека, мышиный — мыши и т. д.

Интерферон обладает и противоопухолевым действием, что яв­ляется косвенным свидетельством роли вирусов в возникновении опухолей. Образование интерферона в клетке начинается уже через 2 ч после заражения вирусом, т. е. намного раньше, чем его репродукция, и опережает механизм антителообразования. Интерферон образуют любые клетки, но наиболее активными его продуцентами являются лейкоциты и лимфоциты. В на­стоящее время методами генной инженерии созданы бактерии (кишечные палочки), в геном которых введены гены (или их копии), ответственные за синтез интерферона в лейкоцитах. Полученный таким образом генно-инженерный интерферон широко используется для лечения и пассивной профилактики вирусных инфекций и некоторых видов опухолей. В последние годы разработан широкий круг препаратов — ин­дукторов эндогенного интерферона. Их применение предпочти­тельнее, нежели введение экзогенного интерферона. Таким образом, интерферон является одним из важных факто­ров противовирусного иммунитета, но в отличие от антител или клеток-эффекторов он обеспечивает не белковый, а гене­тический гомеостаз.

129. Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используют­ся различные методы.

Вирусологическое исследование (световая микроскопия) позволяет обнаружить характерные вирусные включения, а электронная микроскопия — сами вирионы и по особенностям их строения диагностировать соответствующую инфекцию (например, ро-тавирусную).

Вирусологическое исследование направлено на выделение вируса и его идентификацию. Для выделения вирусов используют за­ражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры тканей.

Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семей­ства можно провести с помощью:

• определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиу-ридоном);

• особенностей ее строения (электронная микроскопия);

• размера вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100 нм);

• наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром);

• гемагглютининов (реакция гемагглютинации);

• типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия).

Результаты оцениваются по заражению культуры ткани про­бой, подвергнутой соответствующей обработке, и с последую­щим учетом результатов заражения методом цветной пробы фильтрования. Существенное значение для идентификации вирусов (до рода, вида, внутри вида) имеет также изучение их антигенного строения, которое проводится в реакции вирусо-нейтрализации с соответствующими иммунными сыворотками. Сущность этой реакции состоит в том, что после обработки гомологичными антителами вирус утрачивает свою биологиче­скую активность (нейтрализуется) и клетка хозяина развивает­ся так же, как и неинфицированная вирусом. Об этом судят по отсутствию цитопатического действия, цветной пробе, резуль­татам реакции торможения гемагглютинации (РТГА), отсутст­вию изменений при заражении куриных эмбрионов, выживае­мости чувствительных животных.

Вирусологическое исследование — это "золотой стандарт" виру­сологии и должно проводиться в специализированной вирусо­логической лаборатории. В настоящее время оно используется

практически только в условиях возникновения эпидемической вспышки того или иного вирусного инфекционного заболевания.

Для диагностики вирусных инфекций широкое применение нашли методы иммунодиагностики (серодиагностики и имму-ноиндикации). Они реализуются в самых разнообразных реакци­ях иммунитета:

• радиоизотопный иммунный анализ (РИА);

• иммуноферментный анализ (ИФА);

• реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

• реакция связывания комплемента (РСК);

• реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);

• реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и др.

При использовании методов серодиагностики обязательным яв­ляется исследование парных сывороток. При этом 4-кратное на­растание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперене-сенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет об­наружение антител класса IgM, свидетельствующее об острой инфекции.

Большим достижением современной вирусологии является внедрение в практику диагностики вирусных инфекций моле-кулярно-генетических методов (ДНК-зондирование, полимераз-ной цепной реакции — ПЦР). В первую очередь с их помощью выявляют персистирующие^ вирусы, находящиеся в клиниче­ском материале, с трудом обнаруживаемые или не обнаружи­ваемые другими методами.

130 Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей живот­ных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.

Приготовление первичной культуры клеток складывает­ся из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания получен­ной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.

Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохра­няются на протяжении нескольких десятков пассажей.

Перевиваемые однослойные культуры клеток приготов­ляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладаю­щих способностью длительно размножаться in vitro в определен­ных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки ам­ниона человека, почек обезьяны и др.

К полуперевиваемым культурам относятся диплоид­ные клетки человека. Они представляют собой клеточную систе­му, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток использу­емой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают зло­качественного перерождения и этим выгодно отличаются от опу­холевых.

О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), кото­рое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.

Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.

Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорби­ровать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее по­становки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На по­верхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.

Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жид­кости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.

Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инку­бации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса при­нимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.

Более точным количественным методом учета отдельных ви­русных частиц является метод бляшек.

Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.

Для культивирования вирусов используют ряд методов. Это культивирование в организме экспериментальных животных, раз­вивающихся куриных вибрионах и культурах тканей (чаще — эмбриональные ткани или опухолевые клетки). Для выращива­ния клеток тканевых культур используют многокомпонентные питательные среды (среда 199, среда Игла и др.). Они содержат индикатор измерения рН среды и антибиотики для подавления возможного бактериального загрязнения.

Культуры тканей могут быть переживающими, в которых жиз­неспособность клеток удается сохранить лишь временно, и растущими, в которых клетки не только сохраняют жизнедея­тельность, но и активно делятся.

В роллерных культурах клетки ткани фиксированы на плотной основе (стекло) — чаще в один слой (однослойные), а в суспензированных —взвешены в жидкой среде. По количеству пассажей, выдерживаемых растущей культурой тканей, среди них различают:

• первичные (первично-трипсинизированные) культуры тканей, которые выдерживают не более 5—10 пассажей;

• полуперевиваемые культуры тканей, которые поддерживаются не более чем в 100 генерациях;

• перевиваемые культуры тканей, которые поддерживаются в те­чение неопределенно длительного срока в многочисленных ге­нерациях.

Чаще всего используются однослойные первично-перевиваемые и перевиваемые тканевые культуры.

2. О размножении вирусов в культуре ткани можно судить по ци-топатическому действию (ЦПД):

• деструкции клеток;

• изменению их морфологии;

• формированию многоядерных симпластов или синтиция в ре­зультате слияния клеток.

• в клетках культуры ткани при размножении вирусов могут об­разовываться включения — структуры, не свойственные нор­мальным клеткам.

Включения выявляются в окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках из зараженных клеток. Они бывают эозинофильные и базофильные.

По локализации в клетке различают: цитоплазматические; ядерные; смешанные включения.

Характерные ядерные включения формируются в клетках, за­раженных вирусами герпеса (тельца Каудри), цитомегалии и полиомы, аденовирусами, а цитоплазматические включения — вирусами оспы (тельца Гварниери и Пашена), бешенства (тель­ца Бабеша-Негри) и др.

О размножении вирусов в культуре ткани также можно судить по методу "бляшек" (негативных колоний). При культивирова­нии вирусов в клеточном монослое под агаровым покрытием на месте пораженных клеток образуются зоны деструкции моно-сом — так называемые стерильные пятна, или бляшки. Это дает возможность не только определить число вирионов в 1 мл сре­ды (считается, что одна бляшка является потомством одного вириона), но и дифференцировать вирусы между собой по фе­номену бляшкообразования.

Следующим методом, позволяющим судить о размножении вирусов (только гемагглютинирующих) в культуре ткани, мож­но считать реакцию гемадсорбции. При культивировании виру­сов, обладающих гемагглютжирующей активностью, может происходить избыточный синтез гемагглютининов. Эти моле­кулы экспрессируются на поверхности клеток культуры ткани, и клетки культуры ткани приобретают способность адсорбиро­вать на себе эритроциты — феномен гемадсорбции. Молекулы гемагглютинина накапливаются и в среде культивирования, это приводит к тому, что культуральная жидкость (в ней нака­пливаются новые вирионы) приобретет способность вызывать гемагглютинацию.

Наиболее распространенным методом оценки размножения вирусов в культуре ткани является метод "цветной пробы". При размножении в питательной среде с индикатором незараженных

клеток культуры ткани вследствие образования кислых продук­тов метаболизма она изменяет свой цвет. При репродукции вируса нормальный метаболизм клеток нарушается, кислые продукты не образуются, среда сохраняет исходный цвет.

131. Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно вы­сокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздей­ствиям.

Для получения чистых культур риккетсий, хламидий. и ря­да вирусов в диагностических целях, а также для приготов­ления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим из­менениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его обо­лочках.

О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.

К недостаткам данного метода относятся невозможность об­наружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очист­ку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препа­ратов.

132. Большинство известных химиотерапевтических препаратов не обладают противовирусной активностью, так как механизм действия большинства из них основан на подавлении микроб­ного метаболизма, а у вирусов собственные метаболические системы отсутствуют.

Антибиотики и сульфаниламиды при вирусных инфекциях ис­пользуют только с целью профилактики бактериальных ослож­нений. Тем не менее в настоящее время разрабатываются и применяются химиотерапевтические средства, обладающие противовирусной активностью.

Первая группа — аномальные нуклеозиды. По строению они близки к нуклеотидам вирусных нуклеиновых кислот, но, включенные в состав нуклеиновой кислоты, они не обеспечи­вают ее нормальное функционирование. К таким препаратам относятся азидотимидин — препарат, активный в отношении вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекция). Недостаток этих препаратов — в высокой токсичности для клеток мак­роорганизма.

Вторая группа препаратов нарушает процессы абсорбции виру­сов на клетках. Они менее токсичны, обладают высокой изби­рательностью и весьма перспективны. Это тиосемикарбозон и его производные, ацикловир (зовиракс) - герпетическая ин­фекция, ремантадин и его производные — грипп А и др.

Универсальным средством терапии, так же как и профилакти­ки, вирусных инфекций является интерферон.

133. Острые респираторные вирусные инфекцииОстрые респираторные вирусные инфекции

(ОРВИ) — группа острых инфекционных болезней человека, передающихся

воздушно-капельным путем и характеризующихся преимущественным поражением органов

дыхания. ОРВИ являются самыми распространенными инфекционными болезнями

человека. К числу ОРВИ относят грипп, парагрипп, аденовирусные болезни,

респираторно-синцитиальную, риновирусную и коронавирусную инфекцию.

Коксаки-вирусные болезни (см. Энтеровирусные болезни).

Этиология. ОРВИ вызываются вирусами, относящимися к различным семействам и

родам, обладающими выраженным тропизмом к эпителию слизистой оболочки

дыхательных путей. Они, кроме аденовирусов, относятся к РНК-содержащим вирусам,

являются облигатными внутриклеточными паразитами, мало устойчивы в окружающей

среде, термолабильны, мгновенно погибают под действием дезинфицирующих средств.

Источником возбудителей инфекции является только человек — больной или

вирусоноситель. Передача вируса от человека к человеку происходит главным

образом воздушно-капельным путем; возможно также заражение через предметы

обихода (например, посуду, полотенца, игрушки). ОРВИ регистрируются во всех

странах мира, чаще в средних широтах. Отмечаются выраженные сезонные (весна,

осень) подъемы заболеваемости, чему способствуют охлаждение и снижение

резистентности организма. К этим инфекциям восприимчивы люди всех возрастов,

особенно дети.

Патогенез отдельных ОРВИ имеет общие черты (поражение эпителия различных

отделов дыхательных путей и легких, интоксикация), определяющие сходство таких

клинических проявлений болезни, как кашель, насморк, боль и першение в горле,

острое начало болезни, наличие гиперемии и отечности слизистых оболочек зева и

глотки, лихорадка, а также других симптомов общей интоксикации.

В патогенезе ОРВИ важную роль играет микст-патология, обусловленная сложными

вирусно-бактериальными ассоциациями с развитием вторичных процессов: катара

верхних дыхательных путей, ангины, бронхита, пневмонии, когда по существу

создается синергидный патологический эффект, нередко обусловливающий тяжелое

течение болезни в целом и даже ее исход. Сочетание респираторно-синцитиальной

инфекции с другими ОРВИ (гриппом, парагриппом, аденовирусной инфекцией) ведет к

обострению хронического бронхита и к развитию хронической пневмонии.

В то же время в патогенезе и клинических проявлениях отдельных

нозологических форм имеются существенные различия (см. Грипп, Аденовирусные

болезни, Энтеровирусные болезни).

Иммунитет после перенесенных ОРВИ обычно непродолжительный,

типоспецифический.

ОРВИ характеризуется коротким инкубационным периодом (до 7 суток), острым

началом, сочетанием катаральных явлений с лихорадкой и общей интоксикацией.

Диагноз устанавливают на основании клинической картины, данных

эпидемиологического анамнеза (общение с больным или вирусоносителями),

результатов лабораторных исследований.

Дифференциальный диагноз между различными ОРВИ в поликлинических условиях

сложен. Выраженный токсикоз с первого дня болезни с последующим присоединением

катаральных явлений со стороны верхних дыхательных путей отличает грипп от

других ОРВИ, при которых развитие катаральных явлений часто предшествует

повышению температуры тела, а явления интоксикации выражены слабо.

Дифференциальный диагноз проводят также с продромальным периодом кори,

преджелтушным периодом вирусного гепатита, пневмококковым ринитом,

менингококковым назофарингитом. Для дифференциальной диагностики между

отдельными ОРВИ используют реакцию связывания комплемента, реакцию непрямой

гемагглютинации, реакцию торможения гемагглютинации, а для экспресс-диагностики

— метод иммунофлюоресценции в прямой или непрямой модификации.

Лечение ОРВИ дифференцировано в зависимости от нозологической формы, тяжести

течения болезни, ее осложнений и возраста больных. Основная масса больных

лечится на дому. Показан постельный режим, щадящая диета, обильное питье (чай,

молоко, фруктовые соки, морсы), тепловые процедуры, ингаляция, средства от

насморка, кашля, бронхолитики, витамины (С, группы В), жаропонижающие средства

при температуре выше 38,5°, десенсибилизирующие средства. При всех ОРВИ показаны

интерферон и реаферон. При осложнениях ОРВИ применяют антибиотики и

сульфаниламиды. Показаниями для госпитализации являются осложненное и тяжелое

течение болезни, наличие тяжелых сопутствующих болезней. Больным с тяжелым

134

течением ОРВИ в условиях стационара назначают донорский противогриппозный или

противокоревой гамма-глобулин, нормальный человеческий иммуноглобулин, плазму,

средства дезинтоксикации, кортикостероиды.

Прогноз благоприятный, однако возможны летальные исходы у лиц с отягощенным

анамнезом, у детей до 1 года и больных старше 70 лет при тяжелом и осложненном

течении болезни, особенно при гриппе.

Профилактика состоит в раннем выявлении и изоляции больных; повышении

неспецифической сопротивляемости организма (занятие физкультурой и спортом,

закаливание организма, рациональное питание, назначение витаминов по

показаниям); ухаживающие за больными должны носить 4—6 слойные марлевые маски.

Следует ограничивать во время вспышек ОРВИ посещения амбулаторий, поликлиник,

зрелищных мероприятий, больных родственников. Лицам, общавшимся с больными,

назначают противовирусные препараты (например, оксолиновую мазь). Помещение, где

находится больной, нужно регулярно проветривать, делать влажную уборку 0,5%

раствором хлорамина. В очаге проводят текущую и заключительную дезинфекцию, в

частности кипячение посуды, белья, полотенец, носовых платков больных. Применяют

живые или убитые вакцины (при гриппе).

Ниже приводятся данные об ОРВИ, не описанные самостоятельными статьями.

Парагрипп характеризуется преимущественным поражением гортани, носа, бронхов

и умеренной лихорадкой. Возбудитель относится к парамиксовирусам. Известно 4

серотипа возбудителя. Случаи парагриппа регистрируются на протяжении всего года

с сезонными подъемами заболеваемости в осенне-зимний и весенний периоды.

Возможны ограниченные эпидемические вспышки. На долю парагриппа приходится

16—18% всей заболеваемости ОРВИ. Болеют дети любого возраста и взрослые. Вирус

размножается преимущественно в клетках эпителия верхних дыхательных путей,

особенно гортани, вызывая в них деструктивные изменения. Воспалительный отек у

детей может приводить к сужению просвета гортани. Наблюдается вирусемия.

Инкубационный период длится от 1 до 7 дней, чаще 2—4 дня. Начало постепенное, у

детей раннего возраста — острое. Наиболее характерным симптомом является сухой

«лающий» кашель. Наблюдаются першение в горле, осиплость голоса, заложенность

носа, а затем появление обильного серозного отделяемого, которое при

присоединении вторичной бактериальной инфекции принимает гнойный характер.

Температура обычно не превышает 38°, продолжительность лихорадки 2—5 дней, у

детей температура может подниматься до более высоких цифр. Общие симптомы

интоксикации выражены слабо: небольшая боль в лобно-височной области,

познабливание, небольшие мышечные боли. При осмотре отмечаются бледность кожи,

гиперемия и отечность слизистой оболочки носа, гиперемия мягкого неба и задней

стенки глотки. Из осложнений наиболее частым является пневмония, у детей —

ларинготрахеобронхит острый стенозирующий. Прогноз благоприятный.

Респираторно-синцитиальная инфекция характеризуется преимущественным

поражением бронхов и легких и умеренно выраженной интоксикацией. Возбудитель

относится к роду метамиксовирусов. Болеют главным образом дети младшего возраста

и даже новорожденные. Заболеваемость среди взрослых носит спорадический

характер, среди детей дошкольного возраста возможны эпидемические вспышки,

возникающие обычно с октября по апрель, т.е. в период сезонного подъема

заболеваемости. Вирус первоначально внедряется в эпителий слизистой оболочки

носа и глотки, вызывая воспалительный процесс. У взрослых патологический процесс

этим может ограничиваться. У детей наиболее выражены изменения в мелких бронхах

и бронхиолах, их просвет почти полностью закрывается тягучей слизью. В

пораженных участках наблюдаются характерные многоядерные сосочковые разрастания,

занимающие иногда значительную часть просвета бронхов, в некоторых случаях

альвеол. В легочной ткани отмечаются мелкоочаговые ателектазы и эмфизема. В

результате диффузного обструктивного процесса в бронхах развивается гипоксия.

Инкубационный период длится от 3 до 9 дней. Продолжительность болезни 5—7 дней,

но возможно и затяжное ее течение. Температура нормальная или субфебрильная,

явления интоксикации отсутствуют или выражены слабо. Кашель и насморк слабо

выражены. Слизистая оболочка мягкого неба и глотки гиперемирована незначительно.

У детей старшего возраста и взрослых болезнь протекает легко, без осложнений. У

детей первого года жизни сначала появляется насморк, затем присоединяется

кашель, через 2—3 дня повышается температура, возникает одышка преимущественно

экспираторного характера, отмечается втяжение уступчивых мест грудной клетки,

цианоз. В легких выслушиваются рассеянные мелкопузырчатые хрипы, появляются

135 симптомы общей интоксикации. Прогноз благоприятный.

Риновирусная инфекция характеризуется преимущественно поражением слизистой

оболочки носа и глотки. Возбудитель относится к роду риновирусов. Известно более

100 серотипов возбудителя. Болеют все возрастные группы населения.

Заболеваемость регистрируется преимущественно в весенне-осенний период, в виде

спорадических случаев и небольших вспышек в закрытых коллективах. Вирус

размножается в эпителиальных клетках слизистой оболочки носа, вызывая

катаральное воспаление с резким отеком слизистой оболочки, десквамацией эпителия

и обильной секрецией. У детей воспалительный процесс может распространяться на

гортань, трахею и бронхи. Инкубационный период продолжается от 1 до 6 дней.

Болезнь начинается с чиханья, заложенности носа, иногда небольшого недомогания.

Через несколько часов появляются обильные серозные выделения из носа. Возможен

сухой кашель. Температура чаще нормальная, реже субфебрильная. При осмотре

определяются гиперемия и набухание слизистой оболочки носа, инъекция сосудов

склер и конъюнктив, возможна мацерация кожи у носовых отверстий. У детей

младшего возраста болезнь может протекать тяжелей, возможны осложнения,

вызванные бактериальной флорой. Продолжительность болезни не превышает 7 суток.

Прогноз благоприятный.

Коронавирусная инфекция характеризуется преимущественным поражением верхних

дыхательных путей, чаще болеют дети, клинически сходна с риновирусной инфекцией.

Прогноз благоприятный.

Таксономия: семейство – Orthomyxoviridae, род Influenzavirus. Раз­личают 3 серотипа вируса гриппа: А, В и С.

Структура вируса гриппа А. Возбудитель гриппа имеет однонитчатую РНК, состоящую из 8 фрагментов. Подобная сегментарность позволяет двум вирусам при взаимодействии легко обмениваться генетической информацией и тем самым спо­собствует высокой изменчивости вируса. Капсомеры уложены вок­руг нити РНК по спиральному типу. Вирус гриппа имеет также суперкапсид с отростками. Вирус полиморфен: встре­чаются сферические, палочковидные, нитевидные формы.

Антигенная структура. Внутренние и поверхностные антигены. Внутренние антигены состоят из РНК и белков капсида, представлены нуклеопротеином (NP-белком) и М-белками. NP-и М-белки — это типоспецифические анти­гены. NP-белок способен связывать комп­лемент, поэтому тип вируса гриппа обычно определяют в РСК. Поверхностные антигены — это гемагглютинин и нейраминидаза. Их струк­туру, которая определяет подтип вируса гриппа, исследуют в РТГА, благодаря тор­можению специфическими антителами гемагглютинации вирусов. Внутренний антиген – стимулирует Т-киллеры и макрофаги, не вызывает антителообразования. У вируса имеются 3 разновидности Н- и 2 разновидности N – антигенов.

Иммунитет: Во время заболевания в проти­вовирусном ответе участвуют факторы неспе­цифической защиты: выделительная функция организма, сывороточные ингибиторы, аль­фа-интерферон, специфические IgA в секре­тах респираторного тракта, которые обеспечи­вают местный иммунитет.

Клеточный иммунитет - NK-клетки и специфические цитотоксические Т-лимфоциты, действующие на клетки, ин­фицированные вирусом. Постинфекционный иммунитет достаточно длителен и прочен, но высокоспецифичен (типо-, подтипо-, вариантоспецифичен).

Микробиологическая диагностика. Диагноз «грипп» базируется на (1) выделении и иден­тификации вируса, (2) определении вирусных АГ в клетках больного, (3) поиске вирусоспецифических антител в сыворотке больно­го. При отборе материала для исследования важно получить пораженные вирусом клетки, так как именно в них происходит репликация вирусов. Материал для исследования — но­соглоточное отделяемое. Для определения антител исследуют парные сыворотки крови больного.

Экспресс-диагностика. Обнаруживают ви­русные антигены в исследуемом материале с помощью РИФ (прямой и непрямой вариан­ты) и ИФА. Можно обнаружить в материале геном вирусов при помощи ПЦР.

Вирусологический метод. Оптимальная лабо­раторная модель для культивирования штаммов—ку­риный эмбрион. Индикацию вирусов проводят в зависи­мости от лабораторной модели (по гибели, по клиническим и патоморфологическим изменениям, ЦПД, образованию «бляшек», «цветной пробе», РГА и гемадсорбции). Идентифицируют вирусы по антигенной структуре. Применяют РСК, РТГА, ИФА, РБН (реакцию биологической нейтрализа­ции) вирусов и др. Обычно тип вирусов грип­па определяют в РСК, подтип — в РТГА.

Серологический метод. Диагноз ставят при четырехкратном увеличении титра антител в парных сыворотках от больного, полученных с интервалом в 10 дней. Применяют РТГА, РСК, ИФА, РБН вирусов.

Лечение: симптоматическое/патогенетическое. А-интерферон – угнетает размножение вирусов.

1. Препараты - индукторы эндогенного интерферона.

Этиотропное лечение - ремантидин – препятствует репродукции вирусов, блокируя М-белки. Арбидол – действует на вирусы А и В.

2. Препараты - ингибиторы нейраминидазы. Блокируют выход вирусных частиц из инфицированных клеток.

При тяжелых формах – противогриппозный донорский иммуноглобулин и нормальный человеческий иммуноглобулин для в\в введения.

Профилактика: Неспецифическая профилактика – противоэпидемические мероприятия, препараты а-интерферона и оксолина.

Специфическая – вакцины. Живые аллантоисные интраназальная и подкожная, тривалентные инактивированные цельно-вирионные гриппозные интраназальная и парентеральная-подкожная (Грипповак), химические Агриппал, полимер-субъединичная «Гриппол». Живые вакцины создают наиболее пол­ноценный, в том числе местный, иммунитет.