- •1. Цели и задачи мед бактериологии, вирусологии, иммунологии.
- •2. Систематика микроорганизмов. Основы систематики и таксономические группы микроорганизмов.
- •3. Морфология, ультраструктура бактерий.
- •4. Морфология, ультраструктура микоплазм.
- •5. Морфология, ультраструктура хламидий.
- •6. Морфология, ультраструктура риккетсий.
- •7. Морфология, ультраструктура спирохет.
- •8. Морфология, ультраструктура актиномицетов.
- •9. Морфология, ультраструктура грибов.
- •11. Структура липополисахарида и механизмы его биологического воздействия на макроорганизмы
- •12. Дифференциально-диагностические среды, их состав и механизм действия.
- •13. Дыхание бактерий. Методы создания анаэробных условий.
- •14. Питание бактерий. Клсф питательных сред, их состав.
- •15. Периодические и хемостатные культуры.
- •16. Биология и морфология вирусов. Их взаимоотношения с клеткой хозяина.
- •17. Клеточные культуры, их происхождение. Способы выявления вирусов в клеточных культурах.
- •18. Бактериофаги. Морфология, взаимодействие с клеткой, культивирование, практическое использование.
- •19. Строение генетического аппарата у бактерий. Плазмиды. Виды плазмид и их значение в изменчивости бактерий.
- •20. Генотипическая и фенотипическая формы изменчивости, их механизм.
- •21. Генетические рекомбинации (трансдукция, конъюгация, трансформация), их механизм и значение в изменчивости.
- •22. Споры и спорообразование у микроорганизмов, свойства спор, методы обнаружения спор.
- •23. Методы микроскопии в микробиологии: световая, темнопольная, фазовоконтрастная, люминесцентная. Их практическое применение.
- •24. Стерилизация. Методы стерилизации и стерилизационная аппаратура. Режимы стерилизации и контроль качества стерилизации в автоклаве.
- •25. Асептика, антисептика, дезинфекция. Определение понятий, механизмы влияния химических веществ на микробную клетку
- •26. Простые и сложные способы окраски микроорганизмов. Способы окраски спор, жгутиков, капсул, включений.
- •27. Антибиотики. Механизмы проявления чувствительности и устойчивости микроорганизмов к антибиотикам.
- •28. Нормальная микрофлора тела человека. Её роль в организме. Гнотобиология.
- •29. Микрофлора окружающей среды. Её значение в экологии.
- •30. Чистая культура микроорганизмов. Способы выделения аэробных и анаэробных микроорганизмов.
13. Дыхание бактерий. Методы создания анаэробных условий.
В процессе обмена в-в мкпостоянно нуждаются в притоке энергии. Она освобождается при ок-ии пит в-в и в виде АТФ исп-ся клеткой. Сущность ок-я закл-ся в переносе электронов и протонов от донора к акцептору. У мкчаще происходит отщепление 2 атомов Н (дегидрирование) от акцептора при участии ДГ. Биол ок-е может проходить как при участии О2, так и без него. По отношению к О2 выделяют следующие группы мк:
ОБЛИГАТНЫЕ АЭРОБЫ. Способны плч энергию путём дыхания. Причём обязательно нуждаются в О2, который используют в качестве конечного акцептора водорода.
ОБЛИГАТНЫЕ АНАЭРОБЫ. Процессы биол ок-я протекают у них по типу брожения, а расти и размножаться они могут только в бескислородных условиях, в присутствии О2 гибнут. Конечным акцептором водорода являются орг соед-я – чаще всего восстанавливается ПВК.
ФАКУЛЬТАТИВНЫЕ АНАЭРОБЫ. Могут расти и размножаться и в присутствии и в отсутствии О2, т.к. их ферментная система способна переключаться с одного типа дыхания на другой.
МИКРОАЭРОФИЛЫ. Лучше растут при низком содержании О2и повышенном СО2(«капнофильные мк»).
АЭРОТОЛЕРАНТНЫЕ. Могут выживать в присутствии атмосферного кислорода, но не могут использовать его в качестве конечного акцептора водорода (например, молочнокислые бактерии – бродильный метаболизм).
Т.о, факультативные анаэробы выращивают при пониженном содержании кислорода, облигатные – при полном его отсутствии, что достигается путем посева материалов внутрь жидкой или полутвердой питательной среды.
Условия культивирования. Наиболее пригодной для выращивания бактерий–анаэробов является среда Китта–Тароцци (среда обогащения), состоящая из концентрированного МПБ, глюкозы и агара. На дно пробирки для адсорбции кислорода помещают кусочки вареной печени или фарша слоем 1,0–1,5 см и заливают 6–7 мл среды. Перед посевом среду кипятят 10–15 мин для удаления воздуха, затем быстро охлаждают, а после посева заливают стерильным вазелиновым маслом. Материал, содержащий спороносные анаэробы, высевают в две пробирки со средой Китта–Тароцци, одну из них прогревают 30 мин при температуре 80°С для уничтожения вегетативных форм сопутствующей микрофлоры.
Посевы на поверхности плотных сред, разлитых в чашки Петри, культивируют в макро– или микроанаэростате.
Макроанаэростат представляет собой двухстенный аппарат с крышкой. Между стенками аппарата находится вода, источником тепла служит электричество, терморегулятор обеспечивает постоянную температуру. Посевы помещают в анаэростат после того, как температура в нем будет доведена до 37°С, и герметически закрывают крышкой. Анаэростат соединяют с вакуум–насосом и, выкачивая воздух, создают вакуум 3–5 мм. Посевы инкубируют в анаэростате обычно в течение 48 ч. Имеются также портативные анаэростаты. Это небольшие металлические цилиндры с герметически закрывающейся крышкой, постоянная температура в которых создается при помещении их в термостат.
Особенности выделения бактерий–анаэробов. В первый день исследуемый материал микроскопируют и высевают в среду Китта–Тароцци градуированной или пастеровской пипеткой, прогревают при температуре 80С в течение 30 мин, заливают вазелиновым маслом и посевы помещают в термостат. На второй день помутневшую (нередко вспенившуюся) среду обогащения набирают пастеровской пипеткой, которую опускают через слой вазелинового масла до дна пробирки.
Выделенную культуру микроскопируют и пересевают на плотные питательные среды. Изолированные колонии получают последовательным засевом шпателем бульонной культуры в три чашки Петри с кровяно–сахарным агаром. Чашки Петри помещают в анаэростат при температуре 37С на 24–48 ч или культуру засевают в столбики расплавленных и остуженных сахарных агаров после предварительного разведения в изотоническом растворе натрия хлорида. На третьи сутки изучают выросшие на чашках Петри колонии (или извлекают колонии из столбиков агара), делают из них мазки, высевают на среду Китта–Тароцци для обогащения чистой культуры.
Чтобы установить видовую принадлежность выделенной культуры бактерий, кроме изучения морфологических, тинкториальных и культуральных особенностей, необходимо определить на ряде Гисса их ферментативные свойства.
Т.о, используют следующие методы получения анаэробных условий:
ФИЗИЧЕСКИЙ (анаэростат)
ХИМИЧЕСКИЙ (оксикатор, сорбент – пирогаллол)
БИОЛОГИЧЕСКИЙ
Метод ФОРТНЕРА – чашку петри пополам, заливают парафином
Метод ЧАСОВЫХ СТЁКОЛ – выпуклое засевают аэробами.
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СПЕЦ ПИТ СРЕД
уколом в среду ВИЛЬСОН–БЛЕРА (колонии чёрные)
в стеклянной трубке.