Нормальные величины:

• ФИЗО - 94,18±1,55%

• ФИ120 - 92,00 ± 2,52 %

• ФЧЗО - 11,29±1,00%

• ФЧ120 - 9,81±0,96%

• КФЧ - 1,16±0,04%;

• ИБН - 66,3±2,58%

Клиническое значение.

Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе диагностики иммунодефицитных состояний: часто рецидивирующие гнойные воспалительные процессы, длительно не заживающие раны, склонность к послеоперационным осложнениям. Помогает в диагностике вторичных иммунодефицитных состояний, вызванных лекарственной терапией. В связи с тем что фагоциты участвуют в элиминации иммунных комплексов и активность фагоцитоза тесно связана с активностью компонентов комплемента, а именно Сз, концентрацией IgG антител, наличием других опсонирующих факторов, исследование фагоцитоза играет роль в диагностике, оценке активности и эффективности терапии при ревматических болезнях, коллагенозах.

Наиболее информативным для оценки фагоцитарной активности следует считать индекс поглощения, т. е. фагоцитарное число, коэффициент фагоцитарного числа, которые отражают завершенность фагоцитоза и индекс бактерицидности — способность фагоцита переваривать захваченный микроб. Особое значение в выявлении причин изменений фагоцитарной активности имеет определение опсонического индекса поглощения, так как он характеризует наличие сывороточных факторов, сопутствующих миокардитам, ревматизму, ревматоидному артриту и др., способных изменить активность иммунокомпетентных и фагоцитирующих клеток.

Определение цитоплазматического маркера Реактивы

1. параформальдегид 4% (срок хранения 4 недели при 4^оС)*;

2. тритон 1%;

3. моноклональные антитела (MPO, TdT, IgM, CD3, СD22, отрицательный контроль);

4. вторые антитела с ФИТЦ;

5. фосфатно-забуференный физ.раствор – ЗФФР, рН 7.2-7,4;

6. глицерин с физ.раствором (для иммерсии);

7. полилизин (для обработки стекол).

*-параформальдегид – приготовление: 200 мг параформальдегида + 5 мл ЗФФР, инкубация в течение 18-24 часов при 56^оС;

 

НЕПРЯМАЯ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИЯ

Выявление мембранных антигенов на мононуклеарах периферической крови и костного мозга с помощью моноклональных антител методом непрямой иммунофлюоресценции (модификация метода Coons et al., 1955)

Непрямая иммунофлюоресценция – метод, основанный на использовании специфичности иммунологической реакции антиген-антитело и чувствительности флюоресцентной микроскопии. При применении этого метода суспензию живых клеток вначале обрабатывают немечеными антителами, специфическими к выявляемому антигену, а затем – флюороохромированными антителами, направленными против специфических антител. Оценка результатов производится по специфическому свечению клеток в люминесцентном микроскопе.

 

Оборудование и принадлежности

1. центрифуга типа “Eppendorf”

2. термостат ТС-80М-2 на 37оС

3. термостат ТС-80М-2 на 56оС

4. холодильник бытовой (+4оС)

5. морозильная камера (-20оС)

6. люминесцентный микроскоп ЛЮМАМ Р-8 или ЛЮМАМ РПО-11

7. счетчик форменных элементов крови

8. автоматическая пипетка с переменным объемом от 0,5 мкл до 10 мкл

9. автоматическая пипетка с переменным объемом от 10 мкл до 1000 мкл

10. наконечники 0,5-10 мкл, 5-300 мкл, 100-1000 мкл

11. микропробирки конические 1,5 мл из полипропилена

12. микропробирки 1,5-2 мл для хранения фасованных реагентов при –20оС

13. контейнеры для хранения фасованных реагентов

14. штативы для микропробирок

15. чашки Петри

16. мерный цилиндр

17. стеклянный стакан на 50 мл

18. стекло предметное (76х26х1,5-2,0 мм)

19. парафилм “M”

20. спиртовка

21. ножницы канцелярские

22. дырокол канцелярский

23. лабораторные маркеры (набор из 5 цветов)