1. Упражнение 1. Изучение динамики распределения ионов.

Цель работы: установить наличие активного транспорта ионов через кожу лягушки.

Перед началом опыта берут по 50 мл раствора NaCl и KCl и сливают в стаканчик. Затем определяют содержание ионов Na⁺ и К⁺ в растворе. Этим же раствором заливают обе половины камеры 1. Дальнейший анализ проводят через 5, 10, 15 и 20 мин. После каждого определения записывают показания прибора для ионов Na⁺ и К⁺. Для каждого отрезка времени рассчитывают разность потенциалов между внешней и внутренней поверхностью кожи (для определяемых ионов). Необходимо построить график изменения величины потенциала от длительности инкубации кожи лягушки (рис. 4).

Упражнение 2. Влияние ингибиторов и блокаторов на проницаемость кожи лягушки.

Убедившись в изменении концентрации определенных ионов в растворе, необходимо выяснить их природу на препарате кожи. Порядок работы тот же, что и в предыдущем упражнении, с той лишь разницей, что в исследуемый раствор добавляют 1 мл ингибитора АТФ-азы (строфентин, суабаин или блокатор SH-группы).

Рассчитать разность потенциалов между наружной и внутренней мембранами можно по следующей формуле:

Е=,

где Е – мембранный потенциал, мВ; R – газовая постоянная; R=8.31Дж/моль·К; Т – абсолютная температура, К(Т=t⁰С+273); F – число Фарадея; F=96485 Кл/моль; Na_е – концентрация ионов Na вне клетки (на наружной стороне кожи); Na_i – концентрация ионов Na внутри клетки (на внутренней стороне кожи).

Сделать выводы о проницаемости кожи лягушки в зависимости от условий опыта.

Оформление полученных результатов.

Полученные в ходе выполнения работы результаты оформляются в виде отчета с обоснованием и представлением данных в таблицах, а также с выводами по работе по ниже приведенному образцу:

- титульный лист;

17. цель и задачи работы;

18. краткое описание хода выполнения эксперимента;

19. результаты измерений (наблюдений);

- анализ результатов и выводы (заключение).

Контрольные вопросы:

1.Транспорт веществ в клетке.

2.Структура и функции Na-, K-АТФ-азы.

Литература:

1. Верхотуров В.Н., Рубин А.Б. Автоматизация биофизических исследований: Учеб. пособие. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1988. – 200 с.

2. Костюк П.Г., Гродзинский Д.М., Зима В.Л. Биофизика. Киев: Высш.школа, 1974. – 386 с.

3. Биофизика: Учеб./В.В. Ревин, Г.В. Максимов, О.Р. Кольс. – Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2002. – 156 с.

4. Рубин А.Б. Биофизика: в 2 т., учеб. для вузов. 2-е изд., испр. и доп. М.: Книжный дом «Университет», 2000. – 486 с.

2. Артюхов В.Г., Ковалева Т.А., Шмелев В.П. Биофизика: Учеб. пособие. Воронеж: Изд-во Воронеж. Ун-та, 1994. – 336 с.

3. Тарусов Б.Н., Кольс О.Р. Биофизика. Москва: изд-во «Высшая школа», 1968. – 468 с.

4. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. М.: Медицина, 1998. – 704 с.