- •Общие требования
- •Осмотические свойства растительной клетки
- •1.1. Явление экзоосмоса
- •1.2. Явление плазмолиза формы плазмолиза, деплазмолиз
- •1.3. Получение «клеточки траубе»
- •2.1. Избирательное накопление нейтрального красного (нейтральрота) в закончивших рост клетках листа элодеи
- •2.2. Проницаемость для мочевины разновозрастных клеток листа
- •Клеточного сока методом плазмолиза
- •4.1. Определение интенсивности транспирации в приборе веска
- •4.2. Определение интенсивности транспирации методом кратковременных взвешиваний на торсионных весах
- •Составы питательных смесей для выращивания гриба
- •7.2. Определение рН клеточного сока с помощью иономера
- •Работа 9 клеточные и ферментные яды
- •9.2. Определение активности каталазы в семенах злаков и листьях элодеи
- •Работа 10 выделение пигментов растений и их изучение
- •1. Пигменты клеточного сока - антоцианы. Хроматографическое разделение антоцианидинов
- •2. Получение спиртовой вытяжки смеси пигментов
- •3. Изучение химических свойств хлорофилла
- •Работа 11 изучение свойств пигментов хлоропластов
- •1. Получение вытяжки пигментов хлоропластов
- •2. Разделение пигментов хлоропластов методом хроматографии на бумаге
- •3. Разделение пигментов по методу крауса
- •4. Изучение спектральных свойств пигментов
- •5. Подготовка к выполнению работы 12
- •Работа 12 выделение тепла при дыхании
- •Влияние температуры на интенсивность дыхания прорастающих семян
- •Работа 13 определение температуры повреждения цитоплазмы по изменению её проницаемости
1. Получение вытяжки пигментов хлоропластов
Пигменты выделяют пользуясь методикой, изложенной в работе №10
2. Разделение пигментов хлоропластов методом хроматографии на бумаге
Метод основан на способности пигментов распределяться в слое адсорбентов в соответствии с размерами, формой и массой молекул. Таким адсорбентом может быть клетчатка в составе хроматографической бумаги.
ХОД РАБОТЫ
1. Взять лист хроматографической или плотной ровной фильтровальной бумаги 1313 см и простым карандашом провести стартовую линию длиной 7 см, отступя 1,5 см от нижнего края, параллельно ему и по 3 см от боковых сторон:
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Стартовая линия |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
На стартовую линию нанести капилляром вытяжку узкой полосой так, чтобы окраска ее была достаточно интенсивной. Вытяжку наносят 6-8 раз поверх предыдущей, каждый раз подсушивая высоко над плиткой, чтобы линия не расплывалась.
После того как получена пигментная полоска достаточной интенсивности, квадрат надо свернуть в виде цилиндра и скрепить скрепкой по центру, чтобы его края не заходили друг за друга более, чем на 1 см.
В сосуд налить смесь для разгонки пигментов: 5 мл петролейного эфира и 20 мл бензина (хуже гексана или гептана), отмеренных с максимальной точностью. На дно сосуда со смесью осторожно поставить приготовленный бумажный цилиндр так, чтобы пигментная полоска оказалась внизу. После этого сосуд переставлять нельзя! Если бумажный цилиндр ниже высоты сосуда, то последний следует сверху закрыть стеклом. Растворитель начнет быстро подниматься по бумаге, увлекая с собой пигменты. Так как форма, размер и масса различных пигментов разная, то через некоторое время смесь, нанесенная на бумагу в виде одной полосы, разделится на отдельные компоненты в виде полосок разных цветовых оттенков, отстоящих на разных расстояниях от старта. Порядок распределения сверху вниз: каротин, две светло-желтые полосы ксантофиллов, хлорофилл а (синеватый), хлорофилл b (желтый оттенок).
Хроматограмму вклеить в тетрадь:
|
Место вклейки хроматограммы |
|
|
Отметить на хроматограмме соответствующие полосы пигментов.
Реактивы и оборудование: петролейный эфир, бензин, спиртовая вытяжка смеси пигментов зеленого листа, капилляр, цилиндр, закрытый стеклом камера для разгонки смеси, мерный цилиндр на 20 мл.