Количественный вариант:

№ лунки	1	2	3	4	5	6	7	8
реагент
ИХН	–	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл
Биологический материал	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл
Разведение		1 :2	1 :4	1 :8	1 :16	1 :32	1 :64	1 :128
Ресуспензированная эмульсия кардиолипинового антигена	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл
Перемешивание на орбитальном шейкере 5 мин.
ИХН (добавить)	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл	150мкл

- через 5 минут учет результатов;

- титром антител считается последнее разведение, где обнаружен преципитат

Реакция быстрых плазменных реагинов (RPR).

Основан, на образовании комплекса «антиген-антитело», имеющего вид флоккулята черного цвета, при взаимодействии сыворотки, плазмы или СМЖ больного сифилисом и суспензии кардиолипинового антигена сорбированного на частицах угля.

Биологический материал для исследования:

Нативная сыворотка крови, плазма крови, СМЖ.

Пробы к исследованию готовят так же, как и для РМП, а реактивы согласно прилагаемой инструкции.

3.Методика постановки rpr

Качественный анализ: дозатором набрать по 50 мкл контрольных (положительных и отрицательных) и испытуемых проб сыворотки (плазмы крови или спинномозговой жидкости) и внести в соответствующую лунку карточки;

- этим же наконечником или индивидуальной пластиковой палочкой распределить образец биологического материала внутри очерченной зоны лунки;

- наконечник или палочку сбросить в ёмкость с дезинфицирующим раствором;

- в каждую лунку добавить по одной капле (или по 16 мкл) суспензии кардиолипинового антигена, сорбированного на частицах угля.

- карточку поместить на платформу горизонтального шейкера (ротора) для постоянного перемешивания содержимого лунок карточки в течение 8 минут при скорости вращения 150 оборотов в минуту;

- через 8 минут приступить к учету результатов реакции, при этом карточку положить на стол или держать в руках, слегка покачивая. Учет результатов проводят визуально или с применением лупы двукратного увеличения.

В начале производят оценку результатов с положительным и отрицательным контролями; при несоответствии результатов исследования контролей заявленным производителем набора, результаты исследования аналитической серии регистрации не подлежат, тест провести заново:

- крупные и средней величины агрегаты угольных частиц черного цвета располагаются по всему объему лунки, имеют тенденцию к расположению ближе к периферической части лунки, реакционная среда практически полностью прозрачная – результат «положительный»;

- редкие и мелкие агрегаты угольных частиц, хлопья преципитата распределены по периферии реакционной лунки, реакционная среда имеет гомогенную структуру – результат «слабоположительный»;

- видимые агрегаты угольных частиц в пробе отсутствуют, реакционная среда гомогенной структуры либо частицы угля собираются в центральной части лунки, формируя пятно черного цвета – результат «отрицательный».

Количественный вариант (исследуются все пробы, показавшие положительный или слабоположительный результат в качественном варианте RPR):

№ лунки	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
реагент
ИХН		50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл
Исследуемый биоматериал	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл	50мкл
разведение		1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64	1:128	1:256	1:512
Кардиолипиновый антиген	16мкл	16мкл	16мкл	16мкл	16мкл	16мкл	16мкл	16мкл	16мкл	16мкл

Планшет поместить на горизонтальную площадку орбитального шейкера на 8 мин. Титром антител считается последнее разведенее, показавшее положительный результат при RPR- тестировании.

4. Методика выявления суммарных антител к Treponema pallidum в сыворотке крови, плазме, спинномозговой жидкости методом иммуноферментного анализа основана на образовании комплекса антиген-антитело на твердофазном носителе в присутствии конъюгата, меченного ферментом, хромогена, измении pH и окрашивания реагентной смеси, интенсивность которого пропорциональна концентрации антител.

5. Методика выявления суммарных антител к Treponema pallidum методом реакции пассивной гемагглютинации, основана на взаимодействии антител и антигенов Treponema pallidum, коньюгированных с эритроцитами животных, завершающимся образованием агглютинатов.

Материал для исследования: нативная сыворотка крови, СМЖ.