9. Отбор проб для молекулярно-биологических исследований

При изучении разнообразия микроорганизмов и их видового состава используют молекулярно-биологические методы исследования. При помощи этих методов изучают структуру микробных ДНК и РНК, состав белков и липидов. Пробы воды, осадков и матов используют для выделения ДНК, проведения ПЦР, клонирования генов, FISH метода, получения ДНК зондов, определения состава белков и липидов.

Для проведения молекулярно-биологических исследований воду фильтруют через газовую сетку, фильтры диаметром пор 0,4 мк и 0,2 мк для раздельной концентрации водорослей, цианобактерий, эубактерий и архебактерий. Фильтры с пробами высушить.

Донные осадки и микробные маты до лаборатории хранить при температуре ниже 5°С в стеклянной посуде или полиэтиленовом пакете.

Почву просеивают через сито с диаметром ячеек 3 мм, освобождают от корней и растительных остатков. Хранение при 4-6°С в полиэтиленовом пакете.

10. Отбор проб для определения влажности

Пробу ила и почвы поместить в герметично закрывающийся стеклянный флакон. Сушить пробы при 100-105°С в течение 5-10 ч до постоянного веса. Для расчета влажности используют формулу (%):

Q H2O= (В - В₁)·100/ В₁, где

В - вес сырой пробы;

В1 - вес сухой пробы.

11. Обработка и анализ результатов

Важным этапом исследования водоемов является обработка и анализ полученных результатов. При проведении исследований необходимо вести протокол, куда записывают время и условия отбора проб, проведение экспериментов, результаты гидрологических, физико-химических и гидробиологических измерений. Примерный план протокола дан в приложении. Протокол обычно ведется в полевом дневнике или специальной тетради. В банк данных вносятся первичные данные. Если сделаны исправления, то записать причину.

Отчет по экспедиции включает описание водоема и микробного сообщества, гидрологические, физические и химические данные, координаты места отбора, количество проб, сроки инкубации, время фиксации, количество реагентов и изотопов, список участников и ответственных за определенные этапы работы. К отчету прилагаются фотоснимки.

Статистическая обработка данных с использованием дисперсионного и корреляционного анализов, метода главных компонентов позволит выявить зависимость между абиотическими и биотическими факторами, связь между экофизиологическими группами бактерий (Плохинский, 1969).

Приложение Протокол исследования

Дата проведения исследования. Название, место расположения и описание водоема.

Место отбора проб. Краткое обозначение проб (Первые две-три буквы названия водоема - год - номер станции - горизонт. Например: Га-03-1-0, Гарга-2003 -станция 1-горизонт 0). Координаты. Ориентиры. Глубина отбора (см или м). Горизонты отбора (см или мм). Описание проб воды, осадков и матов.

Значения температуры, рН, минерализации, Eh. Цифры титрования и содержание карбонатов, кислорода.

Время постановки и снятия радиоизотопных и аппликационных опытов.

Список проб воды, осадков и матов для обработки в лаборатории, количество.

Список участников экспедиции и ответственных исполнителей работ.