Препаративныи электрофорез белков

Электрофорез в ПААГ не получил широкого распространения в качестве препаративного метода фракционирования и очистки белков. Одна из причин этого, по-видимому, состоит в трудности осуществления равномерного теплоотвода из большой массы геля любой конфигурации (цилиндрической, кольцевой или плоской). Неравномерность теплоотвода и возникающие в геле градиенты температуры приводят, как уже отмечалось, к резкому ухудшению качества разделения белков.

Вторая трудность связана с необходимостью создания удобной и надежной камеры элюции для сбора белков по мере их последовательного выхода из геля. В многочисленных конструкциях, предлагавшихся в начале 70-х годов, такую камеру создавали под вертикально расположенным гелем, отделяя ее от нижнего электродного буфера диализной пленкой. Для сохранения качества разделения белков камера элюции очень малого объема должна быстро и полно, без застойных зон, промываться элюирующим буфером, а выходящие из геля белки не должны сорбироваться на ее поверхностях, в частности на диализной пленке. Удачного решения этих проблем найдено не было. Столб геля, деформируясь под собственной тяжестью, сползал в камеру, застойные зоны при элюции приводили к смешиванию белков из разных полос, сорбция на пленке оставалась значительной.

Для препаративного фракционирования белков нередко используют систему ступенчатого электрофореза, хотя иной раз и из несколько других соображений, чем создание узкой начальной полосы. Наличие дополнительного формирующего геля при большой загрузке предохраняет от преципитации белка на границе рабочего геля, позволяет увеличить объем препарата, обеспечивает удаление из него остатков соли до начала процесса рабочего разделения и, наконец, снимает необходимость преэлектрофореза, так как основная часть персульфата успевает уйти из рабочего геля к аноду до того, как в этот гель вступают белки. Максимальная загрузка ПААГ при препаративном фракционировании белков может достигать 5 мг на 1 см2 сечения геля.

Иммуноэлектрофорез

Оптическая микроскопия занимает важное место в ряду методов исследования макропористой и надмолекулярной структуры углеродных материалов, она позволяет непосредственно наблюдать объект или его участок и существенно ( с 0 2 мм до 0 2 мкм) расширять пределы визуального наблюдения. Счетчик частиц. Оптическая микроскопия позволяет исследовать частицы с размерами не менее 0 25 мкм. Оптическая микроскопия с фазовым контрастом, основанная на различиях в коэффициентах рефракции полимеров, широко используется для исследования бинарных полимерных смесей. Оптическая система микроскопа позволяет осуществить сдвиг по фазе между дифрагированным и пропускаемым светом, что приводит к получению интерференционной картины даже при очень небольших различиях в коэффициентах рефракции. Использование оптической микроскопии для исследования микрогетерогенности смеси каучуков первоначально было предложено для ненаполненных систем. При анализе срезов толщиной 1 - 4 мкм никакого тонирования фаз не требуется, так как контраст достигается вследствие различия в показателях преломления эластомеров. Метод успешно использован для широкого круга смесей каучуков. Автоматизированный анализ реплик был впервые использован для определения совместимости в различных смесях полимеров.