Раздел: « общая вирусология »
Занятие 13. Дата _______. Тема: «Структура и биология вирусов. Методы диагностики вирусных инфекций. Культивирование вирусов. Методы индикации вирусов. Идентификация вирусов. Серологическая диагностика вирусных инфекций»
Виды культур тканей
А. Культуры переживающих Б. Культуры растущих тканей
к усочков (эксплантантов) тканей
1. культуры 2. однослойные 3. суспензионные
ф иксированных культуры клеток культуры тканей клеток
а)первично-трипсинизированные в)перевиваемые культуры
б)полуперевиваемые культуры
Схема 6. Виды культур тканей
Культура клеток типа Культура клеток ____ЦПД вирусов_______
куриных фибробластов типа HeLa (гибель и деструкция монослоя)
_______ЦПД вирусов _ЦПД вирусов__ Реакция_____
цитоплазматические включения внутриядерные включения гемадсорбции
Таблица 54. Реакция гемагглютинации (РГА) для индикации вируса в аллантоисной жидкости куриного эмбриона
Ингредиенты |
Разведения вируссодержащего материала |
Контроль эритроцитов |
||||
1:2 |
1:4 |
1:8 |
1:16 |
1:32 |
||
Изотонич. р-р хлорида натрия, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Аллантоисная жидкость (вируссодержащий материал), мл |
0,5 |
|
|
|
вылить в дез. р-р |
-- |
1% суспензия эритроцитов, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Перемешать, инкубировать при комнатной температуре в течение 30- 60 мин. |
||||||
Результаты: |
|
|
|
|
|
|
ВЫВОДЫ: РГА положительная/отрицательная. В аллантоисной жидкости обнаружен/не обнаружен вирус, обладающий гемагглютинирующей способностью. Титр вируса ______. |
||||||
Таблица 55. РСК с иммунной и нормальной сыворотками
Результаты: |
Разведения сыворотки |
Контроли |
|||||||
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
эритр. |
комплемента |
гемолит. системы |
|
Иммунная сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Нормальная сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ВЫВОДЫ: РСК положительная с иммунной / нормальной сывороткой. Титр антител в _____________________ сыворотке _________. |
|||||||||
Условные обозначения: «+» - наличие гемолиза (РСК «-«),
«-» - отсутствие гемолиза (РСК «+«).
Рисунок 14. Реакция биологической нейтрализации (РБН) в культуре клеток для идентификации вируса
|
|
|
|
|
|
неизв. вирус + cыворотка X |
неизв. вирус + cыворотка Y |
Контроли: |
|||
культ. клеток |
вируса |
cыворотки X |
cыворотки Y |
||
ВЫВОДЫ:
Таблица 56. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) с иммунной и нормальной сыворотками
Номера пробирок |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
Контроли |
||
Разведения сыворотки |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
сыво-ротки |
вируса |
эритро-цитов |
Ингредиенты: |
|||||||||
Изотонич. р-р хлорида натрия, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
1,0 |
Исследуемая сыворотка 1:10, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 вылить |
0,5 |
--- |
--- |
Вирусный диагностикум, 4 AЕ, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
--- |
0,5 |
--- |
1% суспензия эритроцитов, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Результаты: |
|||||||||
Иммунная сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Нормальная сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ВЫВОДЫ: РТГА положительная с иммунной / нормальной сывороткой. Титр антител в _____________________ сыворотке _________.
|
|||||||||
Условные обозначения: «+» - наличие гемагглютинации (РТГА «-«),
«-» - отсутствие гемагглютинации (РТГА «+«).
Рисунок 15. Реакция биологической нейтрализации (РБН) в культуре клеток с парными сыворотками
Первая сыворотка |
Вторая сыворотка |
Контроли |
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
культ. клеток |
вируса |
первой сыв. |
второй сыв. |
||
ВЫВОДЫ: