Лабораторно-практическое занятие №2

Цель занятия: освоить метод элективной накопительной культуры на примере методики приготовления культур сенной и картофельной палочек.

ОПЫТ № 2

Методика приготовления элективной накопительной культуры сенной палочки Bacillus subtilis и картофельной палочки b. Mesentericus.

Накопительными элективными культурами называются такие, в которых создаются условия для роста микроорганизмов одного вида и подавляется рост других видов. В данной работе кипячение является фактором, убивающим неспороносные формы, вследствие чего Bacillus subtilis и

B. mesentericus,имеющие устойчивые споры, получают преимущественные условия для размножения. Этому способствует и специфика используемых сред.

Оборудование и материалы: колба термостойкая на 250 мл, стеклянная палочка, ватно-марлевая пробка, сенная труха или солома, толченый мел, электроплитка или водяная баня, кипяток, стеклограф, ножницы, клубни картофеля, чашки Петри.

Ход работы:

Получение культуры сенной палочки

1. Простерилизовать посуду.

2. Отвесить навеску 10-15 г сена или соломы.

3. Поместить в колбу. Залить кипятком, так, чтобы солома была полностью покрыта водой.

4. Засыпать 0,5 ч.л. мела. Кипятить 15 мин.

5. Закрыть пробкой и поставить в термостат на 7-10 суток при температуре 25⁰.

6. По окончании микроскопировать.

На поверхности сенного отвара появляется сероватая пленка, состоящая из особей грамотрицательной сенной палочки. Сделать рисунок в лабораторной тетради.

Ход работы:

Получение культуры картофельной палочки

1. Простерилизовать посуду.

2. Промыть клубень картофеля и, не снимая кожуры, нарезать тонкими ломтиками..

3. Поверхность ломтиков натереть мелом и положит в чашку Петри.

4. Выдержать чашки с ломтиками картофеля в сушильном шкафу при 100⁰С 10 мин..

5. Поставить в термостат на 7-10 суток при температуре 27-30⁰.

6. По окончании микроскопировать.

На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка, состоящая из особей картофельной палочки. Она движется при помощи жгутиков, размеры клеток 4-5 мкм, грамположительна.

Сделать рисунок в лабораторной тетради. Составить выводы и записать в тетрадь.

Контролирующие вопросы:

1. Что позволяет бактериям переносить процесс кипячения?

2. Каким типом морфоструктуры представлены изучаемые виды бактерий?

3. Каким движением обладают изученные виды бактерий?

4. Какую функцию выполняет сенная палочка в природе?

5. Какой тип метаболизма осуществляют изученные виды бактерий?

Лабораторно-практическое занятие №4-5

ОПЫТ № 4

Изучение микроорганизмов маслянокислого брожения.

Цель: освоить методику приготовления культур маслянокислых бактерий и ознакомиться с основными представителями группы.

Маслянокислое брожение – сложный процесс превращения углеводов в масляную кислоту и другие продукты, совершаемый группой анаэробных спороносных бактерий. Маслянокислые бактерии имеют различные активные ферменты, способные производить расщепление сложных углеводов. Образующаяся масляная кислота в невысоких концентрациях является веществом, стимулирующих рост высших растений.

Материалы и оборудование: большие пробирки, резиновые пробки к ним, клубни картофеля, пинцеты, скальпели, толченый мел, водяная баня, раствор Люголя, 5%-ный раствор хлорного железа.

Ход работы:

1. Неочищенный картофель нарезать ломтиками, которые могут легко войти в пробирку.

2. Заполнить ими пробирку на 1/3 объема, добавить щепотку мела и заполнить водой почти до верха.

3. Пробирки поместить в водяную баню при температуре 80⁰С на 10-15 мин.

4. Затем пробирки закрыть пробками и ставить в термостат с температурой 35⁰С.

В этих условиях уже через 2-3 дня в жидкости обнаруживают бактерии маслянокислого брожения. Культура является элективной. Для их преимущественного развития созданы анаэробные условия, бесспоровые формы убиты предварительным нагреванием, добавка мела нейтрализует образующиеся кислоты и способствует развитию бактерий.

Культуру микроскопировать, в ней обнаруживается главным образом Clostridium pasteurianum – подвижные палочки с закругленными концами, одиночные и парные. В старых культурах у одного из концов клетки обнаруживается спора. При микроскопировании можно добавить к капле культуральной жидкости каплю раствора Люголя. Маслянокислые бактерии содержат в клетках гранулезу, которая окрашивается раствором Люголя в синий цвет.

С культуральной жидкостью проводят качественную реакцию на масляную кислоту. Для этого к 5 мл жидкости добавляют 2 мл 5%-ного хлорного железа. При нагревании образуется маслянокислое железо коричневого цвета. Результаты занести в лабораторную тетрадь. Сделать рисунок.

Контрольные вопросы:

1. Какую функцию в экосистеме выполняют маслянокислые бактерии?

2. Где в природе они обитают?

3. Какой запасной продукт синтезируют бактерии этой группы?

4. Назовите основных представителей группы маслянокислых бактерий.

5. Какой тип метаболизма осуществляют эти бактерии?

6. Какие экологические условия они предпочитают?

ОПЫТ № 5