Лабораторная работа 2 исследование продуктов гидролиза сахаров под действием зимазного комплекса дрожжей

Цель работы: Изучить интенсивность процесса гидролиза углеводов под действие зимазного комплекса дрожжей.

Общие сведения

В процессе брожения теста, содержащиеся в ней сахара под действием зимазного комплекса ферментов дрожжевой клетки разлагаются на спирт и углекислый газ. Распад углеводов происходит через фосфорные эфиры гексоз, триоз и других фосфорилированные промежуточные продукты. За счет энергии, освобождаемой при превращении этих продуктов, например, при окислении остатков фосфорной кислоты, переносится на адениловую систему, образуя богатые энергией связи АТФ.

Вследствие фосфорилирования происходит связывание неорганических фосфата и концентрация последнего понижается.

Количество фосфата определяют колориметрическим методом по реакции образования комплексной фосфорно-молибденовой кислоты и восстановления ее в молибденовую синь.

Приборы и реактивы; фарфоровые ступки с пестиками; пробирки; бюретки; мерные колбы на 50 мл; воронки; водяная баня; дрожжи; раствор, содержащий 60 г Na₂HPО₄ ·2H₂0 и 20 гКН₂Р0₄ в 1 л воды; сахароза, порошок, трихлоруксусная кислота 3%-ная; 2,5%- ный раствор молибденовокислого аммония в 5 н. H₂S0₄; аскорбиновая кислота 0,5%-ная; образцовый раствор КН₂РО₄ (навеску 0,1917 г. х.ч. КН₂РО₄, промытого спиртом, перекристаллизованного и высушенного в эксикаторе над серной кислотой, переносят количественно в мерную колбу на 1 л 'растворяют в дистиллированной воде, доводят до метки. Хорошо перемешивают. Из колбы берут пипеткой 25 мл раствора в мерную колбу на 250 мл, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают. В 1 мл этого раствора содержится 0,001 мл Р₂0₅; 14)*КФК.

Методам выполнения работы: 1 г дрожжей растереть в ступке с 1 г сахарозы и 5 мл воды. Добавить 5 мл раствора фосфорнокислых солей и тщательно перемещать. 1 мл полученной взвеси (проба 1) перенести пипеткой в пробирку и осадить 3 мл трихлоруксусной кислоты из бюретки. Остальную взвесь перенести в пробирку, поставить в водяную баню при температуре 37 ⁰С. Через 30 минут отмерить 1 мл взвеси, затем повторить через 30 мин (пробы 2 и 3) и осадить каждую пробу 3 мл трихлоруксусной кислоты..

Отфильтровать в мерные колбы на 50' мл по 1 мл фильтрата и долить и долить 10 мл воды. Добавить по 1 мл раствора молибденовокислого аммония, по 0,5 мл аскорбиновой кислоты, довести до метки водой, перемешать и оставить на 10-15 минут для развитая синего, окрашивания.

Колориметрировать при длине волн λ= 670 нм.. В мерных колбах на 50 мл приготовить шкалу образцовых растворов. Для этого вместо испытуемого раствора в колбы внести мерной пипеткой 0,5; 1 и 2 мл образцового раствора КН₂РО₄, в 1 мл которого содержится 0,01 мг Р₂0₅. Затем прилить те же реактивы, что и в колбу с испытуемым раствором. Шкалу образцовых растворов проколориметрировать, построить график.

Содержание фосфора (процент на сухое вещество) рассчитывают по формуле

Где а - количество фосфора по графику, мг;

Р – количество разведений;

н – навеска воздушно-сухого вещества.

Оформление работы

Подученные результаты записывают в таблицу 3.

Таблица 3

Показатель прибора	Количество фосфора по графику, мг	Содержание Р2О5, %

Контрольные вопросы

1. Напишите стадии биохимического процесса спиртового брожения.

2. Какие ферменты участвуют в процессе спиртового брожения?

3. Какую роль выполняет спиртовое брожения в хлебопечении

Рекомендуемая литература

[6] с.79-90. [12] с, 58-100,