10 Фактор VI

Фактор VI — акселерин, активная форма фактора V. В связи с тем, что фактором свертывания считается только неактивная, проферментная форма протеина, акселерин ис­ключен из номенклатуры факторов свертывания.

Фактор VII

Фактор VII (конвертин), элемент протромбинового комплекса, является главным фактором внешней системы свертывания, который активируется при взаимодействии со своим кофактором - тканевым фактором или тканевым тромбопластином. Тканевый фак­тор, липопротеин, связан с мембранами и присутствует во многих тканях, это интеграль­ный мембранный рецептор ф. VII. На эндотелии тканевый фактор не присутствует, но со­держится на фибробластах и перицитах и вступает в контакт с кровью при повреждении эндотелия. Комлекс тканевый фактор-ф. VIIа активируют ф. IX и X и вызывают быстрое образование тромбина. После прекращения внешнего стимула активация внешнего пути свертывания прекращается путем связывания ф. Ха с ингибитором тканевого фактора и с ф. VIIа.

Фактор VIII

Фактор VIII, гликопротеин, циркулирует в плазме крови в неактивной форме в ви­де комплекса с фактором Виллебранда, который защищает фактор VIII от деградации и стабилизирует его. В отсутствии фактора Виллебранда ф. VIII существует в плазме лишь несколько минут, а в комплексе с фактором Виллебранда - 8-12 ч. После активации тром­бином ф. VIIIа отделяется от ф. Виллебранда.

Фактор VIIIа усиливает активацию ф. X в 10 000 раз.

Функция ф. VIIIа заключается в том, что в качестве кофактора ф. IХа он активиру­ет ф. X и многократно ускоряет процесс свертывания плазмы крови.

Ген, регулирующий синтез ф. VIII, подвержен частым мутациям, что приводит к образованию функционально неполноценного фактора и к возникновению тяжелого на­следственного заболевания - гемофилии А, которая встречается у 1 из 10000 мужчин. За­болевание характеризуется спонтанными, нередко смертельными кровотечениями, крово­излияниями в суставы, ведущими к ранней инвалидности. Уже при снижении дефицитно­го фактора до 30% (норма - 50-200%) заболевание проявляется в скрытой форме и обна-

11 руживается после оперативных вмешательств в виде профузных кровотечений. Эти боль­ные в течение всей жизни нуждаются в заместительной терапии препаратами плазмы. Гемофилия А расценивается:

• как тяжелая - при уровне ф. VIII в пределах 0-1%;

• средней тяжести - при уровне ф. VIII в пределах 1 -5%; " легкая - при уровне ф. VIII в пределах 5-24%;

• скрытая - при уровне ф. VIII в пределах 24-49%.

В качестве антигемофильных лекарственных средств применяют криопреципитат, свежезамороженную плазму и различные концентраты ф. VIII, полученные из криопреци-питата или генно-инженерными методами.

Плазма свежезамороженная (СЗП) - это лекарственное средство, приготовленное из цельной крови или из плазмы, заготовленной плазмаферезом, и замороженное в такие сроки и при такой температуре, чтобы сохранялись в функциональном состоянии лабиль­ные факторы свертывания. Активность ф. VIII в СЗП должна быть не менее 0,7 МЕ/мл.

Криопреципитат - это препарат из свежезамороженной плазмы крови человека, представляющий собой сконцентрированную до объема 10-20 мл криоглобулиновую фракцию плазмы от одного донора. Криопреципитат должен содержать в одной дозе (10-20 мл) не менее 70 МЕ активности ф. VIII. Кроме ф. VIII, криопреципитат содержит при­меси (фибриноген, фактор Виллебранда, ф. ХIII, фибронектин), которые могут вызвать побочные реакции у реципиентов.

Концентраты ф. VIII - высокоочищенные препараты, получаемые из криопреци-питата с помощью ионообменной хроматографии или генно-инженерными методами, имеющие высокую удельную активность ф.VIII - до 100 МЕ/мг белка и выше.

Очевидно, что для достоверной диагностики гемофилии и при лечении больных чрезвычайно большое значение приобретает метод определения активности дефицитного фактора в плазме крови пациентов.

В настоящее время существуют 3 метода определения активности ф. VIII односта­дийный метод, двухстадийный метод и метод с хромогенным субстратом. Наиболее про­стой и наиболее широко распространенный одностадийный метод основан на проведении теста АЧТВ, двухстадийный метод основан на определении времени генерации тромбо-пластина и более сложен по исполнению. Метод с хромогенными субстратами - является непрямым методом, имеющим естественные ограничения.

12

Учитывая вышеизложенное, было решено использовать для исследований именно одностадийный метод определения активности ф. VIII в плазме крови человека.

В основу метода были положены принципы стандартизации, сформулированные в Национальном институте стандартов и контролей (NIВSС), Великобритания. Основные принципы стандартизации следующие:

• наличие стандартов;

• калибровка «подобное подобным»;

• независимость результатов от метода исследования;

• линейность и параллельность калибровочного графика и графика исследуемой плазмы, позволяющие уменьшить ошибку анализа;

• оценка случайной ошибки (методами математической статистики);

• учет фактора времени (одномоментный анализ калибратора и исследуемой плазмы).

За Международную единицу биологической активности ф. VIII принята актив­ность, присутствующая в 1,0 мл свежей нормальной плазмы. Основная трудность такого выражения активности - это большая вариабельность активности ф. VIII в нормальной популяции.

Разработка коммерческих препаратов концентрата ф. VIII привела к необходимо­сти создания эталона, относительно которого коммерческие препараты также могли быть стандартизованы.

Первый международный стандарт ф. VIII был создан в 1971 г. Этот стандарт был препаратом концентрата ф. VIII средней степени очистки и был предназначен для калиб­ровки коммерческих препаратов. Впоследствии этот стандарт несколько раз видоизменял­ся в зависимости от разработки новых методов очистки, и последний (88/804) был создан на основе технологии моноклональных антител.

Однако Международный стандарт в виде концентрата ф. VIII оказался непригод­ным для исследования активности ф. VIII в плазме, и для этой цели в 1982 г. был приго­товлен специальный стандарт плазмы с аттестованным содержанием ф. VIII (3 13 91/666), что соответствовало принципу "подобное подобным".