Методы окраски препаратов

Методы окраски препаратов

1. по Граму – дифференциальная окраска в зависимости от строения клеточной стенки

гр+ - толстостенные, клеточная стенка плотно прилегает к цитоплазматической мембране, 90% массы клеточной стенки составляет многослойный пептидогликан, пептидогликан пронизывают тейхоевые и липотейхоевые кислоты, белки

гр- - тонкостенные, между клеточной стенкой и цитоплазматической месбраной имеется периплазматическое пространство, слой пептидогликана тонкий (5-10% от массы клеточной стенки), в состав клеточной стенки также входят липопротеины, липиды, белки-порины, которые пронизывают всю клеточную стенку (клеточная стенка рыхлая)

ОКРАШИВАНИЕ:

• изготовление мазка

• генцианвиолет – 2-3мин

• раствор Люголя (KJ)

• спирт 96% – 30с

• промыть водой

• фуксин Пфейффера – 5мин

• промыть водой

• высушивание (фильтровальной бумагой)

Принцип метода: генцианвиолет + р-р Люголя дают образование нерастворимого в воде комплекса, который окрашивает клетку в сине-фиолетовый цвет;

гр+ (толстостенные)комплекс сохраняется и препятствует дальнейшему окрашиванию;

обработка фуксином окрашивает гр- микроорганизмы в красный цвет

2. по Романовскому-Гимзе – окраска на выявление капсулы (вегетативные тела бактерий темно-синие, капсулы розовые).

Фиксированный спиртом препарат кладут мазком вниз в чашку Петри на подставки из спичек. Готовят рабочий раствор краски Романовского-Гимзы (15-20 капель на 10 мл. дистиллированной воды), перемешивают и подливают под препарат, следя за тем чтобы все мазки были полностью смочены краской. Через 15-20 мин. препараты промывают водой и высушивают на воздухе.

3. по Циль-Нильсену – окрашивание кислотоустойчивых микроорганизмов

(микобактерии ярко-красные, все прочие бактерии синие).

Мазок фиксируют над пламенем, накрывают полосой фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый фуксин Циля и нагревают с появлением паров 3-5 мин, периодически проводя стекло над пламенем, но не доводя до кипения; при этом надо доливать краску на мазок. Препарату дают остыть, удаляют бумажку, промывают водой; обесцвечивают 5 %-ным раствором серной кислоты 15-20с, затем этиловым спиртом 5-10с промывают водой; докрашивают синькой Леффлера 3-5мин и, смыв краску, подсушивают препарат.

Принцип метода – кислотоустойчивые бактерии трудно воспринимают красителем, но при воздействии протравителя окрашиваются в красный цвет и уже не обесцвечиваются кислотой, некислотоустойчивые – в синий (легко окрашиваются фуксином, затем обесцвечиваются кислотой и воспринимают вторичную окраску синькой).

ПРОСТЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ

• Окраска метиленовой синькой

• Окраска фуксином Пфейффера

• Окраска карболовым генциаанвиолетом

СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ

• По Граму

• Метод Циль-Нильсена

• Метод Ауески

• М

  на выявление спор

  етод Мёллера

• Метод Златогорова

• Метод Пешкова

• Метод Михина

• М

  на капсулу

  етод Романовского-Гимза

• Метод Ольта

• По Ребигеру