Сумма антрагликозидов в пересчёте на глюкофрангулин а

Натрия карбоната раствор 5 %. 5,0 г натрия карбоната безводного растворяют в воде, доводят объем раствора водой до 100 мл и перемешивают. Срок годности раствора не более 30 сут при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

Железа(III) хлорида раствор (плотность 1,07 – 1,08). 20,0 г железа(III) хлорида растворяют в 100 мл воды, доводят водой до величины плотности 1,07 – 1,08 и перемешивают. Срок годности раствора не более 3 мес при хранении в хорошо укупоренной упаковке, в прохладном защищенном от света месте. Магния ацетата раствор спиртовой 0,5 %. 0,5 г магния ацетата растворяют в спирте 96 %, доводят объем раствора тем же спиртом до 100 мл и перемешивают. Срок годности раствора не более 2 мес при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

Для анализа используется эфир диэтиловый квалификации «химически чистый». Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 0,25 г (точная навеска) сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 25 мл спирта 80 %, взвешивают с погрешностью ± 0,01 г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры колбу вновь взвешивают и доводят до первоначальной массы спиртом 80 %. Содержимое колбы фильтруют через бумажный складчатый фильтр. 5,0 мл фильтрата помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл воды и 0,10 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и осторожно взбалтывают в течение 2 – 3 мин с 20 мл петролейного эфира (х.ч.). После полного расслоения фаз нижний водный слой переносят в стакан вместимостью 100 мл, верхний эфирный слой переносят в колбу вместимостью 250 мл. Далее водный слой из стакана переносят в ту же делительную воронку и аналогичным образом обрабатывают еще 4 раза петролейным эфиром (порциями по 20 мл). Водный слой переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл. Объединенные петролейные извлечения переносят обратно в делительную воронку и промывают водой 2 раза (порциями по 15 мл), водный слой помещают в ту же мерную колбу вместимостью 100 мл, оставляя темные хлопья в эфирном слое. В мерную колбу с объединенными водными извлечениями прибавляют 5 мл натрия карбоната раствора 5 % и доводят объем раствора водой до метки (раствор А). 50,0 мл раствора А пипеткой переносят в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 20 мл железа(III) хлорида раствора (плотность 1,07 – 1,08), присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане при периодическом перемешивании в течение 20 мин, погружая колбу в воду бани выше уровня раствора в колбе. Затем в колбу прибавляют 2 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и продолжают нагревать в течение 20 мин, часто встряхивая, до растворения осадка. Колбу охлаждают, и ее содержимое переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл, колбу ополаскивают 30 мл эфира, присоединяют к основному раствору в делительной воронке и осторожно взбалтывают в течение 2 – 3 мин. После полного расслоения фаз нижний водный слой переносят в ту же колбу вместимостью 250 мл, а эфирный слой собирают в колбу вместимостью 100 мл. Извлечение повторяют еще 2 раза аналогичным образом. Объединенные эфирные извлечения переносят обратно в делительную воронку и промывают 2 раза водой (по 15 мл), водный слой отбрасывают. Эфирные извлечения фильтруют через воронку с бумажным фильтром, содержащим 3,0 г натрия сульфата безводного, в мерную колбу вместимостью 100 мл. Воронку с натрия сульфатом безводным промывают эфиром и доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (раствор Б).

Через 60 мин 20,0 мл раствора Б пипеткой переносят в низкий стеклянный стакан или бюкс вместимостью 100 мл и сушат досуха в вытяжном шкафу. Сухой остаток полностью растворяют в 10 мл магния ацетата спиртового раствора 0,5 % (раствор В). Оптическую плотность раствора В измеряют на спектрофотометре при длине волны 515 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения спирт 96%.

Содержание суммы антрагликозидов в пересчете на глюкофрангулин А в абсолютно сухом сырье в процентах (Х):

где А — оптическая плотность раствора В;

– удельный показатель поглощения глюкофрангулина А при длине волны 515 нм, равный 204;

а — навеска сырья, г;

W – влажность сырья, %.

20. Предложите метод количественного определения содержания суммы агликонов антраценового ряда в пересчете на хризофановую кислоту в листьях сенны, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания. Трачук Кирилл

Количественное определение.

Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: суммы агликонов антраценового ряда в пересчете на хризофановую кислоту — не менее 1,35 %.

Приготовление растворов.

Железа (III) хлорида раствор (плотность 1,07 – 1,08) (9 – 10%). 20,0 г железа (III) хлорида растворяют в 100 мл воды, доводят водой до плотности 1,07 – 1,08 и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес при хранении в хорошо укупоренной упаковке, в прохладном защищенном от света месте.

Щелочно-аммиачный раствор. 50,0 г натрия гидроксида растворяют при перемешивании в 870 мл воды, после охлаждения прибавляют 80 мл аммиака раствора концентрированного 25 % и перемешивают. Срок годности раствора 1 сут.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 0,40 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл воды, перемешивают 10 мин и нагревают с обратным холодильником в кипящей водяной бане (уровень жидкости в колбе должен находиться на уровне поверхности воды) в течение 20 мин при периодическом перемешивании; после охлаждения под струей воды дают отстояться в течение 10 мин и фильтруют через бумажный складчатый фильтр.

25,0 мл фильтрата переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл и дважды извлекают эфиром (порциями 40 и 20 мл). Фильтрат после экстракции помещают в колбу со шлифом вместимостью 200 – 250 мл. Объединенные эфирные извлечения дважды промывают водой по 10 мл. Воду отделяют и присоединяют к фильтрату в колбе со шлифом вместимостью 200 – 250 мл. Эфирные извлечения отбрасывают. Колбу с объединенными водными извлечениями нагревают на водяной бане до исчезновения запаха эфира, прибавляют 0,1 г натрия гидрокарбоната, 10 мл железа(III) хлорида раствора (плотность 1,07 – 1,08; 9 – 10 %) присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане при периодическом перемешивании в течение 20 мин; затем прибавляют 5 мл серной кислоты раствора 50 % и продолжают нагревать еще 30 мин.

После охлаждения раствор переносят в делительную воронку вместимостью 300 мл, колбу ополаскивают 20 мл воды, затем 75 мл эфира; промывную воду и эфир присоединяют к основному раствору в делительной воронке и перемешивают в течение 5 мин. После разделения эфирный слой переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл, оставляя темные хлопья в водном слое; из водного раствора дважды повторяют извлечение эфиром (порциями 30 и 20 мл). Объединенные эфирные извлечения фильтруют через стеклянный фильтр (ПОР 100), затем дважды промывают водой по 30 мл. К эфирному извлечению прибавляют 100 мл щелочно-аммиачного раствора и осторожно перемешивают в течение 5 мин. После отстаивания прозрачный водный слой сливают в мерную колбу вместимостью 250 мл, следя за тем, чтобы хлопья промежуточного слоя оставались в воронке. К эфирному извлечению прибавляют 20 мл воды и 3 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, воронку охлаждают под струей воды, смесь перемешивают в течение 2 мин и после разделения слоев водный слой сливают в ту же мерную колбу. Эфирное извлечение еще раз перемешивают с 50 мл щелочно-аммиачного раствора в течение 2 мин и после отстаивания водный слой сливают в ту же мерную колбу. Объединенные щелочно-аммиачные извлечения доводят щелочно-аммиачным раствором до метки и перемешивают (раствор А).

Через 15 мин измеряют оптическую плотность раствора А на спектрофотометре при длине волны 523 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения щелочно-аммиачный раствор.

Содержание суммы агликонов антраценового ряда в пересчете на хризофановую кислоту определяют одним из способов.

Расчет с использованием калибровочного графика. Концентрацию суммы агликонов антраценового ряда в растворе в пересчете на хризофановую кислоту определяют по калибровочному графику, построенному по растворам кобальта хлорида.

Построение калибровочного графика. Калибровочный график строят по растворам кобальта хлорида, исходя из того, что кобальта хлорида раствор 1 % по оптической плотности соответствует 4,3 мг хризофановой кислоты в 1 л щелочно-аммиачного раствора. Готовят кобальта хлорида растворы 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5 и 4 %, которые имеют поглощение, соответствующее концентрациям хризофановой кислоты 4,3; 6,45; 8,6; 10,75; 12,9; 15,05 и 17,2 мг в 1 л. Измеряют оптическую плотность этих растворов на спектрофотометре при длине волны 523 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду. По оси ординат откладывают значения оптической плотности, а по оси абсцисс – концентрацию производных антрацена в миллиграммах на 1 л.

Содержание суммы агликонов антраценового ряда в пересчете на хризофановую кислоту в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где

С – концентрация суммы агликонов антраценового ряда, найденная по калибровочному графику, в мг на 1 л;

а – навеска сырья, г;

W – влажность сырья, %.

Допускается содержания суммы агликонов антраценового ряда в пересчете на хризофановую кислоту вычислять с использованием величины удельного показателя поглощения по формуле:

где

А – оптическая плотность раствора А;

• — удельный показатель поглощения хризофановой кислоты при длине волны 523 нм, равный 432;

а – навеска сырья, г;

W – влажность сырья, %.

21. Предложите метод количественного определения содержания дубильных веществ в пересчете на танин в коре дуба, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания (см. 22 вопрос, там тоже танин, но в змеевике, аналогичная методика)

22. Предложите метод количественного определения содержания дубильных веществ в пересчете на танин в корневищах змеевика, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

Метод: окислительно-восстановительное титрование

2 г навески растения, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, растворяют в 250 мл воды и кипятят 30 минут, затем охлаждают и фильтруют. Фильтрат разбавляют водой до 250 мл (общий объем водного извлечения), отбирают 25 мл полученного раствора, который смешивают с 525 мл воды и с 25 мл индикатора (индигосульфокислота), затем титруют перманганатом до появления золотисто-желтого окрашивания.

Далее проводят контрольный опыт, где титруют перманганатом натрия раствор, содержащий 525 мл воды и 25 мл индикатора, до появления золотисто-желтого окрашивания.

Количество дубильных веществ (X) в пересчете на танин определяют по формуле:

, где

V – объем калия перманганата раствора 0,02 М, израсходованного на титрование водного извлечения, мл;

V₁ — объем калия перманганата раствора 0,02 М, израсходованного на титрование в контрольном опыте, мл;

0,004157 – количество дубильных веществ, соответствующее 1 мл калия перманганата раствора 0,02 М (в пересчете на танин), г;

a – навеска сырья или лекарственного растительного препарата, г;

W – влажность лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата, %;

250 – общий объем водного извлечения, мл;

25 – объем водного извлечения, взятого для титрования, мл.

23. Предложите метод количественного определения содержания суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин в листьях красавки, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

Цельное и измельченное сырье: сумма алкалоидов в пересчете на гиосциамин – не менее 0,35 % и не более 0,4 %.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 10,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл эфира, 7 мл аммиака раствора и взбалтывают в течение 1 ч. Эфирное извлечение быстро фильтруют через вату в колбу вместимостью 200 мл, прикрывая воронку часовым стеклом. К фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично взбалтывают и оставляют в покое до просветления эфирного слоя, после чего 90 мл эфирного извлечения переносят в делительную воронку вместимостью 200 мл. Цилиндр дважды ополаскивают эфиром порциями по 10 мл, которые присоединяют к эфирному извлечению в делительной воронке (раствор 1).

Из эфирного извлечения алкалоиды экстрагируют последовательно 20, 15, 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 1 % до полного их извлечения (проба с реактивом Майера), каждый раз фильтруя полученное извлечение через смоченный водой бумажный фильтр диаметром 5 см во вторую делительную воронку вместимостью 200 мл. Фильтр промывают дважды хлористоводородной кислоты раствором 1 % по 5 мл, присоединяя промывную жидкость к общему кислотному извлечению.

Кислотное извлечение подщелачивают раствором аммиака до щелочной реакции по фенолфталеину и алкалоиды извлекают последовательно 20, 15, 10 мл хлороформа, взбалтывая по 3 мин каждый раз, и хлороформное извлечение фильтруют в колбу для отгонки вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, на который предварительно помещают 4 – 5 г свежепрокаленного натрия сульфата безводного, смоченного хлороформом. Фильтр промывают хлороформом дважды по 5 мл (раствор 2). Хлороформ отгоняют на роторном испарителе до объема около 1 – 2 мл, остаток хлороформа в колбе удаляют продуванием воздуха до полного исчезновения запаха растворителя. Сухой остаток растворяют в 15 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,02 М при подогревании на водяной бане при температуре 60 °С, прибавляют 2 капли метилового красного раствора спиртового и 1 каплю метиленового синего, и избыток хлористоводородной кислоты оттитровывают натрия гидроксида раствором 0,02 М до появления зеленой окраски. Содержание суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) рассчитывают по формуле:

где:

V – объем натрия гидроксида раствора 0,02 М, пошедшего на титрование, мл;

0,005780 – количество алкалоидов в пересчете на гиосциамин, соответствующее 1 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,02 М;

a – навеска сырья, соответствующая объему эфирного извлечения, взятого на анализ, г;

W – влажность сырья, %

24. Предложите метод количественного определения содержания суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин в листьях белены черной, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин – не более 0,05 %.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 10,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 250 мл, приливают 7 мл аммиака раствора концентрированного 25 %, 150 мл эфира и в течение 1 ч смесь энергично взбалтывают. Эфирное извлечение быстро фильтруют через вату в колбу вместимостью 200 мл, прикрывая воронку часовым стеклом. К фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично взбалтывают и оставляют в покое до просветления эфирного слоя; после чего отмеривают с помощью мерного цилиндра 90 мл эфирного извлечения в делительную воронку вместимостью 200 мл. Цилиндр дважды споласкивают эфиром порциями по 10 мл, которые присоединяют к отмеренному эфирному извлечению.

Из эфирного извлечения алкалоиды извлекают последовательно 20, 15, 10 мл хлористоводородной кислоты раствором 1 % до полного их извлечения (проба с реактивом Майера), каждый раз фильтруя через смоченный водой фильтр (диаметром 5 см) во вторую делительную воронку такой же вместимости. Фильтр промывают дважды по 5 мл хлористоводородной кислоты раствором 1 %, присоединяя промывную жидкость к общему кислотному извлечению.

Кислотное извлечение подщелачивают аммиака раствором 10 % до щелочной реакции по фенолфталеину и алкалоиды извлекают последовательно 20, 15, 10 мл хлороформа, взбалтывая по 3 мин. Каждую порцию хлороформного извлечения фильтруют через бумажный фильтр, на который предварительно помещают 4 – 5 г натрия сульфата безводного свежепрокаленного, смоченного хлороформом. Фильтрование производят в колбу для отгонки вместимостью 100 мл. Фильтр промывают хлороформом дважды по 5 мл. Хлороформ отгоняют на водяной бане до 1 -2 мл, остаток хлороформа в колбе удаляют продуванием воздуха до полного исчезновения запаха растворителя. Сухой остаток растворяют в 15 мл 0,02 М раствора хлористоводородной кислоты при нагревании на водяной бане, избыток которой оттитровывают 0,02 М раствором натрия гидроксида до появления желтой окраски (индикатор – метиловый красный). 1 мл 0,02 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 0,005780 г алкалоидов (считая на гиосциамин), которых в белены черной листьях должно быть не более 0,05 %. Содержание суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где V₁ – объем 0,02 М раствора натрия гидроксида, пошедшего на титрование, мл; 0, 005780 – количество суммы алкалоидов, соответствующее 1 мл 0,02 М раствора хлористоводородной кислоты, г; К - поправочный коэффициент к титру 0,02 М раствора натрия гидроксида; а – навеска сырья, соответствующая отмеренному объему эфирного извлечения, г; W – влажность сырья, %.

Примечание. В случае завышенного содержания суммы алкалоидов (в пересчете на гиосциамин в %) расчет количества лекарственного растительного сырья, необходимого для производства лекарственного препарата следует проводить по формуле, приведенной в ОФС «Лекарственное растительное сырье. Фармацевтические субстанции растительного происхождения».

25. Предложите метод количественного определения содержания суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин в листьях дурмана обыкновенного, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

Количественное определение. Цельное и измельченное сырье: сумма алкалоидов в пересчете на гиосциамин – не менее 0,20 % и не более 0,25 %

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 10,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл эфира, 7 мл аммиака раствора и взбалтывают в течение 1 ч. Эфирное извлечение быстро фильтруют через вату в колбу вместимостью 200 мл, прикрывая воронку часовым стеклом. К фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично взбалтывают и оставляют в покое до просветления эфирного слоя, после чего 90 мл эфирного извлечения переносят в делительную воронку вместимостью 200 мл. Цилиндр дважды ополаскивают эфиром порциями по 10 мл, которые присоединяют к эфирному извлечению в делительной воронке (раствор А). Из эфирного извлечения алкалоиды экстрагируют последовательно 20, 15, 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 1 % до полного их извлечения (проба с реактивом Майера), каждый раз фильтруя полученное извлечение через смоченный водой бумажный фильтр диаметром 5 см во вторую делительную воронку вместимостью 200 мл. Фильтр промывают дважды хлористоводородной кислоты раствором 1 % по 5 мл, присоединяя промывную жидкость к общему кислотному извлечению. Кислотное извлечение подщелачивают раствором аммиака до щелочной реакции по фенолфталеину и алкалоиды извлекают последовательно 20, 15, 10 мл хлороформа, взбалтывая по 3 мин каждый раз, и хлороформное извлечение фильтруют в колбу для отгонки вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, содержащий 4 – 5 г натрия сульфата безводного свежепрокаленного, смоченного хлороформом. Фильтр промывают хлороформом дважды по 5 мл (раствор Б).

Хлороформ отгоняют на роторном испарителе до объема около 1 – 2 мл, остаток хлороформа в колбе удаляют продуванием воздуха до полного исчезновения запаха растворителя.

Сухой остаток растворяют в 15 мл 0,02 М раствора хлористоводородной кислоты при нагревании на водяной бане при температуре 60 °С, прибавляют 2 капли метилового красного раствора спиртового и 1 каплю метиленового синего, и избыток хлористоводородной кислоты титруют 0,02 М раствором натрия гидроксида до появления зеленой окраски.

Содержание суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где 𝑉 – объем 0,02 М раствора натрия гидроксида, пошедшего на титрование, мл; 0,005780 – количество алкалоидов в пересчете на гиосциамин, соответствующее 1 мл 0,02 М раствора хлористоводородной кислоты; 𝑎𝑎 – навеска сырья, соответствующая объему эфирного извлечения, взятого на анализ, г; 𝑊 – влажность сырья, %.

Примечание. В случае завышенного содержание суммы алкалоидов (в пересчете на гиосциамин в %) расчет количества лекарственного растительного сырья, необходимого для производства лекарственного препарата, следует проводить по формуле, приведенной в ОФС «Лекарственное растительное сырье. Фармацевтические субстанции растительного происхождения».

26. Предложите метод количественного определения содержания берберина бисульфата в корнях барбариса, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

Количественное содержание берберина бисульфата осуществляется спектрофотометрическим методом. Содержание суммы алкалоидов в пересчете на берберин в настойке должно быть не менее 0,18 и не более 0,60 %.

2,00 г испытуемой настойки помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и разбавляют 0,05 М раствором кислоты серной в метаноле (испытуемый раствор). Оптическую плотность испытуемого раствора измеряют сразу после разбавления настойки на спектрофотометре при длине волны 425 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения используют 0,05 М раствор кислоты серной в метаноле. Содержание алкалоидов в пересчете на берберин вычисляют по формуле: Содержание суммы алкалоидов в настойке в пересчете на берберин процентах (Х), вычисляют с использованием удельного показателя поглощения берберина А1%1см по формуле:

, где

A – оптическая плотность испытуемого раствора при 425 нм; 𝑎 – навеска настойки, г; 1% А1см – удельный показатель поглощения берберина при длине волны 425 нм, равный 163.

27. Предложите метод количественного определения содержания эфирного масла в листьях мяты перечной, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

В соответствии с требованиями ОФС “Определение содержания масла в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах” используется 2 метод, описанный в Государственной Фармакопее, потому что эфирное масло в перечной мяте термолабильно.

Используют прибор, изображенный на рис. Прибор для определения эфирного масла состоит из круглодонной колбы (1) вместимостью 1000 мл, паропроводной изогнутой трубки (2), холодильника (3), градуированной трубки-приемника (4), оканчивающейся внизу спускным краном (5) и сливной трубкой (9). В верхней части приемника имеется расширение (6) с боковой трубкой (7), которая служит для внесения растворителя эфирного масла в дистиллят и сообщения внутренней части прибора с атмосферой. Колба и паропроводная трубка соединяются через шлиф. Градуированная трубка имеет цену деления 0,02 мл. Заполнение прибора водой производится через спускной кран при помощи резинового шланга (8) с внутренним диаметром 4,5-5 мм, длиной 450 мм и с присоединенной к нему воронкой диаметром 30-40 мм.

Перед каждым определением через прибор пропускают пар в течение 15-20 мин. После 6 -8 определений прибор необходимо промыть последовательно ацетоном и водой. Навеску листьев измельченных листьев перечной мяты (30,0 г, сырье измельчили до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм) помещают в колбу, приливают 500 мл воды, колбу соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой градуированную и сливную трубки через кран при помощи резинового шланга, оканчивающегося воронкой.

Колбу с содержимым нагревают и кипятят с интенсивностью, при которой скорость стекания дистиллята составляет 60 – 65 капель в минуту в течение 1 часа. Через 5 мин после окончания перегонки открывают кран, постепенно спуская дистиллят так, чтобы эфирное масло заняло градуированную часть трубки-приемника, и еще через 5 мин измеряют объем эфирного масла. Содержание эфирного масла в абсолютно сухом сырье в массообъемных процентах (Х) вычисляют по формуле:

где V – объем эфирного масла, мл; а – навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г; W – влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %.

28. Предложите метод количественного определения содержания суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на кислоту валереновую в корневищах с корнями валерианы лекарственной, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

Фосфорная кислота концентрированная раствор 5,0 г/л в воде. Аликвоту фосфорной кислоты концентрированной, взятую по массе или по объему, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят водой для хроматографии до метки и перемешивают. При необходимости проводят дегазацию и фильтрацию через мембранный фильтр с размером пор не более 0,45 мкм.

Раствор СО валереновой кислоты. Около 0,005 г (точная навеска) СО валереновой кислоты растворяют в спирте 96 % в мерной колбе вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 96 % до метки и перемешивают (раствор А).

1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом 96 % до метки и перемешивают. Раствор используют без фильтрования (раствор Б). Срок годности раствора 3 мес при хранении в хорошо укупоренной упаковке, в прохладном защищенном от света месте.

Проверка пригодности хроматографической системы.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются следующие условия:

— эффективность хроматографической колонки должна быть не менее 4000 теоретических тарелок для пика ацетоксивалереновой кислоты и не менее 15000 для пика валереновой кислоты;

— коэффициент симметрии для пиков ацетоксивалереновой и валереновой кислот должен быть не менее 0,8 и не более 1,5.

Раствор для хроматографии:

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 1,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл спирта 96 %, присоединяют к обратному холодильнику и кипятят в течение 45 мин на водяной бане. Охлажденное до комнатной температуры извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят спиртом 96 % до метки и тщательно перемешивают.

Около 2 — 3 мл полученного извлечения фильтруют через мембранный нейлоновый фильтр (размер пор 0,45 мкм), отбрасывая 1 – 2 мл фильтрата (испытуемый раствор).

Условия хроматографирования

Колонка размером 125 × 4,0 мм, сорбент октадецилсилилсиликагель (С18), 5 мкм

Предколонка размером 4 × 4 мм, сорбент октадецилсилилсиликагель (С18), 5 мкм

ПФ А — ацетонитрил;

В — фосфорной кислоты концентрированной раствор 5,0 г/л в воде.

Хроматографируют раствор СО валереновой кислоты, получая не менее 3 хроматограмм. Результаты считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».

Хроматографируют попеременно испытуемый раствор и раствор СО валереновой кислоты, получая не менее 3 хроматограмм. Расчет содержания суммы сесквитерпеновых кислот проводят методом внешнего стандарта. Обсчету подлежат основной пик валереновой кислоты и пик с относительным временем удерживания (по валереновой кислоте).

Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

S – площадь пика валереновой и ацетоксивалереновой кислот на хроматограмме испытуемого раствора;

а – навеска сырья, г;

а_о – навеска СО валереновой кислоты, г;

Р – содержание основного вещества в СО валереновой кислоты, %;

S_о – площадь пика на хроматограмме раствора СО валереновой кислоты

W – влажность сырья, %.

29. Предложите метод количественного определения содержания суммы алкалоидов в пересчете на термопсин в траве термопсиса ланцетного, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания.

Количественное определение. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 10 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл хлороформа и 5 мл концентрированного раствора аммиака, закрывают пробкой и встряхивают на вибрационном встряхивателе в течение 2 ч или оставляют при комнатной температуре на 15ч, после чего встряхивают еще 30 мин.

Хлороформное извлечение фильтруют через вату. 50 мл фильтрата переносят в колбу вместимостью 100 мл и хлороформ отгоняют до объема 1-2 мл. Оставшийся хлороформ удаляют продуванием воздуха.

К остатку прибавляют пипеткой 2 мл раствора натра едкого (0,1 моль/л) и растирают стеклянной палочкой до полного исчезновения комочков, затем прибавляют пипеткой 8 мл воды и перемешивают 2-3 мин. К содержимому прибавляют пипеткой 10 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,1 моль/л), осторожно перемешивают и оставляют на 8-10 мин, затем встряхивают на вибрационном встряхивателе 8-10 мин и фильтруют через тройной бумажный складчатый фильтр диаметром 7 см.

10 мл фильтрата переносят в колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл воды, 2 капли раствора метилового красного и оттитровывают избыток кислоты раствором натра едкого (0,1 моль/л) до появления желтого окрашивания.

Параллельно проводят контрольный опыт. В колбу вместимостью 50 мл помещают 1 мл раствора натра едкого (0,1 моль/л), прибавляют 4 мл воды и 5 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,2 моль/л), перемешивают, прибавляют 2 капли раствора метилового красного и оттитровывают избыток кислоты раствором натра едкого (0,1 моль/л) до появления желтого окрашивания.

Содержание суммы алкалоидов в пересчете на термопсин и абсолютно сухое сырье в процентах (X} вычисляют по формуле:

где 0,0244 - количество алкалоидов в пересчете на термопсин, соответствующее 1 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,1 моль/л), в граммах; V 1 - объем раствора натра едкого (0,1 моль/л), пошедшего на титрование контрольного опыта, в миллилитрах; V 2 - объем раствора натра едкого (0,1 моль/л), пошедшего на титрование испытуемого раствора, в миллилитрах; m - масса сырья в граммах; W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Примечание. При содержании алкалоидов более 1,5% для приготовления лекарственных препаратов траву термопсиса берут в соответственно меньшем количестве.

30. Предложите метод количественного определения содержания суммы алкалоидов в пересчете на хелидонин в траве чистотела большого, учитывая свойства данной группы БАВ и требования Государственной Фармакопеи XIV издания:

1. Экстракция уксусной кислотой: около 0,75 г (точная навеска) сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 500 мл, прибавляют 200 мл уксусной кислоты разведенной 12 % и нагревают на кипящей водяной бане 30 мин при периодическом перемешивании

2. Фильтрование: после охлаждения содержимое колбы с помощью уксусной кислоты разведенной 12 % количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем раствора тем же растворителем до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 20 мл фильтрата.

3. Экстракция органическим растворителем метиленхлоридом: 25,0 мл фильтрата переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл, в которую затем последовательно добавляют 6 мл аммиака раствора концентрированного 25 % и 100 мл метиленхлорида и встряхивают в течение 30 мин. После расслоения нижний (органический) слой отделяют.

4. Выпаривание на роторном испарителе: 50 мл органического слоя помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл и выпаривают при температуре 40 °С на роторном испарителе в вакууме досуха.

5. Сухой остаток растворяют в 2 – 3 мл спирта 96 %, слегка нагревая колбу в горячей воде и переносят раствор в мерную колбу вместимостью 25 мл.

6. Остатки из круглодонной колбы забирают с помощью серной кислоты (?): ополаскивают круглодонную колбу 2 раза по 10 мл серной кислоты разведенной 9,8 % и переносят в ту же мерную колбу, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (испытуемый раствор А).

7. Реакция хелидонина с Na солью хромотроповой кислоты в кислой среде: 5,0 мл испытуемого раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл хромотроповой кислоты натриевой соли раствора 1 % в серной кислоте концентрированной, закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Доводят объем раствора серной кислотой концентрированной до метки и перемешивают (испытуемый раствор Б).

8. Готовят раствор сравнения – это просто серная и хромотроповая кислоты: аналогичным образом готовят раствор сравнения в мерной колбе вместимостью 25 мл, который состоит из 5 мл серной кислоты разведенной 9,8 % и 5 мл хромотроповой кислоты натриевой соли раствора 1 % в серной кислоте концентрированной. Колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают, доводят объем раствора серной кислотой концентрированной до метки и снова перемешивают.

9. Все доводим до кондиции: оба раствора помещают на кипящую водяную баню на 20 мин. Затем охлаждают до комнатной температуры и, при необходимости, доводят объем раствора серной кислотой концентрированной до метки, перемешивают.

10. Спектрофотометрия: измеряют оптическую плотность испытуемого раствора Б на спектрофотометре при длине волны 570 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. Содержание суммы алкалоидов в пересчете на хелидонин в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

31. Изучите информацию по листьям вахты трехлистной по учебнику «Лекарственные растения Государственной Фармакопеи» том. 1и структурные формулы логанина и сверозида (по формульной методичке):

В качестве сырья заготавливают листья. Заготавливают только вполне развитые листья после цветения, летом. Обрывают листья с коротким остатком черешка. Не следует выдергивать растения с корневищем.

Листья сушат в сушилках при температуре 45—50°.

Химический состав. Листья содержат горькие гликозиды (логанин и сверозид), флавоноиды, дубильные вещества.

Качественные реакции: ТСХ – экстракт из листьев на первую дорожку и на вторую стандартный образец 1% рутина в 95% спирте. Элюент – уксусная кислота. Затем хроматограмму опрыскивают 2% спиртовым раствором алюминия хлорида, сушат. На уровне пятна-свидетеля должны появиться два пятна зеленовато-желтого цвета (флавонолы).

Числовые показатели. Цельное сырьё: суммы флавонолов в пересчете на рутин не менее 1%; влажность не более 14%; золы общей не более10%; золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более 2%; пожелтевших, побуревших и почерневших листьев не более 5%; листьев с черешками длиннее 3 см не более 8%; отдельных черешков не более 3%; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 0,5%.

Измельчённое сырьё: Суммы флавонолов в пересчете на рутин не менее 1%; влажность не более 14%; золы общей не более 10%; золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более 2%; пожелтевших, побуревших и почерневших кусочков листьев не более 5%; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, не более10%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, не более 5%; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 0,5%

Количественное определение.

1. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

2. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в пакет из фильтровальной бумаги и обрабатывают хлороформом в аппарате Сокслета в течение 14 ч до обесцвечивания (20 сливов).

3. Пакет высушивают на воздухе до исчезновения запаха хлороформа.

4. Навеску количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл 70% спирта и нагревают 30 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником.

5. Извлечение отфильтровывают в колбу вместимостью 50мл, избегая попадания частиц сырья на фильтр.

6. Экстракцию повторяют дважды порциями по 10 мл спирта.

7. Полученные извлечения объединяют, упаривают на водяной бане при температуре 70°С под вакуумом до объема 6—7 мл, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора 95% спиртом до метки и перемешивают (раствор А).

8. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл 0,5% раствора стрептоцида в 10% растворе серной кислоты, прибавляют 2 мл 0,2% раствора натрия нитрита, взбалтывают 2 мин, прибавляют 1 мл раствора А и 1 мл 10% раствора натра едкого, взбалтывают 1 мин и доводят объем раствора водой до метки (раствор Б).

9. Через 15 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны около 432 нм.

10. В качестве раствора сравнения используют раствор А, разбавленный 95% спиртом в 25 раз (без добавления реактивов).

11. По калибровочному графику находят концентрацию рутина в миллиграммах в 1 мл.

12. Содержание суммы флавонолов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

Фармакологическая группа и препараты. Измельченные листья вахты трехлистной используются в виде настоя как горечь (средство для возбуждения аппетита и желчегонное). Входит в состав сборов: желчегонного, успокоительного. На производстве используется для получения комплексной горькой настойки.