12. В-лимфоциты. Характеристика. Основные маркёры. В-клеточный-рецептор. Методы определения содержании м функциональной активности в-лммфоцмт©в.

В-лимфоциты называются так потому, что они впервые выявлены у птиц в специальном центральном органе иммунитета, который называется "сумка Фабрициуса" (bursa of Fabricius) и в котором они проходят стадию созревания. У животных данный орган отсутствует, и ранние стадии созревания В-лимфоциты проходят в костном мозге (bone marrow). Таким образом, термин "В- лимфоцит" обусловлен названием сумки Фабрициуса или костного мозга.

В- лимфоцитами являются лимфоциты, способные синтезировать антитела. Большинство образо­ванных в костном мозге пре-В- лимфоцитов (> 95%) погибают там же в результате процесса селекции клеток. Зрелые В-лимфоциты из костного мозга мигрируют в кровь, а затем во вторичные лимфоидные органы (селезенку, лимфатические узлы, лимфоидные ткани желудочно-кишечного тракта и слизис­тых). Они имеют антигенспецифический В-клеточкый рецептор (ВКР) в виде мембраносвязанных мо­лекул антител, а также ряд поверхностных CD антигенов и рецепторов.

В-лимфоциты могут узнавать нативный антиген в свободном состоянии. Взаимодействие антигена с В-клеточным антигенспецифическим рецептором приводит к активации В-лимфоцитов и их развитию(дифференцировке) в эффекторные клетки, специализирующиеся в биосинтезе антител. Большинство В-лимфоцитов периферической крови экспрессирует на поверхности клетки два изотипа им­муноглобулинов- IgM и IgD. Очень небольшое количество циркулирующих клеток экспрессирует им­муноглобулины G, А или Е изотопов.

Характеристика CD антигенов В- лимфоцитов

CD 19]

CD20 | основные дифференцировочные и идентификационные маркеры

CD22J

CD21 рецептор для СЗд фрагмента системы комплемента

CD 23 рецептор для Fc фрагмента lgE

CD25 рецептор для ИЛ 2

CD32 рецептор для Fc фрагмента IgG

CD35 рецептор для СЗб и С4б белков комплемента

CD 45RB + участие в трансдукции сигнала

CD 49d + рецептор для связывания молекул адгезии -VCAM-1

CD 71 + рецептор для трансферрина

CD 74 + антиген II класса гистосовместимости

CD антигены выполняют три основные функции: а) рецепция молекул цитокинов и адгезинов; б) передача внутриклеточного сигнала; в) осуществление клеточно-клеточных взаимодействий. В-лим­фоциты человека способны связывать эритроциты мыши и образовывать с ними розетки (Вм-розетки), а также формировать розетки с эритроцитами, сенсибилизированными молекулами антител (IgG) и молекулами СЗб фрагмента системы комплемента, что используется в лабораторной практике. Эти свойства совместно с экспрессией CD 5 молекул позволяют выявить субпопуляцию В-лимфоцитов, иммуноглобулиновый репертуар которых комплементарен аутоантигенам, включая ДНК, Fc фрагмент IgG, фосфолипиды и компоненты цитоскелета, и они играют существенную роль в развитии аутоиммунных процессов. В периферической крови процент В-лимфоцитов составляет 10 -15, в лимфатических узлах - 20-25 и в селезенке - 40-45.

Антигекраспознающий В-клеточный рецептор В-линфоцитов (BcR - англ. B-cel I Receptor) построен из молекулы мембранного иммуноглобулина (mlg, состоящий из двух одинаковых тяжелых Н- и двух одинаковых легких - L-цепеи) и двух молекул CD79 (Iga, IgP) - BcR имеет трансмембранные и внутрицитоплазматические сегменты, передающие внутриклеточные сигналы. Исследование количества и функционального состояния В-лимфоцитов В-клетки обнаруживаются в периферической крови по их рецепторному аппарату, а именно:

а) по наличию рецепторов к иммуноглобулинам и 3-ей фракции комплемента - реакция ЕАС-розеткообразования;

б) по наличию иммуноглобулиновых рецепторов - реакция иммунофлюоресценцяи ;

в) по наличию рецепторов к эритроцитам мыши - реакция МЕ-розеткообразования. а) Реакция ЕАС-роэеткообразования ставится в 2 этапа: вначале

готовят реагент, состоящий из эритроцитов быка, антител к ним и комплемента, затем этот образовавшийся комплекс добавляют к лимфоцитамкрови человека. Образуется розетка, которая внешне ничем не отличается от Е-розеток, но метод получения указывает на выявление именноВ-лимфоцитов.

б) Реакция иммунофлюоресценции позволяет обнаружить на поверхности В-лимфоцита иммуноглобулиновые рецепторы. Для этого используются антиглобулиновые сыворотки, меченые люминофорами.

в) Реакция роэеткообразования с мышиными эритроцитами появляется в результате смешивания последних с лимфоцитами периферической крови.

Функциональная характеристика В-лимфоцитов и количества иммуноглобулинов различных классов.Чаще других используется метод радиальной иммунодиффузии в агаре: на стеклянную пластину наливают расплавленный агар, содержаций антитела к даннному классу иммуноглобулинов. В агаре выбивают лунки, в которые вносят образцы изучаемых сывороток. В результате иммунонреципитации, образуются радиальные полоски, диаметр которых зависит от концентрации соответствующего иммуноглобулина. -Определение антител к аутоантигенам или к микробам нормальной микрофлоры.

-Определение титра специфических антител, выраоатывающихся в организме человека после

иммунизации его вакцинами (АВДСДС и др.)