- •Тема 1. Строение и функции белков
- •Проведение анализа
- •Тема 1. Строение и функции белков Лабораторная работа № 2
- •Проведение анализа
- •Тема 2. Ферменты
- •Проведение анализа
- •Тема 3. Биосинтез нуклеиновых кислот и
- •Проведение анализа
- •Тема 4. Введение в обмен веществ.
- •Лабораторная работа № 5
- •Проведение анализа
- •Тема 5. Химия и обмен углеводов
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 6. Химия и обмен липидов
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 7. Белковый обмен
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Коэффициент Де Ритиса
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 8. Обмен сложных белков
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 9. Биохимия крови и мочи
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 10. Гормональная регуляция метаболизма
- •Проведение анализа
- •Учет результатов
- •Тема 11. Биохимия слюны
- •Проведение анализа
- •Тема 12. Биохимия костной ткани
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
Проведение анализа
Добавить в кювету |
Опытная проба |
Холостая проба |
Стандартная проба |
1. Образец (например, сыворотка) |
20 мкл |
-- |
-- |
2. Стандарт |
-- |
-- |
20 мкл |
3. Дистиллиро-ванная вода |
-- |
20 мкл |
-- |
4. Реагент 1. |
1 мл |
1 мл |
1 мл |
Перемешать содержимое пробирок, инкубировать 5 мин | |||
5. Реагент 2 |
250 мкл |
250 мкл |
250 мкл |
Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при комнатной температуре или 5 мин при температуре 37С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 550 нм (оптическая плотностьА). Окраска стабильна в течение 30 минут.
Расчет
Расчет по стандарту концентрации мочевой кислоты в биологической жидкости проводят по формуле:
Аоп С (мкмоль/л) = ----------- Сст, Аст |
где Аоп / ст– оптическая плотность опытной и стандартной проб, соответственно;
Сст – концентрация стандарта (мкмоль/л).
Расчет по стандарту концентрации мочевой кислоты в моче проводят по формуле:
Аоп С (ммоль/л) = ----------- Сст 11, Аст |
где Аоп / ст– оптическая плотность опытной и стандартной проб, соответственно;
Сст – концентрация стандарта (мкмоль/л);
11 – коэффициент разведения.
Если концентрация мочевой кислоты превышает 1190 мкмоль/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец (сыворотка или моча) следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.
Клинико-диагностическое значение:Мочевая кислота и ее соли являются конечными продуктами пуринового обмена.
При подагре, наиболее общем осложнении гиперурикемии, повышенный уровень мочевой кислоты в сыворотке крови ведет к образованию вокруг суставов кристаллов моноуреата натрия. Гиперурикемия наблюдается также при заболеваниях почек с пониженной экскрецией отходов жизнедеятельности, при голодании, употреблении наркотиков, избыточном потреблении алкоголя, а также при приеме некоторых лекарств. Гиперурикемия – составная часть непрямого фактора риска коронарной болезни сердца.
Гипоурикемия наблюдается редко и связана с редкими наследственными нарушениями метаболизма.
Лабораторная работа № 16.
Определение концентрации общего билирубина в сыворотке крови
Принцип метода: В кислой среде в присутствии диазотированного 2,4-дихлоранилина билирубин образует азосоединение красного цвета. Специфическая смесь детергентов делает возможным надежное и точное определение общего билирубина.
Интенсивность окраски раствора при длине волны 540-560 нм прямо пропорциональна концентрации билирубина в нем.
Линейность метода:1,7 - 513 мкмоль/л.
Норма:
Сыворотка крови – 1,7-21 мкмоль/л (25-37С).
Концентрация общего билирубина сохраняется стабильной, при условии непопадании солнечного света на образцы, в сыворотке/ гепаринизированной или ЭДТА-плазме в течение 1 дня при комнатной температуре, при температуре хранения 2-8С – в течение 7 дней, при температуре –20С – в течение 3 месяцев.
Оборудование и реагенты:
Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 540-560 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 25-37С;
Секундомер;
Автоматические пипетки на 25 мкл, 250 мкл и 1000 мкл;
Сыворотка крови/ гепаринизированная или ЭДТА-плазма;
Реагент 1 (детергент в ТРИС-буфере, рН 8,2 8 ммоль/л);
Реагент 2 (соляная кислота 30 ммоль/л, 2,4-дихлорфенол 1 ммоль/л, детергент, диазониевая соль);
Стандарт (раствор билирубина, 100 мкмоль/л);
Дистиллированная вода.