Лабораторное занятие

Тема: Диагностика, профилактика и ликвидация паратуберкулеза

Паратуберкулез, или паратуберкулезный энтерит, — хроническая болезнь в основном крупного рогатого скота, которую вызывает Mycobacterium paratuberculosis.

Методы диагностики. Первичный диагноз устанавливают на основании характерных клинических признаков болезни с обязательным подтверждением диагноза лабораторными методами.

Клиническая картина при паратуберкулезе непостоянна и часто имеет много общего с проявлением других болезней. Типичные признаки паратуберкулеза: истощение, понос, вначале перемежающийся, затем постоянный. Снижается удой, появляются отеки в области подгрудка и подчелюстного пространства, глаза западают, кожа становится менее эластичной. Фекалии жидкие, со слизью, с пузырьками газа, иногда с кровью и резким зловонным запахом. Однако у животного сохраняется аппетит, и температура остается нормальной. По мере развития болезни нарастают общее угнетение животного, вялость. Резко выражена шилозадость. Слизистые оболочки бледные, к концу болезни аппетит обычно отсутствует, усиливается жажда.

Для уточнения диагноза прибегают к патологоанатомическому методу исследования.

Лабораторные методы включают в себя бактериологическое и гистологическое исследования.

Мазки (не менее 10) из соскобов со слизистой оболочки прямой кишки и из каловых масс окрашивают по Цилю—Нильсену. При этой окраске темно-красные микобактерий паратуберкулеза располагаются на синем фоне кучками по 2...3 и больше.

Чистую культуру получают, высевая патологический материал на модифицированную казеиновую среду Дюбо—Смита с добавлением фактора роста (экстракт микобактерий тимофеевой травы) и для контроля — на среду Петраньяни. Посевы выдерживают при температуре 38 "С в течение 2...4 мес. Культура вырастает в виде плоских колоний с ядром в центре, которые в дальнейшем приобретают бугристость. Сроки роста от 18 дней до 3 мес.

Возбудитель паратуберкулеза непатогенен для лабораторных животных.

При отрицательных результатах бактериологического исследования прибегают к диагностическому убою. На вскрытии характерную картину для паратуберкулезного энтерита всегда обнаруживают в тонком отделе кишечника. Подтверждают диагноз микроскопией мазков со слизистой оболочки пораженных кишок и гистологическим исследованием материала.

Для гистологического анализа вырезают кусочки из стенки кишечника шириной до 2 мм, из лимфатических узлов — не толще 2 мм и готовят срезы. Одну часть препаратов окрашивают гематоксилин-эозином, а другую — по Цилю—Нильсену для обнаружения возбудителя. Гистологические изменения при паратуберкулезе отличаются от изменений при энтеритах другой этиологии наличием типичных разростов эпителиоидных клеток в слизистой

Рис. 11. Утолщение и поперечная складчатость слизистой оболочки кишечника при паратуберкулезе

оболочке, а иногда в подслизистом слое. Разросты располагаются диффузно и в виде гранулем, среди которых находятся и гигантские клетки типа Лангерганса. В срезах, окрашенных по Цилю—Нильсену, микобактерий паратуберкулеза обнаруживают в эпителиоидных и гигантских клетках и реже — вне их.

Для массовой диагностики паратуберкулеза в неблагополучных хозяйствах используют аллергические и серологические методы.

Аллергическую диагностическую пробу ставят с птичьим туберкулином. Аллерген вводят внутрикожно в дозах (мл): телятам до Змее —0,1; от 6 до 12 мес —0,15; от 1 года до 2 лет —0,2; до 3 лет —0,3; старше 3 лет — 0,4...0,5 . Реакцию учитывают через 48 ч. При образовании разлитого отека на месте введения препарата и утолщения кожной складки на 7 мм и более результат считают положительным, при менее выраженной реакции и утолщении кожи от 5 до 7 мм — сомнительным. Всем животным с отрицательной и сомнительной реакцией аллерген вводят повторно через 48 ч, реакцию учитывают через 24 ч. Овцам птичий туберкулин вводят на внутренней поверхности бедра в дозе 0,3 мл однократно, реакцию учитывают через 48 ч. За положительный результат принимают выраженный воспалительный отек на месте введения туберкулина.

Серологическими методами исследуют животных старше 18 мес в соответствии с временным наставлением по постановке РСК для диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец (с антигеном Сибирского научно-исследовательского ветери­нарного института).

Профилактические и оздоровительные мероприятия. В зоне, неблагополучной по паратуберкулезу, в системе профилактических мероприятий предусмотрена регулярная диспансеризация с целью контроля за общей резистентностью организма животных, состоя­нием их минерального и витаминного обмена.

При появлении в хозяйстве болезни все поголовье исследуют клиническим, серологическим и аллергическим методами. Больных животных, подозрительных по заболеванию, а также с положительным результатом аллергического или серологического ис­следования направляют на убой. При оздоровлении хозяйства руководствуются положениями инструкции «О мероприятиях по профилактике и ликвидации паратуберкулезного энтерита крупного рогатого скота».

Лабораторное занятие

Тема: Диагностика, профилактика и ликвидация лейкоза крупного рогатого скота

Лейкоз крупного рогатого скота — хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы. Возбудитель классифицирован как вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), семейство Retroviridae. В естественных условиях ВЛКРС поражает чаще крупный рогатый скот. Вирус лимфоцитотропен, факторами передачи служат кровь, секреты, экскреты и другие биологические жидкости, контаминированные кровью.

Методы диагностики. Диагноз устанавливают на основании серологических исследований (РИД), данных клинического, гематологического и гистологического исследований.

Эпизоотологический метод диагностики используют в качестве ориентировочного, с его помощью исключают наличие других инфекционных болезней..

Клинический метод малонадежен, однако необходим при первичной диагностике. Осматривают доступные для исследования наружные и внутренние лимфатические узлы. Обращают внимание на упитанность животного, затрудненность дыхания, акт глотания, наличие опухолей, пучеглазия и т.д. При поражении жизненно важных органов можно наблюдать самую разнообразную патологию — истощение, расстройство функции сердечно-сосудистой системы, отеки и т. д. Выраженные клинические признаки проявляются у животных лишь в терминальной стадии заболевания.

Специфические признаки при лейкозах: лимфатические узлы (подчелюстные, предлопаточные, надвымянные, глубокие паховые) симметрично или асимметрично увеличены, подвижны, плотной консистенции. Иногда отмечают одно- или двусторонний экзофтальм (пучеглазие).

При ретикулезах соматические лимфоузлы увеличены, поверхностные — малоподвижны, зачастую спаяны с окружающими тканями и кожей.

В терминальной стадии заболевание сопровождается развитием неспецифических признаков: гипотонией или атонией преджелудков, бесплодием, параличами и т. д.

Лейкоз следует дифференцировать от туберкулеза, бруцеллеза, паратуберкулеза, актиномикоза.

Гематологическая диагностика основана на тестировании количественных и качественных изменений форменных элементов крови (табл. 1).

Таблица 1

Количество лейкоцитов и лимфоцитов в 1 • 1 -3 мл крови

Возраст животного, лет	Количество лейкоцитов (в том числе лимфоцитов, %) в крови здорового животного (до)	Количество лимфоцитов в крови животного
		Подозрительного по заболеванию (до)	Больного (свыше)
2…..4 2...4	11000(80)	10000	10000
4…6	10000 (70)	9000	9000
Старше 6	9000 (65)	8000	8000

Показателями служат общее количество лейкоцитов в 1 X 10^-3 мл крови, относительное (%) и абсолютное количество лимфоцитов и других групп лейкоцитов, а также наличие недифференцированных и патологических форм клеток.

Результаты гематологических исследований оценивают с учетом возраста животных в соответствии с диагностическим «лейкозным ключом», применяемым в РФ согласно действующей инструкции по борьбе с лейкозом.

Стойкий или прогрессирующий лейкоцитоз (Рис.1) и лимфоцитоз, отмеченные при трехкратном исследовании (с интервалом 2...3 мес) - достоверный показатель лейкоза.

Рис. 1: Увеличение содержания лейкоци­тов в крови животного при лейкозе:

1 — лейкоциты; 2 — эритроциты

Необходимо учитывать, что гематологическим методом не всегда удается диагностировать болезнь. Нередки случаи алейкемического течения заболевания, когда картина крови остается в пределах нормы, характеризуется несколько пониженным общим количеством форменных элементов. Именно в этих случаях особенно велико значение всего комплекса диагностических методов.

При массовых гематологических исследованиях крупного рогатого скота на лейкоз следует учитывать возможность у животных лейкемоидных реакций, обусловленных развитием таких патологических процессов, как туберкулез, бруцеллез, маститы, эндометриты, токсикозы и др. При данных заболеваниях в отличие от лейкоза изменения в показателях крови обычно носят временный характер.

Серологические тесты направлены на выявление в сыворотке крови животных антител к специфическим антигенам ВЛКРС, с которым ассоциирован лейкоз. Основной и наиболее доступный метод серодиагностики — РДП в агаровом геле (Рис.2.).

В качестве антигенов используют: гликопротеидный антиген (ГП), входящий в состав оболочек ВЛКРС; полипептидный антиген (р24) — внутренний белок ВЛКРС; двойной антиген (ГП + р24).

Обнаружение в РДП сывороточных преципитирующих антител к антигенам ВЛКРС отражает развитие у животного лейкоза.

Сравнительные данные, полученные в результате диагностики лейкоза с помощью гематологического и серологического тестов, свидетельствуют о преимуществах последнего.

Рис. 2. Результат исследования сывороток крови в РДП на лейкоз (схема):

АГ — антиген; СПС — контрольные специфические сыворот­ки; 1...4— исследуемые сыворотки

Патологоанатомические изменения при разных формах лейкоза различаются.

При собственно лейкозах (гемабластозах) селезенка увеличена (при всех формах), размер зависит от стадии заболевания (до 1 м в длину). Отмечают гиперплазию фолликулов. Возможен разрыв капсулы с последующим кровоизлиянием в брюшную полость.

Лимфоузлы увеличены в начале заболевания незначительно, в терминальной стадии—до 20x10см (надвымянные). Капсула гладкая, легко снимающаяся. На разрезе ткань лимфоузлов саловидная, рисунок ее сглажен.

В других органах патологические изменения устанавливают в поздние сроки развития заболевания. В печени, сердце, почках могут быть диффузные или очаговые разрастания серо-белого или серо-розового цвета.

При ретикулезах обнаруживают следующие изменения. Селезенка при лимфо- и ретикулосаркоме без изменений, при системном ретикулезе и лимфогрануломатозе всегда увеличена. Лимфоузлы увеличены неравномерно в различных областях тела. Капсула шероховатая, часто сросшаяся с соседними тканями и органами. Характерны опухолевидные разрастания различных размеров — от горошины до больших конгломератов (25...30 кг). Опухоли плотные, серо-белого цвета, с очагами некроза и крово­излияний (мраморный вид). В паренхиматозных органах отмечают дистрофические изменения. В сердце, сычуге, матке, почках возможны разрастания опухолевой ткани.

Гистологическое исследование обязательно для подтверждения диагноза на лейкоз. С помощью данного метода определяют форму болезни в зависимости от характера клеток пролиферата, степени их дифференцировки, а также устанавливают стадию патологического процесса.

При собственно лейкозах гистологическим методом обнаруживают следующие изменения: при лимфолейкозе — избыточное образование в ткани селезенки и лимфоузлов клеток лимфоидного ряда с последующей метаплазией костного мозга и появлением в ряде случаев инфильтративных разрастаний в органах, не связан­ных с кроветворением у взрослых животных; при миелолейкозе — поражение в первую очередь костного мозга и селезенки: нарушенную клеточную структуру этих органов, пролиферацию малодифференцированных полиморфноядерных клеточных форм и присутствие миелоидных элементов. При гемобластозе развитие кроветворных органов прекращается на стадии малодифференцированных родоначальник клеток преимущественно в костном мозге и селезенке с последующим распространением процесса на лимфатические узлы и вовлечением ретикулоэндотелиальнои системы всего организма.

Для ретикулезов также характерны различные изменения. При системном ретикулезе поражаются костный мозг, селезенка, лимфоузлы. В них наблюдают диффузную пролиферацию малодифференцированных полиморфноядерных ретикулярных клеток. В патологический процесс вовлекаются также сердце, сычуг, кишеч­ник, почки, матка, легкие и другие органы с развитием в них опухолевых разрастаний недифференцированных ретикулярных элементов. При лимфо- и ретикулосаркоме поражения селезенки и костного мозга отсутствуют. Пролиферация лимфоидных элементов клеток (при лимфосаркоме) или ретикулярных (при ретикулосаркоме) возникает в лимфоузлах, сычуге, сердце, кишечнике, матке. При лимфогрануломатозе поражаются лимфоузлы с вовлечением в ряде случаев селезенки и других органов. Клеточный состав пораженных органов полиморфен. Для этой формы ретикулезов характерно появление гигантских клеток Березовского— Штернберга.

Диагноз на лейкоз считают установленным, а хозяйство небла­гополучным по этой болезни:

- если серологическим методом выявлены антитела к вирусу лейкоза крупного рогатого скота;

- если клинические, гематологические и патологоанатомические изменения, характерные для лейкоза, подтверждены гистологическими исследованиями, а при жизни у этих животных установлены специфические антитела к ВЛКРС.

Животных, у которых в крови обнаружены специфические антитела к ВЛКРС, но отсутствуют гематологические изменения и клинические признаки, оценивают как инфицированных вирусом лейкоза.

Животных, у которых установлены в крови антитела к ВЛКРС, а также гематологические изменения или клинические признаки, характерные для лейкоза, оценивают как больных лейкозом.

Профилактические и оздоровительные мероприятия. Система мероприятий по профилактике и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота определена инструкцией.

Лабораторное занятие