Частная бактериология

121

Под действием пенициллина гонококки способны образовывать L-формы: округлые образования, превышающие в несколько раз в диаметре исходные клетки (рисунок 2.29).

Рисунок 2.29 - L-формы гонококков (указаны стрелкой). Заимствовано из Интернетресурсов.

Гонококки образуют нежную капсулу (рисунок 2.30) и пили, спор не образуют.

Капсула

Рисунок 2.30 - Капсула у гонококков. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Культуральные свойства. Гонококки являются аэробными микроорганизмами. Оптимальная температура культивирования 37ОС, оптимальное значение рН - 7,2-7,4. Гонококки требовательны к питательным средам. Для их выращивания используют среды, содержащие кровь, сыворотку крови или асцитическую жидкость. На плотных питательных средах через 24 часа инкубирования при оптимальной температуре гонококки образуют слегка мутные или прозрачные бесцветные колонии круглой формы с ровными краями диаметром 1-3 мм. На средах с кровью гемолиза не вызывают (рисунок 2.31).

122

Рисунок 2.31 - Колонии гонококка на кровяном агаре. Заимствовано из Интернетресурсов.

В жидких питательных средах гонококки образуют поверхностную пленку, через несколько дней оседающую на дно пробирки.

Биохимическая активность гонококков крайне низкая. Они разлагают только глюкозу с образованием кислоты без газа (рисунок 2.32), продуцируют каталазу и цитохромоксидазу.

Глюкоза

Мальтоза

Лактоза

Сахароза

Рисунок 2.32 – Ферментация углеводов гонококками.

Протеолитическая активность отсутствует, аммиака, сероводорода и индола не образуют.

Резистентность. Гонококки неустойчивы во внешней среде. При температуре 56ОС они погибают в течение 5 минут, при 100ОС - мгновенно. Гонококки чувствительны к действию многих антисептиков и дезинфектантов. Они обладают высокой чувствительностью ко многим антибиотикам, в том числе к пенициллинам. Однако в последнее время получили распространение штаммы, устойчивые к антибиотикам. В частности, штаммы, устойчивые к пенициллину, продуцируют β-лактамазы, синтез которых обусловлен наличием R-плазмид.

Антигенная структура. Гонококки содержат следующие антигены:

-соматический антиген;

-капсульный антиген;

-липоолигосахарид (ЛОС);

-антигены пилей;

-белки наружной мембраны.

123

Среди антигенов гонококков основная роль принадлежит антигенам пилей и белкам наружной мембраны. Пили состоят из белковых субъединиц, остатков сахаров и фосфорной кислоты. Последовательность соединения белковых субъединиц пилей может меняться, в результате чего изменяются антигенные свойства клеток. Наружная мембрана содержит протеины разных классов. Эти протеины проявляют сильные иммуногенные свойства. По составу протеинов наружной мембраны выделяют несколько серотипов гонококков. Антитела к протеинам клеточной стенки гонококков в присутствии комплемента проявляют бактерицидные свойства.

Факторы патогенности гонококков (рисунок 2.33):

-капсула;

-пили (фимбрии);

-липоолигосахарид (ЛОС);

-поверхностные белки наружной мембраны;

-трансфериновые рецепторы TbrA и TbrB;

-IgA-протеаза;

-гиалуронидаза;

-рибосомальный белок.

	L12-протеин	Rmp
Капсула
		Ора
IgA-Протеаза		Пили
		Por

Гиалуронидаза

ЛОС

TbrA, TbrB

Рисунок 2.33 – Основные факторы патогенности гонококков.

Все свежевыделенные культуры имеют капсулу, которая состоит из полифосфатов. Капсула препятствует фагоцитозу и маскирует антигены клеточной стенки гонококков.

Пили (рисунок 2.34) состоят из белка пилина и обеспечивают адгезию гонококка к эпителиальным клеткам. Изменение структуры пилина приводит к изменению антигенного состава фимбрий. Вариабельность строения пилей способствует выживаемости гонококков на эпителиальных клетках при смене хозяина и воздействии антител. Клетки, не имеющие пилей, заболевания не вызывают. Утрата гонококками пилей называется сменой фаз роста. Смена фаз роста позволяет гонококкам отрываться от эпителиальных клеток и разноситься по организму.

124

Капсула

Пили

Рисунок 2.34 - Капсула и пили гонококков, компьютерная визуализация. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Липоолигосахарид (ЛОС) гонококков отличается от липополисахаридов других грамотрицательных бактерий тем, что имеет ядро и не имеет боковой цепи (О-антигена). Липоолигосахарид способен изменять антигенный состав, что позволяет гонококкам уклоняться от воздействия иммунной системы. Липоолигосахарид обусловливает продукцию медиаторов воспаления – цитокинов. Схожесть гонококкового липоолигосахарида с гликосфинголипидом мембран клеток организма человека позволяет микробу избегать иммунного распознавания.

Поверхностный белок наружной мембраны I класса (белок РI, Por-

белок) является порином. Он встраивается в наружную мембрану эпителиальных клеток и формирует в ней каналы, что способствует проникновению возбудителя в клетки. Внутри эпителиальных клеток этот белок препятствует слиянию лизосомы с фагосомой, в результате чего гонококки длительное время остаются жизнеспособными внутри клеток.

Поверхностный белок II класса (Ора-протеин, протеин мутности,

инвазин) способствует плотному прилеганию гонококков к эпителиальным клеткам и их инвазии внутрь клеток. Наличие этого белка обусловливает мутность колоний гонококков (например, при исследовании материала из уретры мужчин). При отсутствии этого белка колонии гонококков становятся прозрачными (в частности, при исследовании крови, синовиальной жидкости).

Поверхностный белок III класса (Rmp-белок) осуществляет защиту гонококка от антител класса IgM.

Трансфериновые рецепторы TbrA и TbrB взаимодействуют с трансферином человека и извлекают из него железо (“железо-добывающие” белки).

IgA-протеаза расщепляет секреторный иммуноглобулин А, в результате чего инактивируются антитела слизистых оболочек, препятствующие адгезии бактерий к рецепторам эпителиальных клеток.

Гиалуронидаза способствует распространению гонококков в межклеточном пространстве.

Рибосомальный белок (L12-протеин) отвечает за возникновение восходящей гонореи у женщин.

Эпидемиология. Гонорея относится к наиболее распространенным инфекционным заболеваниям, передаваемым половым путем. В мире ежегодно более 60

125

млн. человек заболевают этой инфекцией. В частности, в Российской Федерации в 2005 г. было зарегистрировано 99911 случаев гонококковой инфекции, в 2008 г. – 80100 случаев.

Источником инфекции при гонорее является больной человек, особенно с хронической бессимптомно протекающей формой болезни. Механизм передачи возбудителя - контактный, путь передачи - половой. Восприимчивость к гонококковой инфекции очень высокая.

Патогенез. Входными воротами для возбудителя гонококковой инфекции служит цилиндрический эпителий уретры, шейки матки, конъюнктивы, глотки и дистального отдела прямой кишки. На слизистой оболочке гонококки с помощью пилей закрепляются на поверхности эпителиальных клеток. В месте входных ворот посредством IgA-протеазы и поверхностных белков возбудитель подавляет защитные факторы организма и размножается, колонизируя эпителий (рисунок

2.35).

Рисунок 2.35 - Колонизация гонококками слизистой оболочки (компьютерная визуализация). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Под действием ЛОС происходит синтез цитокинов, вызывающих развитие воспалительной реакции. В результате этого наступает гибель и слущивание эпителиальных клеток, нарушается процесс самоочищения слизистых оболочек. Затем Por-белок гонококка встраивается в мембрану эпителиальных клеток, и с помощью Ора-белка наружной мембраны возбудитель проникает путем эндоцитоза (“непрофессионального” фагоцитоза) внутрь эпителиальной клетки с образованием фагосомы. Внутри клетки фагосомы сливаются, формируя вакуоли, в которых гонококки размножаются. В дальнейшем вакуоли сливаются с базальной мембраной эпителиальных клеток, а гонококки проникают в субэпителиальную ткань или в кровоток. В субэпителиальной ткани часть гонококков, сохранивших пили, прикрепляется к клеткам и перемещается на соседние участки. Другая часть гонококков поглощается фагоцитами и инфицирует ткани. Гематогенное диссеминирование инфекции отмечают у 1% заболевших. Таким образом, в развитии гонококковой инфекции возможны локальные или системные проявления

(рисунок 2.36).

126

Локальная инфекция

гранулоцит

прилипание

внедрение

внутриклеточное

существование

моноцит

лимфоцит	эндотелиальная клетка

Системная инфекция

Рисунок 2.36 - Патогенез гонококковой инфекции. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Генерализованная гонококковая инфекция возникает редко. При генерализованной форме поражаются суставы, кожа, сердце, мозговые оболочки.

Клиника. Инкубационный период составляет от 12 часов до 7 суток (в среднем 3 суток). У женщин и у 10% мужчин гонококковая инфекция протекает бессимптомно. Гонококковая инфекция проявляется в виде гнойного воспаления слизистой мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз (бленнорея) и других органов. Гонококковый уретрит (воспаление слизистой мочеиспускательного канала) – самое частое проявление гонореи у мужчин. При этом отмечается острое начало заболевания с обильными гнойными выделениями из уретры (рисунок 2.37), резью и болью при мочеиспускании.

Рисунок 2.37 - Гонококковый уретрит. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

У женщин гонорея проявляется гонококковым цервицитом - поражением шейки матки и эндоцервикального канала (рисунок 2.38).

127

Рисунок 2.38 - Гонококковый цервицит. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Практически всегда гонококковый цервицит протекает бессимптомно. В редких случаях отмечаются жалобы на появление скудных выделений из влагалища и боль в нижней части живота. Бессимптомное течение приводит к раннему развитию осложнений гонококковой инфекции.

При гонококковом проктите (рисунок 2.39) наиболее часто отмечаются зуд, жжение в заднем проходе, незначительные гнойные выделения, болезненные позывы к дефекации.

Рисунок 2.39 - Гонококковый проктит. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Гонококковый фарингит (рисунок 2.40) возникает вследствие орогенитальных половых контактов. Клинически гонококковый фарингит зачастую протекает бессимптомно и обнаруживается лишь при бактериологическом исследовании. Изредка пациентов могут беспокоить сухость и першение в глотке, боль, усиливающаяся при глотании.

128

Рисунок 2.40 - Гонококковый фарингит. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Гонококковый конъюнктивит (рисунок 2.41) сопровождается резкой болезненностью, слезотечением, припухлостью век, светобоязнью, появлением обильного гнойного отделяемого. Чаще поражается один глаз.

Рисунок 2.41 - Гонококковый конъюнктивит. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Гонококковая инфекция имеет тенденцию к переходу в хроническую бессимптомную форму. При отсутствии лечения гонорея часто является одной из основных причин бесплодия как у мужчин, так и у женщин.

Диссеминированная гонококковая инфекция возникает при гонококковой бактериемии. Диссеминация сопровождается петехиальными или пустулезными высыпаниями на коже, артралгией, артритом, эндокардитом, менингитом.

Особое значение имеет гонорея новорожденных. До 50% новорожденных заражается гонореей от больной матери при прохождении через родовые пути. В этом случае развивается офтальмия новорожденных (бленнорея, гонобленнорея, неонатальная гонококковая инфекция). Офтальмия новорожденных обнаруживается у ребенка на 2-3 день после рождения. Вначале она проявляется водянистыми желтоватыми выделениями из глаз. Через сутки отмечается сильная отечность и покраснение век, а выделения становятся мутными. Еще через 4-5 дней краснота век уменьшается, выделения приобретают гнойный характер (рисунок 2.42).

129

Рисунок 2.42 - Офтальмия новорожденных. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

В этот период в процесс может вовлекаться роговая оболочка с образованием язв, на месте которых формируются рубцы, что может привести к слепоте.

Иммунитет после перенесенной гонореи практически отсутствует, поэтому могут регистрироваться повторные заболевания.

Лабораторная диагностика. В зависимости от локализации патологического процесса материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища, шейки матки, прямой кишки, глотки, с конъюнктивы глаза, а также сыворотка крови. При диагностике гонококковой инфекции применяют бактериоскопический, бактериологический (культуральный), серологические и молекулярно-биологические методы.

Бактериоскопическое исследование является наиболее распространенным методом диагностики гонореи, особенно у мужчин. При этом готовят два мазка, один из них окрашивают метиленовым синим, а другой - по Граму. При окраске метиленовым синим на фоне лейкоцитов и эпителиальных клеток, цитоплазма которых окрашена в бледно-голубой цвет, выделяются кокки интенсивно синего цвета. В мазке, окрашенном по Граму, на розовом фоне протоплазмы лейкоцитов выделяются гонококки ярко-розового цвета. В окрашенных препаратах наблюдается незавершенный фагоцитоз (рисунок 2.43).

а б Рисунок 2.43 - Гонококки в гнойном отделяемом (незавершенный фагоцитоз),

окраска метиленовым синим (а) и по Граму (б). Стрелками указаны микробные клетки. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Для дифференцировки гонококков от других грамотрицательных бактерий применяют реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), при которой мазки обрабатывают противогонококковыми антителами, мечеными флюоресцентным красителем (рисунок 2.44).

130

Рисунок 2.44 – Иммунофлюоресцентная микроскопия гонококков. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Иммунофлюоресцентный метод позволяет выявлять гонококки при наличии в исследуемом материале ассоциаций микроорганизмов.

Бактериологическое (культуральное) исследование проводят при отрицательных результатах бактериоскопического исследования, при выявлении подозрительных на гонококк бактерий и для установления излеченности гонореи. Этот метод позволяет выявлять гонококки в 1,5-4 раза чаще, чем микроскопическое исследование. Посев материала производят сразу после отбора на сывороточный или асцитический агар. При невозможности посева после сбора материала используют транспортные среды (среда Стюара, транспортная среда в модификации ЦКВИ). Добавление к среде ристомицина и полимиксина М (10 ЕД/мл) значительно повышает высеваемость гонококков. Посевы инкубируют в атмосфере углекислого газа (10%).

Серологический метод используют при хронической гонорее, а также в случае отсутствия у больного выделений. В качестве серологического метода используют РСК (реакцию Борде-Жангу). Реакция становится положительной с 3-4 недели заболевания. При острой форме болезни она положительна у 35% больных, при хронической форме - у 65% (слабоположительная у 100%). В качестве антигена для РСК применяют гоновакцину или антиген из убитых гонококков. Однако реакция Борде-Жангу имеет вспомогательное значение, она непригодна для доказательства гонококковой инфекции и установления излеченности. Поэтому в последние годы эта реакция используется редко.

Иммуноферментный анализ позволяет определять антигены гонококка. Он является дополнительным диагностическим методом для обнаружения возбудителя.

В настоящее время для диагностики гонореи рекомендована полимеразная цепная реакция (ПЦР). Для забора материала используются эндоцервикальные, влагалищные тампоны и мужские уретральные тампоны. Методом ПЦР можно исследовать и мочу. Этот метод не рекомендован для исследования материала из ротоглотки и прямой кишки в связи с возможностью перекрестных реакций с другими нейссериями. С помощью ПЦР можно одновременно определять наличие в исследуемых образцах гонококков и хламидий.

Из числа молекулярно-биологических методов используется также ЛЦР (лигазная цепная реакция). Она также позволяет одновременно выявлять в пробах наличие гонококков и хламидий.