103. Морфологические и тинкториальные свойства дифтерийной палочки.
Морфологические:
клетки булавовидно утолщены на концах,
образуют ветвления, особенно в старых культурах и
содержат зернистые включения.
слегка изогнутые неподвижные палочки длиной 1,0-8,0мкм,
спор и капсул не образуют.
Очень часто имеют вздутия на одном или обоих концах
Тинкториальные: , часто содержат метахроматические гранулы-зерна волютина ( полиметафосфаты), которые при окрашивании метиленовым синим приобретают голубовато-пурпурный цвет. Для их обнаружения предложен особый метод окрашивания по Нейссеру. При этом палочки окрашиваются в соломенно-желтый, а зерна волютина – в темно-коричневый цвет, и располагаются обычно по полюсам. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, граммоположительна, но в старых культурах нередко обесцвечивается и имеет отрицательную окраску по Граму.
104. Культуральные и биохимические свойства дифтерийной палочки.
Культуральные: Дифтерийная палочка является аэробом или факультативным анаэробом, температурный оптимум для роста 35-37 С , оптимальная рн7,6-7,8. К питательным средам не очень требовательны, но лучше растет на средах содержащих сыворотку или кровь. Избирательными для дифтерийных бактерий являются свернутые сывороточные среды РУ или Леффлера, рост на них появляется через 8-12ч. В виде выпуклых, величиной с булавочную головку колоний серовато- белого или желто-кремового цвета. Поверхность их гладкая или слегка зернистая, на периферии колонии более прозрачны, чем в центре. Колонии не сливаются, вследствие чего культура приобретает вид шагреневой кожи. На бульоне рост появляется в виде равномерного помутнения, либо бульон остается прозрачным, а на его поверхности образуется нежная пленка, которая постепенно утолщается, крошится и хлопьями оседает на дно.
Биохимические: ферментируют глюкозу, мальтозу, галактозу с образованием кислоты без газа, НО не ферментируют сахарозу, имеют цистиназу, не имеют уреазы и не образуют индола.
105. Факторы патогенности дифтерийной палочки.
106. Дифтерийный токсин, активация, структура, механизм действия.
Дифтерийный токсин, поступая в кровь, вызывает общую глубокую интоксикацию. Он поражает преимущественно сердечно-сосудистую, симпатико-адреналовую системы и периферические нервы.
Токсин дифтерии проявляет все свойства экзотоксина (термолабильный,высокотоксичный, иммуногенный белок, нейтрализуемый антитоксической сывороткой). Нативный токсин — полипептид с Мг около 72 000; его образуют фрагменты А (проявляет ферментативную активность) и В (взаимодействует с клеточными рецепторами, облегчая проникновение фрагмента А). Клетки всех чувствительных организмов способны рецептировать В-фрагмент и поглощать молекулу посредством эндоцитоза. В кислой среде эндосом (фаголизосом) дисульфидные связи, объединяющие оба компонента, разрушаются, фрагмент В взаимодействует с мембраной эндосомы, облегчая проникновение фрагмента А в цитоплазму. Последний устойчив к денатурации и длительно сохраняется в цитозоле.
Механизм цитотоксического действия токсина дифтерии связан с модификацией белков через АТФ-рибозилирование. Подобным свойством обладают многие токсины, но лишь дифтерийный токсин и токсин A Pseudomonas aeruginosa имеют специфичную мишень — фактор элонгации 2 — трансферазу, ответственную за наращивание (элонгацию) полипептидной цепи на рибосоме.
Токсины дифтерии. Дифтерийный токсин катализирует перенос АТФ-рибозы от цитоплазматического никотин- амиддинуклеотида (НАД) к фактору элонгации 2, приводя к АТФ-рибозилированию гистидиновых остатков в молекуле фактора с необратимым блокированием элонгации полипептидной цепи (то есть любого белкового синтеза). Немодифицированный фактор элонгации 2 образует комплекс с ГТФ и тРНК, связывающийся с мРНК в эукариотических клетках, после чего возможно встраивание аминокислот в синтезируемую белковую молекулу. Токсин дифтерии ингибирует белковый синтез, в том числе и в миокарде, приводя к структурным и функциональным нарушениям, способным вызвать смерть больного. Результат действия токсина дифтерии на нервную ткань — демиелинизация нервных волокон, часто приводящая к параличам и парезам. Способность к токсинообразованию дифтерийной палочки Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы Corynebacterium diphtheriae, инфицированные бактериофагом (р-фаг), несущим ген fox, кодирующий структуру токсина дифтерии. Образование последнего наиболее выражено при вступлении бактериальной популяции в стадию отмирания. Переход умеренного фага в литическую форму мало влияет на синтезтоксина.
Активность токсина дифтерии 1 ЕД Dim дифтерийного токсина равна наименьшей концентрации, убивающей морскую свинку массой 250 г на 4-5-е сутки (около 0,25-0,1 мкл). Для полученияанатоксина (ослабленного нагреванием при 40°С дифтерийного токсина) используют штаммPW-8 либо его варианты — «Массачусетс», «Торонто» и др.