Агглютинация

Агглютинация - склеивание антигеннесущих корпускулярных частиц молекулами специфических антител в присутствии электролитов, которое заканчивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината). Характер осадка зависит от природы антигена: жгутиковые бактерии дают крупнохлопьевидный осадок, безжгутиковые и бескапсульные - мелкозернистый, капсульные - тяжистый. Различают агглютинацию прямую, при которой во взаимодействии со специфическими антителами непосредственно участвуют собственные антигены бактериальной или любой другой клетки, например, эритроцитов; и пассивную, при которой бактериальные клетки или эритроциты являются носителями не собственных, а сорбированных на них чужих антигенов (или антител) для выявления специфических к ним антител (или антигенов).

Реакция агглютинации протекает в две фазы: вначале происходит специфическое взаимодействие активного центра антител с детерминантом антигена, эта стадия может происходить в отсутствие электролитов и не сопровождается видимыми изменениями реагирующей системы. Для второй стадии необходимо наличие электролитов, которые снижают заряд комплексов антиген +антитело и ускоряют процесс их склеивания. Эта фаза заканчивается образованием агглютината.

Зависит ли характер осадка в реакции агллютинации от природы антигена? Да Нет

Реакции агглютинации ставят либо на стеклянных пластинках, либо в стерильных агглютинационных пробирках. Реакции агглютинации на стекле обычно применяют в качестве ускоренного метода обнаружения специфических антител в сыворотке больного или для серологической идентификации возбудителя. В последнем случае обычно используют очищенные (адсорбированные) диагностические сыворотки, содержащие монорецепторные антитела.

Развернутая реакция агглютинации в пробирках позволяет определить количественное содержание антител в сыворотке и при необходимости зарегистрировать факт нарастания титра антител, что имеет диагностическое значение. Для постановки реакции в пробирки вносят разведенную 0,85 процентным раствором хлорида натрия сыворотку и равный объем (обычно 0,5 мл) суспензии стандартного диагностикума (или исследуемой культуры), содержащей в 1 мл 1 млрд бактерий. Учет результатов реакции производят окончательно через 20-24 ч по двум признакам: наличию и величине осадка и степени прозрачности надосадочной жидкости. Оценку осуществляют по четырехкрестной системе. Реакция обязательно сопровождается контролем сыворотки и антигена.

Позволяет ли развернутая реакция агглютинации определить количественное содержание антител?

Реакция пассивной гемагглютинации

Реакцию пассивной гемагглютинации ставят в специальных полистироловых пластинках с луночками, имеющими полусферическое дно. При использовании ее для серологической диагностики в этих луночках готовят двукратные разведения в физиологическом растворе исследуемой сыворотки, и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Учет результатов проводят через 2 часа инкубации при 37 градусов по Цельсию по четырехкрестной системе. При положительной реакции агглютинировавшиеся эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, жидкость становится прозрачной, осадок выглядит в виде маленького «диска» в центре луночки. Титром сыворотки в РПГА считается ее последнее разведение, которое еще дает ярко выраженную гемагглютинацию без значительных признаков наличия «диска».

РПГА может применяться в качестве обнаружения непосредственно в исследуемом материале неизвестных бактерий, вирусов, токсинов. При таком варианте постановки РПГА в роли известного компонента реакции используют эритроциты, адсорбировавшие известные по своей специфичности антитела - антительный эритроцитарный диагностикум. Если исследуемый материал содержит достаточное количество известного антигена, РПГА будет положительна. Выглядит ли положительная РПГА в виде перевернутого зонтика? Нет Да